[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|=== 



==== ФС.2.1.0486 Тобрамицина сульфат

*Тобрамицин* +
*Tobramycini sulfas* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0486_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

_O_-3-Амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил-(1→6)-_O_-[2,6-диамино-2,3,6-тридезокси-α-D-_рибо_-гексопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (2:5).

Содержит не менее 634 мкг и не более 739 мкг на 1 мг тобрамицина
C~18~H~37~N~5~O~9~ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость.* Легко растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 96 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика тобрамицина на
хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина (раздел
«Количественное определение»).

. _Тонкослойная хроматография_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* _Подвижная фаза (ПФ)._ Хлороформ—аммиака раствор концентрированный
25 %—метанол 25:30:60.
* _Реактив для детектирования._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 1,0 г нингидрина, растворяют в смеси пиридин—бутанол 1:100 и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
* _Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 92 мг
субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
* _Раствор стандартного образца тобрамицина._ В мерную колбу вместимостью
5 мл помещают около 30 мг фармакопейного стандартного образца
тобрамицина, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
* _Стандартный раствор._ Испытуемый раствор—раствор стандартного образца
тобрамицина 1:1.
* На линию старта пластинки наносят по 3 мкл испытуемого раствора
(18 мкг), раствора стандартного образца тобрамицина (18 мкг) и
стандартного раствора (18 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами
высушивают на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют
восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины
пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления
следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре
110 °С в течение 15 мин, обрабатывают раствором для детектирования и
просматривают при дневном свете.
* _Результат._ Основные зоны адсорбции на хроматограмме испытуемого и
стандартного раствора по положению, интенсивности окраски и величине
должны соответствовать основным зонам адсорбции на хроматограмме
раствора стандартного образца тобрамицина.

[arabic,start=3]
. _Качественная реакция._ Субстанция должна давать характерную
реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*pH.* От 6,0 до 8,0 (4 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ТСХ (ОФС
«Тонкослойная хроматография»).

_Пластинка_. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

_Раствор натрия хлорида._ Растворяют 29,2 г натрия хлорида в 100 мл
воды.

_Подвижная фаза (ПФ_). Вода—спирт 96 %—раствор натрия хлорида 20:30:50.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг
субстанции, растворяют в 7 мл воды, доводят значение рН до 5,5 серной
кислоты раствором 0,5 М и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

_Реактив для детектирования (А)._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 20 мл натрия гипохлорита раствора концентрированного и доводят
объём раствора водой до метки.

_Реактив для детектирования (Б)._ Растворяют 1,1 г калия йодида в 60 мл
воды, кипятят в течение 15 мин, медленно прибавляют суспензию 1,5 г
крахмала растворимого в 10 мл воды, прибавляют 25 мл воды и кипятят в
течение 10 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры,
переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём раствора
водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг)
и раствора сравнения (0,05 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами сушат
на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим
способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии
старта, её вынимают из камеры, сушат в токе горячего воздуха до удаления
следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре
110 °С в течение 10 мин. Горячую пластинку обрабатывают реактивом для
детектирования (А), сушат в потоке холодного воздуха, пока при
добавлении капли реактива для детектирования (Б) зона адсорбции,
расположенная ниже основной зоны адсорбции, не приобретёт бледно-голубое
окрашивание. Затем обрабатывают пластинку реактивом для
детектирования (Б) и просматривают в дневном свете. Зона адсорбции
расположенная ниже основной зоны адсорбции из бледно-голубого
окрашивания переходит в голубовато-фиолетовое.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора
зона адсорбции любой примеси по совокупности величины и интенсивности
окраски не должна превышать зону адсорбции тобрамицина на хроматограмме
раствора сравнения (не более 1,0 %).

*Вода.* Не более 7,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 1,0 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Аномальная токсичность.* Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 0,5 мг тобрамицина в 0,5 мл воды
для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения – 48 ч.

*Бактериальные эндотоксины.* Не более 2,0 ЕЭ на 1 мг тобрамицина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Стерильность.* Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография»).

_Подвижная фаза (ПФ)._ В мерную колбу вместимостью 2000 мл помещают
2,0 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в 800 мл воды,
прибавляют 20 мл серной кислоты раствора 0,5 М, доводят объём раствора
ацетонитрилом до метки, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют
через фильтр с размером пор 0,2 мкм.

_Раствор фтординитробензола._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 1,0 г фтординитробензола, растворяют в спирте 96 % и доводят
объём раствора спиртом 96 % до метки.

_Раствор трис(гидроксиметил)аминометана._ В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 0,75 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в воде
и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью
200 мл помещают 40,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
диметилсульфоксидом до метки. Срок годности раствора –4 ч.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 67 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор стандартного образца тобрамицина._ В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 11 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца тобрамицина, прибавляют 0,2 мл серной кислоты раствора 0,5 М,
растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора водой до метки.

_Дериватизация растворов._ В отдельные мерные колбы вместимостью 50 мл
помещают по 4,0 мл испытуемого раствора, раствора стандартного образца
тобрамицина и воды, прибавляют по 10,0 мл раствора фтординитробензола,
по 10,0 мл раствора трис(гидроксиметил)аминометана, перемешивают,
герметично закрывают, нагревают на водяной бане при температуре 60 °С в
течение 50 мин, вынимают из водяной бани, оставляют на 10 мин,
прибавляют ацетонитрил, почти доводя объём растворов до метки, охлаждают
до комнатной температуры и доводят объём растворов ацетонитрилом до
метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг
нафтолбензеина, растворяют в ацетонитриле и доводят объём раствора
ацетонитрилом до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора дериватизированным
раствором стандартного образца тобрамицина до метки. Раствор используют
сразу после приготовления.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|300 × 3,9 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
5 км; |

|Температура колонки |25 °С; | |

|Скорость потока |1,2 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 365 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|2-кратное от времени удерживания пика
тобрамицина. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы и дериватизированные растворы.

_Относительное время удерживания соединений._ Тобрамицин – 1 (около
9 мин); нафтолбензеин – около 0,6.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками нафтолбензеина и тобрамицина должно
быть не менее 4,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина
_относительное стандартное отклонение_ площади пика тобрамицина должно
быть не более 2,0 % (6 определений).

Содержание тобрамицина C~18~H~37~N~5~O~9~ в субстанции в мкг/мг в
пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических
растворителей вещество (_X_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0486_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца тобрамицина, мкг; +
	_P_	–	содержание тобрамицина в фармакопейном стандартном образце тобрамицина, мкг/мг; +
	_W_	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%; +
	_1425,4_	–	молекулярная масса тобрамицина сульфата,
	_467,5_	–	молекулярная масса тобрамицина.


[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке.

+*+ Приводится для информации.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


