[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


==== ФС.2.1.0507 Митомицин (Mitomycinum)

 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0507_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

Субстанция представляет собой смесь компонентов, продуцируемых штаммом
_Streptomyces caespitosus._

{[(1a__S__,8__S__,8a__R__,8b__S__)-6-Амино-5-метил-8a-метокси-4,7-диоксо-1,1a,2,4,7,8,8a,8b-октагидроазирино[2',3':3,4]пирроло[1,2-_a_]индол-8-ил]метил}карбамат.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % митомицина
C~15~H~18~N~4~O~5~ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. Сине-фиолетовый кристаллический порошок.

*Растворимость*. Легко растворим в диметилацетамиде, умеренно растворим
в метаноле, мало растворим в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
бромидом, в области от 4000 до 400 см^–1^ по положению полос поглощения
должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца
митомицина.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика митомицина на
хроматограмме раствора стандартного образца митомицина (раздел
«Количественное определение»).

[discrete]
===== Испытания

рН раствора. От 5,5 до 7,5 (0,1 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы готовят непосредственно перед использованием.

_Раствор аммония ацетата._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
0,77 г аммония ацетата, растворяют воде и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Метанол—раствор аммония ацетата 200:800.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Метанол—раствор аммония ацетата 500:500.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг
субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора метанолом до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора метанолом до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг
фармакопейного стандартного образца циннамамида, растворяют в метаноле и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу
вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора метанолом до метки.

*Примечание*

Примесь А (циннамамид): (2__E__)-3-фенилпроп-2-енамид [22031-64-7].

Примесь В (митомицин A): +
{[(1a__S__,8__S__,8a__R__,8b__S__)-5-метил-6,8a-диметокси-4,7-диоксо-1,1a,2,4,7,8,8a,8b-октагидроазирино[2',3':3,4]пирроло[1,2-_a_]индол-8-ил]метил}карбамат +
[4055-39-4].

Примесь С (митомицин B): +
{[(1a__S__,8__R__,8a__R__,8b__S__)-8a-гидрокси-1,5-диметил-6-метокси-4,7-диоксо-1,1a,2,4,7,8,8a,8b-октагидроазирино[2',3':3,4]пирроло[1,2-_a_]индол-8-ил]метил}карбамат +
[4055-40-7].

Примесь D (альбомитомицин C): +
{[(1__S__,2__S__,4__S__,5__R__,6__S__,6a__R__,10a__S__,11__S__)-8-амино-9-метил-5-метокси-7,10-диоксо-2,3,6,6a,7,10-гексагидро-1,2,5-эпиметантриил-1__H__,5__H__-имидазо[2,1-_i_]
индол-6-ил]метил}карбамат +
[111750-67-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, деактивированный
по отношению к основаниям, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм,
сферический; |

|Температура колонки |30 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 254 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–10 |100 |0
|10–30 |100 → 0 |0 → 100
|30–45 |0 |100
|45–50 |0 → 100 |100 → 0
|50–55 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Митомицин – 1 (около
21 мин); примесь D– около 0,6; примесь С– около 1,2; примесь А – около
1,3; примесь В – около 1,6.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси А используют
относительное время удерживания соединения и хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы. Для
идентификации пиков примесей С, B и D используют относительное время
удерживания соединений.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси А и митомицина должно быть не
менее 15,0.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания площадь пика
примеси А умножают на 0,35.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей A, B, C и D не должна превышать
площадь пика митомицина на хроматограмме раствора сравнения (не более
0,5 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика
митомицина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать четырёхкратную
площадь пика митомицина на хроматограмме раствора сравнения (не более
2,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика
митомицина на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

*Вода.* Не более 2,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Аномальная токсичность.* Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 0,1 мг митомицина в 0,5 мл воды
для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 10 суток.

*Бактериальные эндотоксины.* Не более 5 ЕЭ на 1 мг митомицина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Депрессорные вещества.* Субстанция не должна обладать депрессорным
действием (ОФС «Испытание на депрессорные вещества»). Тест-доза – 0,1 мг
митомицина в 1 мл воды для инъекций на 1 кг массы животного,
внутривенно.

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография»).

Все растворы готовят непосредственно перед использованием.

_Раствор аммония ацетата._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
2,05 г аммония ацетата, растворяют в 100 мл воды, добавляют 2,8 мл
уксусной кислоты разведённой 12 % и доводят объём раствора водой до
метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Метанол—раствор аммония ацетата 200:800.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Метанол—раствор аммония ацетата 500:500.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в диметилацетамиде и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца митомицина._ В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца митомицина, растворяют в диметилацетамиде и доводят объём
раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг циннамида,
растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до
метки. Смешивают 2,0 мл полученного раствора и 2,0 мл раствора
стандартного образца митомицина.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель фенилсилильный, эндкепированный, для
хроматографии, 10 мкм; |

|Температура колонки |20 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 365 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |100 |0
|5–10 |100 → 0 |0 → 100
|10–11 |0 → 100 |100 → 0
|11–15 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор стандартного образца митомицина и
испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Митомиицн – 1 (около
8 мин); примесь А – около 1,2.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы:

- _разрешение_ _(R~S~)_ между пиками примеси А и митомицина должно быть
не менее 1,8 при 254 нм;

- _фактор асимметрии_ _пика (A~S~)_ митомицина должен быть не более 1,8
при 365 нм.

Содержание митомицина C~15~H~18~N~4~O~5~ в субстанции в пересчёте на
безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество
в процентах (_X_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0507_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика митомицина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика митомицина на хроматограмме раствора стандартного образца митомицина; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца митомицина, мг; +
	_P_	–	содержание митомицина в фармакопейном стандартном образце митомицина,%; +
	_W_	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


