[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0641 Бусерелина ацетат

|*Бусерелин* +
|*Buserelini acetas* 

*Взамен ФС 42-3172-98*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0641_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

5-Оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-_O_-_трет_-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-_N_-этил-L-пролинамида
ацетат.

Содержит не менее 95,0 % и не более 102,0 % бусерелина
C~60~H~86~N~16~O~13~ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или слегка желтоватый порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость.* Умеренно растворим в воде и хлористоводородной кислоте
растворе 0,01 М.

[discrete]
===== Идентификация

Проводят либо испытания 1 и 2, либо испытания 2 и 3.

. _^1^H-ЯМР-спектроскопия_ (ОФС «Спектроскопия ядерного магнитного
резонанса»)

[none]
* _Растворитель_. Дейтерия оксид—дейтерированная уксусная кислота 20:80.
* Раствор используют свежеприготовленным.
* _Испытуемый раствор_. Раствор субстанции в растворителе с концентрацией 4 мг/мл.
* Раствор используют свежеприготовленным.
* _Раствор стандартного образца бусерелина._ Раствор стандартного образца
бусерелина для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией
бусерелина 4 мг/мл.
* Раствор используют свежеприготовленным.
* _Оборудование._ Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на
протонах не менее 300 МГц.
* _Параметры регистрации ^1^H ЯМР спектров_

[cols="51%,^49%",]
|===

|Ширина спектра |от 0 до 9 м.д.;
|Температура образца |27 °С.
|===

[none]
* _Анализ ^1^H ЯМР спектров:_
** спектр испытуемого раствора должен качественно соответствовать спектру
раствора стандартного образца бусерелина после нормализации обоих
спектров с целью уравнивания их по интенсивности.

[arabic,start=2]
. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме
испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика
бусерелина на хроматограмме раствора стандартного образца бусерелина
(раздел «Количественное определение»).

. _Аминокислотный состав_. Содержание аминокислот должно быть в
следующих пределах (моль/моль): глутаминовая кислота от 0,9 до 1,1;
пролин от 0,8 до 1,2; лейцин от 0,9 до 1,1; гистидин от 0,9 до 1,1;
аргинин от 0,9 до 1,1; серин от 1,4 до 2,0; тирозин от 0,9 до 1,1.
Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых
количествах. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный
анализ» (гидролиз по методу 1 в жидкой фазе, анализ по методу 1 или 7).

[discrete]
===== Испытания

*Прозрачность раствора.* Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл воды должен быть
прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора» должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном
Y~7~ (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

*Удельное вращение.* От –49 до –58 в пересчёте на безводное, свободное от
уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество (1,0 %
раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

*pH.* От 3,5 до 6,2 (0,2 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Буферный раствор._ В химический стакан помещают 11,2 г фосфорной
кислоты концентрированной растворяют в 800 мл воды, доводят значение рН
триэтиламином до 2,5, количественно переносят полученный раствор в
мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до
метки.

_Подвижная фаза (ПФ)_: Ацетонитрил—буферный раствор 200:700.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца примеси
A растворяют в соответствующем объёме ПФ до получения концентрации
1 мг/мл. К 1,0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл испытуемого
раствора.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и
доводят объём раствора ПФ до метки (концентрация бусерелина
0,001 мг/мл).

_Раствор для идентификации примесей_. Содержимое флакона фармакопейного
стандартного образца бусерелина для идентификации примесей (содержит
примеси F и G), растворяют в соответствующем объёме ПФ до получения
концентрации 1 мг/мл.

*Примечание*

Примесь А: [2-D-гистидин]бусерелин [1872434-99-5].

Примесь F: _эндо_-3a-серин-бусерелин.

Примесь G: _эндо_-8a-пролин-бусерелин.

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |250 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный, для
хроматографии, 5 мкм;  | |

|Температура колонки |42 °С; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 220 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования |60 мин. | |
|===

Хроматографируют раствор для идентификации примесей, раствор для
проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для
проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор
сравнения и испытуемый раствор**.**

_Относительное время удерживания соединений_. Бусерелин – 1,0 (около
23 мин); примесь F – около 0,83; примесь A – около 0,91; примесь G –
около 1,26.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси A используют
относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы, для
идентификации пиков примесей F и G используют хроматограмму раствора для
идентификации примесей.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками бусерелина и примеси A должно быть не
менее 1,5.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0641_2.png[]
|===

где	_S~i~_	–	площадь пика любой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика бусерелина на хроматограмме раствора сравнения.


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь А – не более 2,5 %;

- примеси F и G – не более 1% каждая;

- любая другая примесь – не более 0,5 %;

- сумма примесей – не более 4,0 %.

Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,1 %.

*Вода*. Не более 4 % (ОФС «Определение воды», метод 2). Для определения
используют 20 мг (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя
3 мл метанола.

*Уксусная кислота.* От 3 до 7 % (ОФС «Определение уксусной кислоты в
синтетических пептидах»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг
субстанции, растворяют в растворителе состава ПФБ—ПФА 5:95 и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины*. Не более 55,5 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»). Для испытаний готовят исходный раствор
субстанции с концентрацией 1 мг субстанции в 1 мл воды для БЭТ.

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси» со следующими изменениями.

_Раствор стандартного образца бусерелина_. В мерную колбу вместимостью
20 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца бусерелина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца бусерелина и испытуемый
раствор.

Содержание бусерелина C~60~H~86~N~16~O~13~ в субстанции в процентах
(_X_) в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических
растворителей и уксусной кислоты вещество вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0641_3.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика бусерелина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика бусерелина на хроматограмме раствора стандартного образца бусерелина; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца бусерелина, мг; +
	_W_	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%; +
	_A_	–	содержание уксусной кислоты в субстанции,%; +
	_P_	–	содержание бусерелина в фармакопейном стандартном образце бусерелина,%.


[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке, защищённом от света месте при
температуре от 2 до 8 °С.

{asterisk} Приводится для информации

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


