
[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС 2.1.0318 Циластатин натрия

*Циластатин* +
*Cilastatinum natricum* 

*Вводится впервые*


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0318_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

(_Z_)-7-[((2__R__)-2-Амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еноат
натрия.

Cодержит не менее 98,0 % и не более 101,5 % циластатина натрия
C~16~H~25~N~2~NaO~5~S в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. Белый или светло-жёлтый аморфный порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость*. Очень легко растворим в воде и метаноле, мало растворим
в этаноле, практически нерастворим в метиленхлориде.

[discrete]
===== Идентификация

. ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца циластатина натрия.

. Качественная реакция._ Субстанция должна давать характерную реакцию
А на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От +41,5 до +44,5 в пересчёте на безводное вещество
(ОФС «Оптическое вращение»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,25 г
субстанции, растворяют в смеси хлористоводородная кислота
концентрированная—метанол 1:120 и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

*Прозрачность раствора.* Раствор субстанции 1 % в воде, свободной от
углерода диоксида, должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень
опалесценции (мутности) жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y~6~ (ОФС «Степень
окраски жидкостей», метод 2).

*pH раствора.* От 6,5 до 7,5 (раствор, полученный в испытании
«Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси*

*_1. Примесь D, ацетон и метанол._* Определение проводят методом ГХ (ОФС
«Газовая хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Раствор внутреннего стандарта._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл
помешают 0,5 мл пропанола, растворяют в воде и доводят объём раствора
водой до метки.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в воде, прибавляют 2,0 мл
раствора внутреннего стандарта и доводят объём раствора водой до метки.

_Стандартный раствор._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
2,0 мл ацетона, 0,5 мл метанола, 0,5 мл мезитилоксида (примесь D) и
доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 2,0 мл полученного раствора, 2,0 мл раствора внутреннего
стандарта и доводят объём раствора водой до метки (концентрация ацетона
около 316 мкг/мл, метанола около 79 мкг/мл; примеси D около 86 мкг/мл).

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|кварцевая капиллярная, 30 м × 0,53 мм, покрытая слоем
макрогола 20 000, 1 мкм; | 
|Детектор |пламенно-ионизационный; | |

|Газ-носитель |гелий для хроматографии; | |

|Скорость потока |9 мл/мин; | |

|Объём пробы |1 мкл; | |

|Температура |Инжектор |160 °С; |

| |Колонка |
50 °С в течение 2,5 мин, +
подъём 8 °С/мин до 70 °С; +
выдержка 2,5 мин;

| |Детектор |220 °С. |
|===

Хроматографируют стандартный и испытуемый растворы.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0318_2.png[]

|===

где	_B~1~_	–	отношение площади каждого из пиков примеси D, ацетона или метанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_B~0~_	–	отношение площади каждого из пиков примеси D, ацетона или метанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_С~0~_	–	концентрация примеси D, ацетона, или метанола в стандартном растворе, соответственно, мкг/мл.


_Допустимое содержание примесей:_

- ацетон – не более 1,0 %;

- метанол – не более 0,5 %;

- примесь D – не более 0,4 %.

_**2. Другие примеси**._ Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы, содержащие циластатин натрия и его примеси, готовят
непосредственно перед применением.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Фосфатный буферный раствор рН 3,25.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил—ПФА 500:500.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 32 мг
субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы А._ В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 3 мг
фармакопейного стандартного образца циластатина для проверки пригодности
системы 1, содержащий примеси А, В, Е, F, G (эпимер 2) и Н, растворяют в
воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы Б._ В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 3 мг
фармакопейного стандартного образца циластатина для проверки пригодности
системы 2, содержащий примеси С и G (эпимер 1), растворяют в воде и
доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор для идентификации пика примеси D._ В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 32 мг мезитилоксида (примесь D), растворяют в воде и
доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до
метки.

*Примечание*

Примесь А: +
(_Z_)-7-[(_RS_)-((2__R__)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфинил]-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая
кислота.

Примесь В: +
(_Z_)-7-{[(2__R__)-2-((1__RS__)-1-метил-3-оксибутил)амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая
кислота.

Примесь С: +
(_Z_)-7-{[(2__R__)-2-((1,1-диметил-3-оксибутил)амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая
кислота.

Примесь D (мезитилоксид): 4-метилпент-3-ен-2-он [141-79-7].

Примесь Е: +
7-[((2__R__)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-оксогептановая кислота
[1174657-07-8].

Примесь F: +
(_Z_)-7-[((2__R__)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-[(2,3-диметилбут-3-еноил)амино]гепт-2-еновая
кислота.

Примесь G: +
€-(2__RS__)-7-[((2__R__)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-3-еновая
кислота.

Примесь Н: +
(_Z_)-7-[(2-аминоэтил)сульфанил]-2-{[((1__S__)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}
гепт-2-еновая кислота.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный совместимый с
водной подвижной фазой эндкепированный для хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |50 °С; | |

|Скорость потока |2,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 210 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–3 |100 |0
|3–28 |100 → 90 |0 → 10
|28–38 |90 |10
|38–63 |90 → 50 |10 → 50
|63–78 |50 → 30 |50 → 70
|78–88 |30 |70
|88–93 |30 → 100 |70 → 0
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы А, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы Б, раствор для идентификации пика
примеси D, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений_. Циластатин – 1 (около
50 мин); примесь Е – около 0,20; примесь A (эпимер 1) – около 0,60;
примесь А (эпимер 2) – около 0,62; примесь D – около 0,90; примесь F –
около 0,98; примесь G (эпимер 1) – около 1,02; примесь G (эпимер 2) –
около 1,05; примесь Н – около 1,06; примесь В – около 1,17; примесь С –
около 1,23.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пиков примесей А, В, Е, F и
G используют хроматограмму раствора для проверки разделительной
способности хроматографической системы А и хроматограмму, прилагаемую к
стандартному образцу циластатина для проверки пригодности системы 1. Для
идентификации пиков примесей С и G используют хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы Б и
хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу циластатина для
проверки пригодности системы 2.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы А
_отношение максимум/минимум (p/v)_ между пиками примеси F и циластатина
должно быть не менее 10,0.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы Б _отношение максимум/минимум (p/v)_ между
пиками циластатина и примеси G (эпимер 1)должно быть не менее 2,5.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания примесей площади
пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь С – 1,3; примесь Е – 3,3; примесь G (эпимер 1) и
примесь G (эпимер 2) – 1,6.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0318_3.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_ -	площадь пика циластатина на хроматограмме раствора сравнения.


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь А (сумма эпимеров) – не более 0,5 %;

- примесь С – не более 0,4 %;

- примесь Е – не более 0,3 %;

- каждой из примеси B, F, H, G (эпимер 1), G (эпимер 2) – не более
0,1 %;

- любая другая примесь – не более 0,05 %;

- сумма примесей – не более 1,0 %.

Не учитывают пик примеси D и пики менее 0,03 %.

*Вода.* Не более 2,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,002 % (ОФС «Тяжёлые металлы», метод 6).

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 0,17 ЕЭ на 1 мг циластатина
натрия (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия
(титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в 30 мл метанола,
прибавляют 5 мл воды, доводят значение рН хлористоводородной кислоты
раствором 0,1 М до 3,0 и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида.
Конечную точку титрования определяют потенциометрически
(ОФС «Потенциометрическое титрование»). Учитывают объём титранта,
израсходованный между первой и третьей точками перегиба на кривой
титрования.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 19,02 мг циластатина
натрия C~16~H~25~N~2~NaO~5~S.

[discrete]
===== Хранение

В сухом месте при температуре от 2 до 8 °С.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


