[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


 
==== ФС.2.1.0600 Кладрибин (Cladribinum)

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0600_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

9-(2-Деокси-β-D-_эритро_-пентофуранозил)- 2-хлор-9__H__-пурин-6-амин.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % кладрибина
C~10~H~12~ClN~5~O~3~ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый кристаллический порошок.

+*+ Проявляет полиморфизм.

*Растворимость*. Растворим в диметилсульфоксиде, мало растворим в воде и
метаноле, практически нерастворим в ацетонитриле.

[discrete]
===== Идентификация

_ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).
Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^−1^ по
положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного
стандартного образца кладрибина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по
отдельности растворяют в минимальных объёмах метанола, выпаривают на
водяной бане досуха при температуре 45 °С, высушивают при 105 °С в
течение 2 ч и записывают спектры сухих остатков.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение*. От –21,0 до –27,0 в пересчёте на безводное вещество
(1 % раствор субстанции в диметилсульфоксиде, ОФС «Оптическое
вращение»).

{asterisk}{asterisk} Прозрачность раствора. Растворяют 0,15 г субстанции в 50 мл воды,
обрабатывают ультразвуком до растворения. Раствор должен быть прозрачным
(ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

{asterisk}{asterisk} *Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей»,
метод 2).

*Родственные примеси*. _Примеси А, B, C, D_. Определение проводят
методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Подвижная фаза А (ПФА)_. Вода.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)_. Ацетонитрил.

_Подвижная фаза В (ПФВ)_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
800 мл воды, прибавляют 30 мл фосфорной кислоты концентрированной и
доводят объём раствора водой до метки.

_Растворитель._ Ацетонитрил—вода 10:90.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор сравнения А._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до
метки.

_Раствор сравнения Б._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл
раствора сравнения А и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мг (точная
навеска) фармакопейного стандартного образца примеси C, растворяют в
10 мл раствора сравнения А и доводят объём раствора тем же растворителем
до метки.

_Раствор для идентификации примесей._ Растворяют 3 мг (точная навеска)
фармакопейного стандартного образца для идентификации пиков (содержит
примеси A, B, C и D) в 2,0 мл растворителя.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения Б и
доводят объём раствора растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь А:
9-(2-деокси-β-D-_эритро_-пентофуранозил)-9__H__-пурин-2,6-диамин
[4546-70-7].

Примесь B:
9-(2-деокси-β-D-_эритро_-пентофуранозил)-2-метокси-9__H__-пурин-6-амин
[24757-70-8].

Примесь C: 2-хлор-7__H__-пурин-6-амин [1839-18-5].

Примесь D: 2-хлор-9-(2-деокси-α-
D-_эритро_-пентофуранозил)-9__H__-пурин-6-амин [5542-92-7].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, _деактивированный_ по
отношению к основаниям для хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |25 °С; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 252 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^25%,^25%,^25%,25%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,% |ПФВ,%
|0–10 |80 → 70 |10 → 20 |10
|10–25 |70 → 20 |20 → 70 |10
|25–30 |20 |70 |10
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор для идентификации
примесей, раствор сравнения Б и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Кладрибин – 1 (около
10 мин); примесь A – около 0,33; примесь B – около 0,44; примесь C –
около 0,73; примесь D – около 0,92.

_Идентификация примесей_. Для идентификации пиков примесей A, B, C и D
используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму
раствора сравнения Б и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному
стандартному образцу для идентификации примесей A, B, C и D.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси С и кладрибина должно быть не
менее 4,5.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания примесей B и C,
площади пиков этих примесей умножаются на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь B – 1,7; примесь С – 0,8.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей A и C не должна более чем в три раза
превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б
(не более 0,3 %);

- площадь пика каждой из примесей B и D не должна более чем в два раза
превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б
(не более 0,2 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика
кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,1 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную
площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более
1,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика кладрибина на
хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической
системы (менее 0,05 %).

*_Примесь Е._* Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная
хроматография»).

_Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля F~254~.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Аммиака раствор концентрированный
25 %—спирт 96 %—этилацетат 20:40:40.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 40 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в диметилформамиде и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси Е._ В мерную колбу вместимостью
25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца
примеси Е (2-деокси-D-_эритро_-пентофураноза [1831121-84-6]), растворяют
в 10 мл диметилформамида и доводят объём раствора тем же растворителем
до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 3,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора диметилформамидом до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг (точная
навеска) фармакопейного стандартного образца примеси Е, растворяют в
диметилформамиде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Смешивают полученный раствор и испытуемый раствор 9:1.

_Реактив для детектирования._ Растворяют 0,5 г тимола в 100 мл смеси
растворителей спирт 96 %—серная кислота концентрированная 95:5.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора
(100 мкг), раствора стандартного образца примеси Е (0,3 мкг) и раствора
для проверки разделительной способности хроматографической системы.
Пластинку с нанесёнными пробами высушивают в потоке тёплого воздуха до
удаления следов растворителей, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют
восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины
пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат на воздухе,
затем нагревают при температуре 45 °С в течение 10 мин, опрыскивают
реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при
температуре 110 °С в течение 20 мин или до появления зон адсорбции и
просматривают в УФ – свете при длине волны 254 нм.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме
раствора для проверки разделительной способности хроматографической
системы чётко видны две зоны адсорбции.

_Допустимое содержание примесей_. На хроматограмме испытуемого раствора
зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции примеси E, по
совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону
адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца примеси Е (не
более 0,3 %).

*Вода.* Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с требованиями
ОФС «Остаточные органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 41,67 ЕЭ на 1 мг кладрибина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытаний готовят исходный
раствор субстанции с концентрацией 0,5 мг/мл.

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси со следующими изменениями.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца кладрибина._ В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца кладрибина, растворяют в растворителе и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца кладрибина и испытуемый
раствор.

Содержание кладрибина C~10~H~12~ClN~5~O~3~ в субстанции в пересчёте на
безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество
в процентах _(Х)_ вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0600_2.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика кладрибина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора стандартного образца кладрибина; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_a~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца кладрибина, мг; +
	_W_	-	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.  +
	_P_	-	содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце кладрибина,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте при температуре от 2 до 8 °С.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


