[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 
==== ФС.2.1.0122 Левофлоксацин гемигидрат

*Левофлоксацин* +
*Levofloxacinum hemihydricum* 

*Взамен ФС.2.1.0122.18*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0122_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

(3__S__)-3-Метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая
кислота гемигидрат.

Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % левофлоксацина в пересчёте
на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей
вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый с желтоватым оттенком кристаллический порошок.

*Растворимость*. Умеренно растворим в воде, растворим в уксусной
кислоте, мало растворим в спирте 96 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
бромидом, в области частот от 4000 до 400 см^–1^ по положению полос
поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного
образца левофлоксацина.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика левофлоксацина
на хроматограмме раствора фармакопейного стандартного образца
левофлоксацина (раздел «Количественное определение»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От –92 до –106 в пересчёте на безводное вещество
(0,5 % раствор субстанции в метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора.* Раствор 0,5 г субстанции в 100 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y~5~ или GY~5~. (ОФС
«Степень окраски жидкостей»).

*Родственные примеси*

_Энантиомерная чистота._ Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.

_Раствор А._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,32 г
_D_-фенилаланина и 0,75 г меди(II) сульфата, растворяют в воде и доводят
объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—раствор А 150:850.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в 10 мл воды и доводят объём
раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
2,5 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

_Стандартный раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг
(точная навеска) фармакопейного стандартного образца левофлоксацина,
прибавляют 5 мг фармакопейного стандартного образца примеси Е,
растворяют в 10 мл воды и доводят объём раствора водой до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь Е: +
(3__R__)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая
кислота [100986-86-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
3,5 мкм; |

|Температура колонки |40 °С; | |

|Скорость потока |0,7 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 294 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования |30 мин. | |
|===

Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Левофлоксацин – 1; примесь
Е – около 0,91.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси Е используют
относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного
раствора.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме стандартного
раствора:

- _разрешение (R~S~)_ между пиками примеси 5 и левофлоксацина должно
быть не менее 2,0;

- _фактор асимметрии пика (A~S~)_ левофлоксацина должен быть не более
1,5.

_Допустимое содержание примесей_. Содержание примеси Е в субстанции в
процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

- примесь Е – не более 1,0 %.

_Другие примеси._ Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.

В зависимости от способа получения субстанции левофлоксацина гемигидрата
и от предполагаемого наличия примесей, для определения показателя
«Родственные примеси» применяют различные подходы. В случае если
потенциальной примесью является примесь 3, рекомендуется использовать
метод 1. Метод 2 в сочетании с определением энантиомерной чистоты
рекомендуется использовать при потенциальном наличии примеси 6.

*_Метод 1_*

_Раствор А._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г аммония
ацетата, 1,25 г меди(II) сульфата и 1,3 г L-изолейцина, растворяют в
воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—раствор А 300:700.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца левофлоксацина._ В мерную колбу
вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца левофлоксацина, растворяют в ПФ и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают около 20 мг (точная
навеска) фармакопейного стандартного образца примеси Е, растворяют в
растворе стандартного образца левофлоксацина и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл
помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до
метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного
образца левофлоксацина и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную
колбу вместимостью 100 мл помещают 1,5 мл полученного раствора и доводят
объём раствора ПФ до метки.

*Примечание*

Примесь А: +
(3__S__)-3-метил-7-оксо-10-(пиперазин-1-ил)-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая +
кислота [117707-40-1].

Примесь В: +
(3__S__)-3-метил-10-{[2-(метиламино)этил]амино}-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая +
кислота [151250-76-9].

Примесь С: +
4-{(3__S__)-6-марбокси-3-метил-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-10-ил}-1-метилпиперазин-1-оксид +
[117678-38-3].

Примесь D: +
(3__S__)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая +
кислота [117620-85-6].

Примесь E: +
(3__R__)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая +
кислота [100986-86-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный
для хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |45 °С; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 360 нм; | |

|Объём пробы |25 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|2-кратное времени удерживания пика
левофлоксацина. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор стандартного образца
левофлоксацина и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Левофлоксацин – 1 (около
12 мин); примесь А – около 0,47; примесь В – около 0,52; примесь С –
около 0,63; примесь D – около 0,73; примесь E – около 1,21.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси E используют
относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы. Для
идентификации пиков примесей А, В, С и D используют относительное время
удерживания соединений.

_Пригодность хроматографической системы_

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика
левофлоксацина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~S~)_ между пиками
левофлоксацина и примеси Е должно быть не менее 2,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца левофлоксацина _фактор
асимметрии_ _пика_ _(A~S~)_ левофлоксацина должен быть не менее 0,5 и не
более 1,5;

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания примесей площади
пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь В – 1,1; примесь С – 0,9.

_Допустимое содержание примесей._ Содержание каждой из примесей в
субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования
(ОФС «Хроматография»):

- примесь A – не более 0,3%;

- примесь B – не более 0,3%;

- примесь C – не более 0,3%;

- примесь D – не более 0,3%;

- примесь E – не более 0,8%;

- любая другая примесь – не более 0,1 %;

- сумма примесей – не более 0,5 %, не считая примесь С.

*_Метод 2_*

_Буферный раствор._ Растворяют 3,08 г аммония ацетата и 8,43 г натрия
перхлората в 900 мл воды, доводят значение рН раствора фосфорной
кислотой концентрированной до 2,2, количественно переносят полученный
раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора
водой до метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Ацетонитрил—буферный раствор 160:840.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил—метанол—буферный раствор
300:200:500.

_Растворитель._ Ацетонитрил—вода 1:10.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 40 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в 8 мл ацетонитрила, при
необходимости обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной
температуры и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор стандартного образца левофлоксацина А._ В мерную колбу
вместимостью 100 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца левофлоксацина, растворяют в 8 мл ацетонитрила, при
необходимости обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной
температуры и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор стандартного образца левофлоксацина Б_. В мерную колбу
вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца
левофлоксацина А и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси А._ В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца примеси А, растворяют в растворе аммиака 0,2 % в метаноле и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси F._ В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца примеси F, растворяют в метаноле, при необходимости обрабатывают
ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью
25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
метанолом до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл раствора
стандартного образца левофлоксацина А, прибавляют 2,0 мл раствора
стандартного образца примеси А и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы._ В мерную
колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца
левофлоксацина Б, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца
примеси F и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки
пригодности хроматографической системы и доводят объём раствора
растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь A: +
(3__S__)-3-метил-7-оксо-10-(пиперазин-1-ил)-9-фтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая +
кислота [117707-40-1].

Примесь F: +
(3__S__)-3-метил-7-оксо-9,10-дифтор-2,3-дигидро-7__H__-пиридо[1,2,3-_de_][1,4]бензоксазин-6-карбоновая
кислота +
[100986-89-8].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
3,0 мкм; |

|Температура колонки |38 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 280 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл. | |
|===

_Градиентное элюирование_

[cols="^36%,^35%,^29%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |100 |0
|5–10 |100 → 82 |0 → 18
|10–15 |82 → 40 |18 → 60
|15–30 |40 |60
|30–30,1 |40 → 100 |60 → 0
|30,1–38 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки пригодности
хроматографической системы, раствор проверки разделительной способности
хроматографической системы и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Левофлоксацин – 1; примесь
А – около 0,9; примесь F – около 2,9.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси А используют
относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы. Для
идентификации пика примеси F используют относительное время удерживания
соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности
хроматографической системы.

_Пригодность хроматографической системы_

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика
левофлоксацина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~S~)_ между пиками примеси А и
левофлоксацина должно быть не менее 2,0.

Содержание примеси F в субстанции в процентах (_X_)
вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0122_2.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика примеси F на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика примеси F на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы; +
	_а~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца примеси F, мг; +
	_P_	–	содержание примеси F в фармакопейном стандартном образце примеси F,%.


Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0122_3.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика левофлоксацина на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы; +
	_а~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, мг; +
	_P_	–	содержание левофлоксацина в фармакопейном стандартном образце левофлоксацина,%.


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь А – не более 0,2 %;

- примесь F – не более 0,13 %;

- любая другая примесь – не более 0,1 %;

- сумма примесей – не более 0,5 %.

*Вода.* От 2,0 % до 3,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции и, в качестве
растворителя, смесь формамид—метанол 1:1.

*Сульфатная зола.* Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции и платиновый
тигель.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с
требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке,
полученном после сжигания 0,5 г субстанции, с использованием эталонного
раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС
«Остаточные органические растворители».

*Бактериальные эндотоксины*. Не более 0,5 ЕЭ на 1 мг левофлоксацина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с требованиями
ОФС «Микробиологическая чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография») в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими
изменениями.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—буферный раствор 300:700.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца левофлоксацина._ В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца левофлоксацина, растворяют в ПФ и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора
стандартного образца левофлоксацина _фактор асимметрии пика (A~S~)_
левофлоксацина должен быть не менее 0,5 и не более 1,5;

Содержание левофлоксацина C~18~H~20~FN~3~O~4~ в субстанции в пересчёте
на безводное и свободное от остаточных органических растворителей
вещество в процентах (latexmath:[$X)$] вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0122_4.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика левофлоксацина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика левофлоксацина на хроматограмме раствора стандартного образца левофлоксацина; +
	_а~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, мг; +
	_Р_	-	содержание левофлоксацина в фармакопейном стандартном образце левофлоксацина,%; +
	_W_	-	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


