[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС 2.1.0352 Аспарагиновая кислота (Acidum asparticum)

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

(2__S__)-2-Аминобутандиовая кислота.

L-Аспарагиновая кислота.

Cодержит не менее 98,5 % и не более 101,5 % аспарагиновой кислоты
C~4~H~7~NO~4~ в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные
кристаллы.

*Растворимость*. Мало растворим в воде, практически нерастворим в спирте
96 %.

+*+ Растворяется в разбавленных растворах минеральных кислот и щелочей.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца аспарагиновой кислоты.

. _ТСХ_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* Вещества, окрашивающиеся нингидрином.
* Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная—вода—бутанол 20:20:60.
* _Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг
субстанции, растворяют в аммиака растворе 10 % и доводят объём раствора
водой до метки.
* _Раствор стандартного образца аспарагиновой кислоты._ В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца
аспарагиновой кислоты, растворяют в 2 мл аммиака раствора 10 % и доводят
объём раствора водой до метки.
* На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора и
раствора стандартного образца аспарагиновой кислоты. Пластинку с
нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и
хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около
80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до
удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина раствором
0,2 %, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100–105 °С в
течение 15 мин и просматривают в видимом свете.
* Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора, по
положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции
аспарагиновой кислоты на хроматограмме раствора стандартного образца
аспарагиновой кислоты.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение*. От +24,0 до +26,0 в пересчёте на сухое вещество
(8 % раствор субстанции в хлористоводородной кислоты растворе 6 М,
ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора*. Раствор 0,5 г субстанции в 10 мл
хлористоводородной кислоты растворе 1 М должен быть прозрачным
(ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

*Цветность раствора*. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY~6~ (ОФС «Степень
окраски жидкостей», метод 2).

*pH*. От 2,5 до 3,5 (0,5 г субстанции растворяют в 100 мл кипящей воды и
охлаждают, ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси*

*_1. Энантиомерная чистота_.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Подвижная фаза (ПФ):_ 2-пропанол—меди сульфата пентагидрата раствор
0,5 г/л 5:95 (об/об).

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,10 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси I_. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 0,10 г (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца D-аспарагиновой
кислоты (примесь I), растворяют в воде и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,3 мл
раствора стандартного образца примеси I и доводят объём раствора водой
до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,10 г (точная
навеска) субстанции, растворяют в 90 мл воды, прибавляют 0,3 мл раствора
сравнения и доводят объём раствора водой до метки.

*Примечание*

Примесь I (D-аспарагиновая кислота): (2__R__)-2-аминобутандиовая кислота
[1783-96-6].

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |150 × 4,6 мм, силикагель для хиральной хроматографии,
модифицированный L-пеницилламином, 5 мкм; | |

|Температура колонки |30 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 230 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Время хроматографирования |24__ __мин. | |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси I,
раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания_ _соединений._ Аспарагиновая кислота –
1 (около 12 мин); примесь I – около 0,85.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси I и аспарагиновой кислоты
должно быть не менее 2,0.

Содержание примеси I в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_2.png[] 
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика примеси I на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~o~_	–	площадь пика примеси I на хроматограмме раствора сравнения; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_a~o~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца примеси I, мг; +
	_P_	–	содержание примеси I в фармакопейном  стандартном образце примеси I,%.


Допустимое содержание примеси I не более 0,3 %.

*_2. Другие дикарбоновые кислоты._* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Подвижная фаза (ПФ)_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
900 мл воды, прибавляют 4,0 мл серной кислоты раствора 3,8 М, доводят
объём раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г
(точная навеска) субстанции, прибавляют 2 мл хлористоводородной кислоты
раствора 6 М и встряхивают до полного растворения в течение 10–20 мин,
доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор яблочной кислоты (А)_. В мерную колбу вместимостью 20 мл
помещают 20 мг (точная навеска) яблочной кислоты (примесь А), растворяют
в воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор яблочной кислоты (Б)_. В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 1,0 мл раствора яблочной кислоты (А) и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор малеиновой кислоты_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
10 мг (точная навеска) малеиновой кислоты (примесь Н), растворяют в воде
и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор фумаровой кислоты_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
10 мг (точная навеска) фумаровой кислоты (примесь B), растворяют в воде
и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора
малеиновой кислоты и доводят объём раствором яблочной кислоты (А) до
метки.

*Примечание*

Примесь А (яблочная кислота): (2__RS__)-2-гидроксибутандиовая кислота
[6915-15-7].

Примесь В (фумаровая кислота): (2__E__)-бут-2-ендиовая кислота
[110-17-8].

Примесь H (малеиновая кислота): (2__Z__)-бут-2-ендиовая кислота
[110-16-7].

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |300 × 7,8 мм, сильная катионообменная смола, 9 мкм; | | 
|Температура колонки |30 °С; | | 

|Скорость потока |0,6 мл/мин; | | 

|Детектор |спектрофотометрический, 214 нм; | | 

|Объём пробы |10 мкл; | | 

|Время хроматографирования |4-кратное от времени удерживания пика
примеси B. | | 
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, растворы яблочной кислоты (А и Б), растворы
малеиновой и фумаровой кислот и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Примесь H – 1 (около
7,5 мин); примесь А – около 1,2; примесь B – около 2,0.

_Идентификация примесей_. Для идентификации пиков примесей используют
относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы (примеси
A и H) и хроматограмму раствора фумаровой кислоты (примесь B).

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси H и примеси А должно быть не
менее 1,5.

Содержание примеси А (яблочной кислоты) в субстанции в процентах
(_X~A~_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_3.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика примеси А на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика яблочной кислоты на хроматограмме раствора яблочной кислоты (Б); +
	_a_	–	навеска субстанции, мг; +
	_ɑ~0~_	–	навеска яблочной кислоты, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в яблочной кислоте,%.


Содержание каждой из примесей В и Н в субстанции в процентах
(_X~BH~_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_4.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика примеси В или H на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика малеиновой кислоты на хроматограмме раствора малеиновой кислоты; +
	_a_	–	навеска субстанции, мг; +
	_ɑ~0~_	–	навеска малеиновой кислоты, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в малеиновой кислоте,%.


Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (_X~i~_)
вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_5.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика яблочной кислоты на хроматограмме раствора яблочной кислоты (Б); +
	_a_	–	навеска субстанции, мг; +
	_ɑ~0~_	–	навеска яблочной кислоты, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в яблочной кислоте,%.


_Допустимое содержание примесей_:

- примесь А – не более 0,2 %;

-  примесь B – не более 0,10 %;

-  примесь Н – не более 0,10 %;

- любая другая примесь – не более 0,10 %;

- сумма примесей – не более 0,3 %.

Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,05 %.

*_3. Нингидрин-положительные вещества._* Определение проводят в
соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ» (метод 1).

_Раствор A._ Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М или буферный
раствор для пробоподготовки__,__ подходящий для используемого прибора.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворе A и доводят объём тем
же растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствором A до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствором А до метки.

_Раствор пролина_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 30 мг
(точная навеска) пролина, растворяют в растворе A и доводят объём тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствором А до метки.

_Стандартный раствор_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 30 мг
аланина (примесь D), 60 мг аспарагина (примесь G) и 30 мг глутаминовой
кислоты (примесь С), растворяют в растворе А и доводят объём тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствором А до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мг изолейцина и
30 мг лейцина, растворяют в растворе A и доводят объём тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствором А до метки.

_Контрольный раствор._ Раствор _A_.

*Примечание*

Примесь С (глутаминовая кислота): (2S)-2-аминопентандиовая кислота
[56-86-0].

Примесь D (аланин): (2S)-2-аминопропановая кислота [56-41-7].

Примесь G (аспарагин): (2S)-2-амино-3-карбамоилпропановая кислота
[70-47-3].

Вводят в аминокислотный анализатор подходящие равные объёмы контрольного
раствора, раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы, стандартного раствора, раствора пролина,
раствора сравнения и испытуемого раствора. Используют программу
элюирования, подходящую для определения содержания протеиногенных
аминокислот.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
разрешение _(R~S~)_ между пиками изолейцина и лейцина должно быть не
менее 1,5.

Содержание каждой из примесей C, D и G в субстанции в процентах (_Х_)
вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_6.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика примеси C, D или G на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика примеси C, D или G на хроматограмме стандартного раствора; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, взятая для приготовления испытуемого раствора, мг; +
	_a~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца примеси C, D или G, взятая для приготовления стандартного раствора, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце примеси C, D или G соответственно,%.


Содержание любого другой примеси (нингидрин-положительного вещества),
зарегистрированной при длине волны 570 нм, (_X_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_7.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения.


Содержание любой другой примеси (нингидрин-положительного вещества),
зарегистрированной при длине волны 440 нм, (_X_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0352_8.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика пролина на хроматограмме стандартного раствора; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_a~0~_	–	навеска пролина, взятая для приготовления раствора пролина, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце пролина,%.


Если примесь регистрируется выше порога игнорирования как при 570 нм,
так и при 440 нм, для количественного расчёта используют результат,
полученный при 570 нм.

_Допустимое содержание примесей_:

- примеси С, D и G – не более 0,2 % каждая;

- любая другая примесь – не более 0,10 %;

- сумма примесей – не более 1,0 %.

Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,05 %.

*Потеря в массе при высушивании*. Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная
навеска) субстанции.

*Аммоний*. Не более 0,02 % (ОФС «Аммоний»). Взбалтывают 0,15 г
субстанции с 15 мл воды свободной от аммиака в течение 5 мин и
фильтруют. Для определения используют 10 мл фильтрата.

*Железо*. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС
«Железо» (метод 2) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г
субстанции (ОФС «Сульфатная зола»), с использованием железа стандартного
раствора 10 мкг/мл.

*Сульфаты*. Не более 0,03 % (ОФС «Сульфаты», метод 1). В 4 мл
хлористоводородной кислоты разведённой 8,3 % растворяют 0,5 г субстанции
и доводят объём раствора водой до 15 мл. Для определения используют
10 мл раствора.

*Хлориды.* Не более 0,02 % (ОФС «Хлориды»). В мерную колбу вместимостью
25 мл помещают 0,25 г субстанции, прибавляют в 3 мл азотной кислоты
раствора 12,5 %, доводят объём раствора водой до метки. Для определения
используют 10 мл раствора.

*Сульфатная зола*. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы*. Не более 0,001 %_._ Определение проводят в
соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 2), в зольном остатке,
полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного
раствора 1.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Аномальная токсичность*. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 7,5 мг субстанции в 0,5 мл натрия
хлорида раствора 0,9 % на мышь, внутривенно в течение 30 с. Срок
наблюдения – 48 ч. Испытуемый раствор с концентрацией 15 мг/мл: к
навеске субстанции 900 мг прибавляют 3,4 мл раствора натрия гидроксида
2 М и нагревают до 90–100 °С до полного растворения субстанции, доводят
объём раствора до 10 мл раствором натрия хлорида 0,9 %. К 1,0 мл
полученного раствора прибавляют 5 мл раствора натрия хлорида 0,9 %.

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины*. Не более 10 ЕЭ на 1 г аспарагиновой
кислоты (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с
концентрацией 0,01 г субстанции в 1 мл воды для определения
бактериальных эндотоксинов. При приготовлении исходного раствора
допускается нагревание до температуры 70–80 °С, до полного растворения
субстанции. Разведения исходного раствора субстанции выполняют с
использованием растворов, корректирующих значение pH.

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия
(титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции (при слабом нагревании) в
50 мл воды, охлаждают и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида до
перехода окраски из жёлтой в синюю (индикатор – 0,1 мл бромтимолового
синего раствор 0,05 %).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 13,31 мг
аспарагиновой кислоты C~4~H~7~NO~4~.

[discrete]
===== Хранение

В плотно закрытой упаковке, в защищённом от света месте.

{asterisk} Приводится для информации

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


