[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===



===== ОФС.1.2.3.0019 Определение сахаров спектрофотометрическим методом

*Взамен ОФС.1.2.3.0019.15*
 

Методы определения сахаров спектрофотометрическим методом основаны на
измерении оптической плотности окрашенных растворов, образуемых при
взаимодействии сахаров с антроновым реактивом (метод 1), орциновым
реактивом (метод 2) и пикриновой кислотой (метод 3).

====== Метод 1

Метод основан на реакции гидролиза сложных углеводов до моносахаров в
сильнокислой среде с их последующей дегидратацией. Образующийся
гидроксиметилфурфурол вступает в реакцию комплексообразования с
антроном, в результате наблюдается появление синевато-зелёного
окрашивания. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию
моносахаров в испытуемом растворе в области концентраций 0,02 –
0,10 мг/мл.

_Испытуемый раствор_. Готовят, как указано в фармакопейной статье.

_Раствор_ _стандартного образца глюкозы_. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца глюкозы, растворяют в воде или как указано в фармакопейной
статье, доводят этим же растворителем до метки и перемешивают. В мерную
колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора, доводят
растворителем до метки и перемешивают. Полученный раствор содержит
0,02 мг/мл глюкозы.

_Раствор сравнения._ В пробирку помещают 3 мл воды, охлаждают на ледяной
бане, прибавляют 6 мл антронового реактива 0,2 %.

В пробирку помещают 3,0 мл испытуемого раствора, охлаждают на ледяной
бане и осторожно прибавляют 6,0 мл антронового реактива 0,2 %,
перемешивают и немедленно нагревают на водяной бане в течение времени,
указанного в фармакопейной статье. Охлаждают и измеряют оптическую
плотность испытуемого раствора в максимуме поглощения при длине волны
625 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора фармакопейного
стандартного образца глюкозы, приготовленного аналогично испытуемому
раствору.

_Построение калибровочного графика._ Вместо использования одного
стандартного раствора, если указано в фармакопейной статье, строят
калибровочный график, используя разведённые растворы стандартного
образца глюкозы с концентрацией от 0,01 до 0,05 мг/мл.

Содержание сахаров в 1 мл испытуемого раствора определяют по
калибровочной кривой зависимости оптической плотности калибровочных
растворов от содержания стандартного образца глюкозы в 1 мл
растворителя.

При анализе декстранов учитывают, что 1 г глюкозы соответствует 0,94 г
декстранов.

====== Метод 2

При нагревании пентоз (или их фосфорных производных) в присутствии
кислот от них отщепляется вода и образуется фурфурол; в присутствии
орцина и железа(III) хлорида при этом появляется зелёное окрашивание.
Чувствительность метода определения значительно выше с рибозой, чем с
дезоксирибозой и гексозами.

_Железа(III) хлорида раствор 0,05 %_ _в хлористоводородной кислоте
концентрированной._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,05 г
(точная навеска) FeCl~3~·6H~2~O, растворяют в хлористоводородной кислоте
концентрированной и доводят объём раствора водой до метки. Срок годности
раствора 1 месяц.

_Орцина раствора 10 % в этаноле_. В мерную колбу из тёмного стекла
вместимостью 100 мл помещают 10 г (точная навеска) орцина, растворяют в
этаноле и доводят объём раствора тем же растворителем. Раствор
используют свежеприготовленным.

_Испытуемый раствор_. Готовят, как указано в фармакопейной статье.

_Раствор стандартного образца рибозы_. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 25 г (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца рибозы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до
метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного
раствора и доводят объём раствора водой до метки. Раствор используют
свежеприготовленным.

_Раствор сравнения._ К 2,0 мл железа(III) хлорида раствора 0,05 % в
хлористоводородной кислоте концентрированной прибавляют 2 мл воды, смесь
встряхивают и прибавляют 0,2 мл орцина раствора 10 % в этаноле. Пробирку
нагревают на водяной бане в течение 20 мин, с последующим охлаждением в
ледяной воде.

В пробирку помещают 2,0 мл испытуемого раствора с содержанием рибозы
2,5 – 25,0 мг/мл, прибавляют 2,0 мл железа(III) хлорида раствор 0,05 % в
хлористоводородной кислоте концентрированной, смесь встряхивают и
прибавляют 0,2 мл орцина раствора 10 % в этаноле. Пробирку нагревают на
водяной бане в течение 20 мин, с последующим охлаждением в ледяной воде,
и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора в максимуме
поглощения при длине волны 670 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм
относительно раствора сравнения. Параллельно измеряют оптическую
плотность раствора фармакопейного стандартного образца рибозы,
приготовленного аналогично испытуемому раствору.

_Построение калибровочного графика._ В 6 пробирок вносят 0,10, 0,20,
0,40, 0,60, 0,80 и 1,0 мл раствора фармакопейного стандартного образца
рибозы, прибавляют воду до 2,0 мл и проводят те же операции, что и с
испытуемым раствором.

Содержание сахаров (пентоз) в 1 мл испытуемого раствора находят по
калибровочному графику зависимости оптической плотности калибровочных
растворов от содержания рибозы в мг/мл.

====== Метод 3

Метод основан на цветной реакции моносахаров с пикриновой кислотой,
протекающей с образованием пикраминовой кислоты в результате
восстановления сахаром группы – NO~2~ до – NH~2~. Интенсивность
образовавшейся окраски пропорциональна количеству определяемого сахара
(0,1 – 0,8 мг/мл) в испытуемом растворе.

_Испытуемый раствор_. Готовят, как указано в фармакопейной статье.

_Раствор стандартного образца глюкозы_. В мерную колбу вместимостью
250 мл помещают 0,05 г (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца глюкозы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до
метки.

Срок годности раствора 10 сут при хранении в прохладном, защищённом от
света месте.

_Раствор сравнения._ К 1,0 мл пикриновой кислоты раствора 1 % прибавляют
3,0 мл натрия карбоната раствора 20 % и количество воды, равного
количеству испытуемого раствора. Колбу нагревают на водяной бане в
течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём
раствора водой до метки.

В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают точное количество испытуемого
раствора указанного в фармакопейной статье, 1,0 мл пикриновой кислоты
раствора 1 %, и 3,0 мл натрия карбоната раствора 20 %. Колбу нагревают
на водяной бане в течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры,
доводят объём раствора водой до метки и измеряют оптическую плотность
испытуемого раствора в максимуме поглощения при длине волны (от 440 до
460 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора фармакопейного
стандартного образца глюкозы, приготовленного аналогично испытуемому
раствору.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


