[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


 
==== ФС.2.1.0386 Булевиртида ацетат

*Булевиртид* +
*Bulevirtidi acetas* 

*Вводится впервые*


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0386_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

_N_-Тетрадеканоилглицил-L-треонил-L-аспарагинил-L-лейцил-L-серил-L-валил-L-пролил-L-аспарагинил-L-пролил-L-лейцил-глицил-L-фенилаланил-L-фенилаланил-L-пролил-L-α-аспартил-L-гистидил-L-глутаминил-L-лейцил-L-α-аспартил-L-пролил-L-аланил-L-фенилаланил-глицил-L-аланил-L-аспарагинил-L-серил-L-аспарагинил-L-аспарагинил-L-пролил-L-α-аспартил-L-триптофил-L-α-аспартил-L-фенилаланил-L-аспарагинил-L-пролил-L-аспарагинил-L-лизил-L-α-аспартил-L-гистидил-L-триптофил-L-пролил-L-α-глутамил-L-аланил-L-аспарагинил-L-лизил-L-валилглицинамида
ацетат.

Cодержит не менее 95,0 % и не более 105,0 % булевиртида ацетата
C~248~H~355~N~65~O~72~·__x__C~2~H~4~O~2~ в пересчёте на безводное и
свободное от остаточных органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый порошок.

*Растворимость.* Мало или очень мало растворим в уксусной кислоте
растворе 50 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»)_._ Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^−1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
стандартного образца булевиртида ацетата.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика булевиртида на
хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата (раздел
«Количественное определение»).

. _Аминокислотный состав_. Содержание аминокислот должно быть в
следующих пределах (моль/моль): аланин от 2,55 до 3,45; аспарагин от
11,05 до 14,95; глутамин от 1,70 до 2,30; глицин от 3,40 до 4,60;
гистидин от 1,70 до 2,30; лейцин от 2,55 до 3,45; лизин от 1,70 до 2,30;
фенилаланин от 3,40 до 4,60; пролин от 5,95 до 8,05; серин от 1,40 до
2,60; треонин от 0,80 до 1,20; валин от 1,70 до 2,30. Остальные
аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах.
Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ»
(гидролиз по методу 1 в жидкой фазе, анализ по методу 1 или 7).

[discrete]
===== Испытания

*Прозрачность раствора*. Раствор 10 мг субстанции в 10 мл уксусной
кислоты раствора 50 % должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и
степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

*Цветность раствора*. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора» должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод
2).

*Родственные примеси*. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Трифторуксусной кислоты раствор 0,1 %.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Трифторуксусная кислота—ацетонитрил 1:999.

_Растворитель._ Ацетонитрил—вода 370:630.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг
субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора
растворителем до метки. Раствор готовят непосредственно перед
применением.

_Раствор стандартного образца булевиртида ацетата_. В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца булевиртида, растворяют в растворителе и доводят
объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,5 мл раствора стандартного
образца булевиртида ацетата и доводят объём раствора растворителем до
метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |150 × 4,6 мм, силикагель фенилгексилсилильный,
эндкепированный, для хроматографии, 2,6 мкм;  | |

|Температура колонки |60 °C; | |


|Температура образца |5 °C; | |


|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |


|Детектор |спектрофотометрический, 220 нм; | |


|Объём пробы | 5 мкл. | |

|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–10 |63 |37
|10–50 |63 → 55 |37 → 45
|50–50,1 |55 → 0 |45 → 100
|50,1–55 |0 |100
|55–55,1 |0 → 63 |100 → 37
|===

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической
системы, раствор стандартного образца булевиртида ацетата и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Булевиртид – 1 (около
32 мин).

_**Пригодность хроматографической системы**_

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика
булевиртида должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата:

- _фактор асимметрии_ _пика_ _(A~S~)_ булевиртида должен быть не более
2,0;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика булевиртида должно
быть не более 2,0 % (6 введений).

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания площадь пика примеси
с относительным временем удерживания около 1,05 умножают на 2.

_Допустимое содержание примесей._ Содержание каждой из примесей в
субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования
(ОФС «Хроматография»):

- примесь с относительным временем удерживания около 1,05 – не более
2,4 %;

- примеси с относительным временем удерживания около 0,97 и 0,99 – не
более 1,0 % каждая;

- любая другая – не более 0,5 %;

- сумма примесей – не более 5,0 %.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на
хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической
системы (менее 0,05 %).

*Уксусная кислота.* Не более 4,0 %. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Буферный раствор._ Растворяют 7 мл фосфорной кислоты и 5 мл аммиака
раствора концентрированного 25 % в 900 мл воды и доводят рН раствора
аммиака раствором концентрированным 25 % до 2,50. Полученный раствор
переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора
водой до метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Метанол—буферный раствор 20:1000.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил—вода 500:500.

_Растворитель._ Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора растворителем до метки.

_Раствор уксусной кислоты._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают
0,107 г (точная навеска) уксусной кислоты ледяной и доводят объём
раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, для
хроматографии, 5 мкм, размер пор 12 нм; | |

|Температура колонки |25 °C; | |

|Скорость потока |1,5 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 210 нм; | |

|Объём пробы |50 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |100 |0
|5–6 |100 → 0 |0 → 100
|6–14 |0 |100
|14–15 |0 → 100 |100 → 0
|15–25 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор уксусной кислоты и испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора
уксусной кислоты:

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика уксусной кислоты
должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- _эффективность хроматографической колонки (N)_, рассчитанная по пику
уксусной кислоты, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание уксусной кислоты в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0386_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме раствора уксусной кислоты; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_a~0~_	–	навеска уксусной кислоты, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в уксусной кислоте,%.


*Трифторуксусная кислота.* Не более 0,1 %. Определение проводят методом
ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Буферный раствор._ Растворяют 1,4 мл фосфорной кислоты
концентрированной в 900 мл воды и доводят рН раствора натрия гидроксида
раствором 10 М до 3,00. Полученный раствор переносят в мерную колбу
вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Метанол—буферный раствор 20:1000.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил—вода 500:500.

_Растворитель._ Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора растворителем до метки.

_Раствор трифторуксусной кислоты._ В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 10 мг (точная навеска) трифторуксусной кислоты, растворяют в
растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
раствора трифторуксусной кислоты и доводят объём раствора растворителем
до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы._ В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мл раствора трифторуксусной
кислоты и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, совместимый с
водной подвижной фазой, эндкепированный, для хроматографии, 4 мкм; | |

|Температура колонки |25 °C; | |

|Скорость потока |0,4 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 210 нм; | |

|Объём пробы |100 мкл. | |
|===

_Режим промывки колонки_

[cols="^35%,^35%,^30%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–15 |100 |0
|15–16 |100 → 0 |0 → 100
|16–24 |0 |100
|24–25 |0 → 100 |100 → 0
|25–45 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической
системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки пригодности хроматографической системы:

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика трифторуксусной
кислоты должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- _эффективность хроматографической колонки (N)_, рассчитанная по пику
трифторуксусной кислоты, должна составлять не менее 2000 теоретических
тарелок.

Содержание трифторуксусной кислоты в субстанции в процентах (_Х_)
вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0386_3.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика трифторуксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика трифторуксусной кислоты на хроматограмме раствора сравнения; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_a~0~_	–	навеска трифторуксусной кислоты, мг; +
	_P_	–	содержание основного вещества в трифторуксусной кислоте,%.


*Вода.* Не более 10 % (ОФС «Определение воды», метод 2).

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Бактериальные эндотоксины*. Не более 10 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси» со следующими изменениями.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца булевиртида ацетата и
испытуемый раствор.

Содержание булевиртида ацетата C~248~H~355~N~65~O~72~·__x__C~2~H~4~O~2~
в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество в процентах (_X_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0386_4.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика булевиртида на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика булевиртида на хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца булевиртида ацетата, мг; +
	_P_	–	содержание булевиртида ацетата в фармакопейном стандартном образце булевиртида ацетата,%; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте при температуре 2–8 °С.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


