[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


==== ФС.2.3.0004 Лизоцима гидрохлорид

*Лизоцим* +
*Lysozymi hydrochloridum* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.3.0004_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

Пептидогликан _N_-ацетилмурамоилгидролаза из яичного белка, гидрохлорид.

Лизоцима гидрохлорид является основным пептидом, получаемым из белка
куриного яйца, и обладает способностью гидролизовать мукополисахариды.
Для получения исходного сырья используют животных, у которых отсутствуют
опасные для человека заболевания вирусной, бактериальной и
микоплазменной этиологии.

Cодержит не менее 0,9 мг/мг (по активности) лизоцима
C~616~H~963~N~193~O~182~S~10~ в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

Описание. Белый или почти белый порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость.* Легко растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 95 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _Спектрофотометрия_ (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и
видимой областях»).

[none]
* _Раствор уксусной кислоты._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
5,78 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до
метки.
* _Раствор натрия ацетата._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
8,2 г натрия ацетата безводного, растворяют в воде и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.
* _Буферный раствор._ В мерной колбе вместимостью 1000 мл смешивают 176 мл
раствора уксусной кислоты и 824 мл раствора натрия ацетата, доводят
значение рН раствором уксусной кислоты или раствором натрия ацетата до
5,40.
* _Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг
субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем
же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора буферным раствором
до метки.
* _Раствор стандартного образца лизоцима_. В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца лизоцима,
растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём буферным раствором до метки.
* Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 220 до
400 нм должен соответствовать спектру раствора стандартного образца
лизоцима.

[arabic,start=2]
. _Качественная реакция_

[none]
* _Раствор нингидрина._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г
нингидрина, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
* Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл буферного раствора, прибавляют 1,0 мл
раствора нингидрина и нагревают на водяной бане в течение 10 мин; должно
появиться сине-фиолетовое окрашивание.

[discrete]
===== Испытания

*Прозрачность* *раствора*. Раствор 0,15 г субстанции в 10 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»). При необходимости доводят значение рН хлористоводородной
кислотой разведённой 8,3 % до 3,00.

*Цветность раствора*. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей»,
метод 2).

*pH раствора.* От 3,0 до 5,0 (1,5 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Азот.* От 16,8 до 18,6 %, в пересчёте на сухое вещество +
(ОФС «Определение азота в органических соединениях методом Кьельдаля»,
метод 2). Для определения используют 15 мг (точная навеска) субстанции.

*Потеря в массе при высушивании.* Не более 8,0 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 1). Высушивают до постоянной массы 0,1 г
(точная навеска) субстанции при температуре 105 °С в течение 2 часов.

*Сульфатная зола.* Не более 2,0 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Аномальная токсичность.* Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 5 мг лизоцима гидрохлорида в
0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения – 48 ч.

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в
ультрафиолетовой и видимой областях»).

_Раствор калия дигидрофосфата._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл
помещают 9,08 г калия дигидрофосфата, растворяют в воде и доводят объём
раствора водой до метки.

_Раствор динатрия гидрофосфата._ В мерную колбу вместимостью 250 мл
помещают 2,365 г динатрия гидрофосфата безводного, растворяют в воде и
доводят объём раствора водой до метки.

_Буферный раствор._ В мерной колбе вместимостью 1000 мл смешивают 800 мл
раствора калия дигидрофосфата и 200 мл раствора динатрия гидрофосфата,
при необходимости доводят значение рН раствором калия дигидрофосфата или
раствором динатрия гидрофосфата до 6,2.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг
(точная навеска) в пересчёте на сухое вещество субстанции, растворяют в
буферном растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до
метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора буферным раствором до метки. Раствор
используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

_Раствор стандартного образца лизоцима._ В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 25 мг (точная навеска) в пересчёте на сухое вещество
фармакопейного стандартного образца лизоцима, растворяют в буферном
растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. Раствор
используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

_Раствор сравнения А._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл
раствора стандартного образца лизоцима и доводят объём раствора буферным
раствором до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при
температуре от 2 до 8 °С.

_Раствор сравнения Б._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл
раствора стандартного образца лизоцима и доводят объём раствора буферным
раствором до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при
температуре от 2 до 8 °С.

_Раствор субстрата._ Готовят раствор лиофилизата клеток _Micrococcus
lysodeikticus_ в буферном растворе с концентрацией около 0,3 мг/мл.

В три флакона с завинчивающимися крышками добавляют по 4,0 мл раствора
субстрата, предварительно нагретого при 36±1 °С в течение 10 мин, с
интервалом в одну минуту прибавляют 0,1 мл испытуемого раствора в первый
флакон, 0,1 мл раствора сравнения А во второй флакон и 0,1 мл раствора
сравнения Б в третий флакон. Смеси выдерживают в течение ровно 12 мин на
водяной бане при 36±1 °С, прибавляют в первый флакон 0,5 мл
хлористоводородной кислоты раствора 1 М и перемешивают. С интервалом в
одну минуту прибавляют по 0,5 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 М
во второй и в третий флакон.

Измеряют оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре в
максимуме поглощения при длине волны 640 нм в кювете с толщиной слоя
1 см, используя в качестве раствора сравнения воду.

Содержание (по активности) лизоцима C~616~H~963~N~193~O~182~S~10~ в
субстанции в пересчёте на сухое вещество в мг/мг (_Х_), вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.3.0004_2.png[]
|===

где	_А~1~_	–	оптическая плотность испытуемого раствора; +
	_А~0А~_	–	оптическая плотность раствора сравнения А; +
	_А~0Б~_	–	оптическая плотность раствора сравнения Б; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции в пересчёте на сухое вещество, мг; +
	_a~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца лизоцима в пересчёте на сухое вещество, мг; +
	_Р_	–	активность фармакопейного стандартного образца лизоцима, мг/мг.


[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке.

+*+ Приводится для информации.
  

[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


