[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


 
==== ФС 2.1.0367 Флударабина фосфат

*Флударабин* +
*Fludarabini phosphas* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0367_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

9-(5-_O_-Фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9__H__-пурин-6-амин.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % флударабина фосфата
C~10~H~13~FN~5~O~7~P в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

 
*Описание.* Белый или почти белый кристаллический порошок.
*Гигроскопичен.
 

*Растворимость.* Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в
воде, практически нерастворим в этаноле.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме
испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пика
флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца
флударабина фосфата (А) (раздел «Количественное определение»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От +10,0 до +14,0 в пересчёте на безводное и
свободное от остаточных органических растворителей вещество (ОФС
«Оптическое вращение»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,1 г
(точная навеска) субстанции, прибавляют 15 мл воды, обрабатывают
ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры
и доводят объём раствора водой до метки.

Прозрачность раствора. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность
и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

_Испытуемый раствор._ Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл
диметилформамида, при необходимости обрабатывая ультразвуком.

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY~5~ (ОФС «Степень
окраски жидкостей», метод 2).

*рН раствора.* От 2,0 до 4,0 (0,1 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют
сразу после приготовления.

_Допустимое содержание примесей:_

- сумма неидентифицированных примесей – не более 0,5 %;

- сумма всех примесей определенных в тестах 1 и 2 – не более 2,0 %.

*_1. Примеси, элюирующиеся до основного пика_*

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—калия дигидрофосфата раствор 0,01 М
60:940.

_Испытуемый раствор А._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают
ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры
и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Испытуемый раствор Б._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают
1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор стандартного образца флударабина фосфата (А)._ Помещают 10 мг
(точная навеска) фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата
в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают
ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры
и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до
метки.

_Раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б)._ В мерную колбу
вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца
флударабина фосфата (А) и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг
фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, прибавляют
10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, нагревают на водяной
бане при температуре 80 °С в течение 15 мин, охлаждают до комнатной
температуры и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного
образца флударабина фосфата (Б) и доводят объём раствора ПФ до метки.

*Примечание*

Примесь А: +
6-амино-9-(5-_O_-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-1,9-дигидро-2__H__-пурин-2-он +
[62314-92-5].

Примесь В: 6-амино-1,7-дигидро-2__H__-пурин-2-он [3373-53-3].

Примесь С: +
9-(3,5-ди-_O_-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин +
[548774-53-4].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, совместимый с
водной подвижной фазой, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм; |
|Температура колонки |20 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|4,5-кратное от времени удерживания пика
флударабина фосфата. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина
фосфата (А), раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и
испытуемый раствор А.

_Относительное время удерживания соединений._ Флударабина фосфат – 1
(около 9 мин); примесь A – около 0,26; примесь B – около 0,34; примесь C
– около 0,42.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси C используется
хроматограмма раствора стандартного образца флударабина фосфата (А). В
случае возникновения затруднений при идентификации пиков примесей А и В
хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы при длине волны 292 нм.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~S~)_ между пиками примеси А и
примеси В должно быть не менее 2,0 (при длине волны 292 нм).

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- _фактор асимметрии_ пика (_A~s~_) флударабина фосфата должен быть не
более 2,0;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика флударабина
фосфата должно быть не более 2,0 % (6 определений).

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания площади пиков
следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты:
примесь A – 4,0; примесь B – около 2,5; примесь C – 1,9.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0367_2.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А; +
	_S~0~_	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б); +
	_a~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_P_	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата,%.


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь A – не более 0,8 %;

- примесь C – не более 0,4 %;

- примесь B – не более 0,2 %;

- любой другой примеси – не более 0,1 %.

Не учитывают пики, элюирующиеся после пика флударабина фосфата, и пики
менее 0,05 %.

*_2. Примеси, элюирующиеся после основного пика._* Определение проводят
в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до
основного пика» со следующими изменениями.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—калия дигидрофосфата раствор 0,01 М
200:800.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного
стандартного образца флударабина для пригодности системы, содержащего
примеси D, E и F, прибавляют 7 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до
полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём
раствора ПФ до метки.

*Примечание*

Примесь D: 2-фтор-7__H__-пурин-6-амин [700-49-2].

Примесь E: 9-(β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9__H__-пурин-6-амин
[21679-14-1].

Примесь F: +
9-(5-_O_-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-этокси-9__H__-пурин-6-амин
[159002-28-5].

_Хроматографические условия_


* Время хроматографирования: 8-кратное от времени удерживания пика
флударабина фосфата.


Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина
фосфата (Б) и испытуемый раствор А.

_Относительное время удерживания соединений._ Флударабина фосфат – 1
(около 2,5 мин); примесь D – около 1,5; примесь E – около 1,9; примесь F
– около 2,5.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~s~)_ между пиками флударабина
фосфата и примеси D должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика флударабина
фосфата должно быть не более 5,0 % (6 введений);

- _фактор асимметрии_ пика (_A~s~_) флударабина фосфата должен быть не
более 2,0.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания площади пиков
следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь D – 0,5; примесь E – около 0,6; примесь F – 1,8.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0367_3.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А; +
	_S~0~_	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б); +
	_a~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_P_	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата,%.


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь E – не более 0,2 %;

- примесь F – не более 0,2 %;

- примесь D – не более 0,15 %;

- любой другой примеси – не более 0,1 %.

Не учитывают пики, элюирующиеся до пика флударабина фосфата, и пики
менее 0,05 %.

*Вода.* Не более 3,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,1 г (точная навеска) тонкоизмельчённой
субстанции. Перед титрованием субстанцию взбалтывают с 30 мл метанола
безводного в течение 30 с.

*Натрий.* Не более 0,2 %. Определение проводят методом
атомно-эмиссионной спектрометрии с пламенной атомизацией (ОФС
«Атомно-эмиссионная спектрометрия»).

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг
субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Стандартный раствор_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
0,5084 г натрия хлорида, предварительно высушенного при 105 °С до
постоянной массы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до
метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора водой до метки.

_Контрольный раствор_. Вода.

Определяют атомную эмиссию стандартного и испытуемого растворов на линии
спектра излучения натрия при длине волны 589,0 нм.

Отклик эмиссии испытуемого раствора не должен превышать отклик эмиссии
стандартного раствора.

*Фосфаты.* Не более 0,1 % (ОФС «Фосфаты»). В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объём
раствора водой до метки.

*Хлориды.* Не более 0,2 % (ОФС «Хлориды). Растворяют 10 мг субстанции в
10 мл воды.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с
ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б), в зольном остатке, полученном после
сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 4,0 ЕЭ на 1 мг флударабина
фосфата (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика» со следующими
изменениями.

_Хроматографические условия_


* Время хроматографирования: 18 мин.


Хроматографируют раствор стандартного образца флударабина фосфата (А) и
испытуемый раствор Б.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора
стандартного образца флударабина фосфата (А):

- _фактор асимметрии_ пика (_A~s~_) флударабина фосфата должен быть не
более 2,0;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика флударабина
фосфата должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- _относительное стандартное отклонение_ времени удерживания пика
флударабина фосфата должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- _эффективность хроматографической колонки (N)_, рассчитанная по пику
флударабина фосфата, должна составлять не менее 2000 теоретических
тарелок.

Содержание флударабина фосфата C~10~H~13~FN~5~O~7~P в субстанции в
процентах (_X_) в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0367_4.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме испытуемого раствора Б; +
	_S~0~_	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А); +
	_a~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, мг; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%; +
	_P_	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата,%.


[discrete]
===== Хранение

В сухом, защищённом от света месте, при температуре от +2 до +8 °С.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


