[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===



===== ОФС.1.5.3.0017 Определение состава жирных кислот в маслах жирных растительных и жирах
 

*Вводится впервые*


Метод определения состава жирных кислот в маслах жирных растительных и
жирах проводят методом газовой хроматографии (ОФС «Газовая
хроматография»).

====== Методика 1

Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных

кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, циклопропиловыми или
циклопропениловыми группами, а также для масел, в составе которых
большая часть жирных кислот имеет длину цепи менее восьми атомов
углерода, или для масел с кислотным числом более 2,0.

Метиловые эфиры жирных кислот могут быть получены следующими способами,
если в фармакопейной статье не приведены иные условия:

. В колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 – 0,15 мл тщательно
перемешенного испытуемого образца, добавляют 1 мл метанола и 0,05 –
0,1 мл ацетилхлорида. Смесь аккуратно перемешивают и нагревают на
водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч. Избыток метанола
отгоняют. К остатку прибавляют 0,2 мл гексана (гептана или другого
растворителя с соответствующей полярностью) и перемешивают.

. В колбу вместимостью 50 мл, снабжённую пришлифованным обратным
холодильником, помещают 0,1 г тщательно перемешенного испытуемого
образца, приливают 10 мл метанола. К полученной смеси прибавляют 0,28 г
калия гидроксида и нагревают с обратным холодильником на песчаной бане
при температуре 105-110 ºС в течение 1 часа. Смесь охлаждают до
комнатной температуры, приливают по каплям 0,5 мл диметилсульфата,
нагревают с обратным холодильником на песчаной бане при температуре
105-110 ºС в течение 30 мин и приливают ещё 0,2 мл диметилсульфата. Из
полученного раствора отгоняют метанол до объёма 2,5 мл. Смесь охлаждают
до комнатной температуры, приливают 20 мл воды, переносят в делительную
воронку, добавляют 20 мл гексана (гептана или другого растворителя с
соответствующей полярностью) и интенсивно встряхивают. Верхний слой
отделяют и фильтруют через беззольный фильтр, содержащий 1 г натрия
сульфата безводного.

_Раствор сравнения А._ Готовят 0,5 г смеси веществ, применяемых для
калибровки (калибровочной смеси), состава приведённого в таблицах 1, 2
или 3, в соответствии с указаниями в фармакопейной статье. Если в
фармакопейной статье не указан определённый раствор, готовят смесь
состава, приведённого в таблице 1. Смесь растворяют в гексане (гептане
или другом растворителе с соответствующей полярностью) и доводят объём
раствора тем же растворителем до 50 мл.

_Раствор сравнения Б._ Доводят 1,0 мл раствора сравнения A гептаном до
10 мл.

_Раствор сравнения В._ Готовят 0,5 г смеси метиловых эфиров жирных
кислот, которые по составу соответствуют смеси жирных кислот, указанных
в фармакопейной статье на испытуемое вещество. Смесь растворяют в
гексане (гептане или другом растворителе с соответствующей полярностью)
и доводят объём раствора тем же растворителем до 50 мл. Допускается
также использование готовых смесей метиловых эфиров жирных кислот.

_Условия хроматографирования_

[cols="44%,35%,21%",]
|===

|Колонка |Кварцевая капиллярная длиной 10-30, диаметром от 0,2 до
0,8 мм, с неподвижной фазой полиэтиленгликоль 20 М (макрогол 20000),
толщиной от 0,1 до 0,5 мкм или другая неподвижная фаза |

|Детектор |пламенно-ионизационный |

|Газ-носитель |Гелий, водород или азот для хроматографии |

|Деление потока |1:100 или менее в зависимости от внутреннего диаметра
применяемой колонки (например, в случае использования колонки с
внутренним диаметром 0,32 мм деление потока должно составлять 1:50) |

|Скорость потока, мл/мин |1,3 (для колонки с внутренним диаметром
0,32 мм) |

|Объём пробы, мкл |1 |

.3+.^|Температура |Колонка |160-200 °С

|Инжектор |250 °С

|Детектор |250 °С
|===

Если требуется линейный градиент температуры, температуру колонки
увеличивают, например, со скоростью 3 ºС/мин от 170 до 230 ºС.

_Пригодности хроматографической системы_. Хроматографическая система
считается пригодной, если при использовании смеси веществ, используемых
для калибровки, приведенных в <<tab_ofs_1.5.3.0017_1,таблице 1>> или <<tab_ofs_1.5.3.0017_2,таблице 2>>, выполняются
следующие условия:

- _разрешение (R~S~)_ между пиками метилолеата и метилстеарата на
хроматограмме раствора сравнения А должно быть не менее 1,8;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика метилмиристата на хроматограмме
раствора сравнения Б должно быть не менее 5;

- _эффективность хроматографической колонки (N),_ рассчитанная по пику
метилстеарата на хроматограмме раствора сравнения А должна быть не менее
30000 теоретических тарелок.

[[tab_ofs_1.5.3.0017_1]]
[caption="Таблица 1. "]
.Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
[cols="^50%,^50%",options="header",]
|===
|*Смесь веществ* |*Состав (в процентах м/м)*
|Метиллаурат |5
|Метилмиристат |5
|Метилпальмитат |10
|Метилстеарат |20
|Метиларахидат |40
|Метилолеат |20
|===


[[tab_ofs_1.5.3.0017_2]]
[caption="Таблица 2. "]
.Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
[cols="^50%,^50%",options="header",]
|===
|*Смесь веществ* |*Состав (в процентах м/м)*
|Метимиристат |5
|Метилпальмитат |10
|Метилстеарат |15
|Метиларахидат |20
|Метилолеат |20
|Метилэйкозеноат |10
|Метилбехенат |10
|Метиллигноцерат |10
|===

Примечание − при выполнении качественного анализа с использованием
калибровочных кривых в калибровочную смесь рекомендуется добавлять
компонент испытуемого раствора с максимальным числом атомов углерода в
цепи.

Хроматографическая система считается пригодной, если при использовании
смеси веществ, применяемых для калибровки, приведённых в <<tab_ofs_1.5.3.0017_3,таблице 3>>
выполняются следующие условия:

- _разрешение (R~S~)_ между пиками метилкаприлата и метилдеканоата на
хроматограмме раствора сравнения А должно быть не менее 4,0;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика метилкапроата на хроматограмме
раствора сравнения Б должно быть не менее 5;

- _эффективность хроматографической колонки (N),_ рассчитанная по пику
метилдеканоата на хроматограмме раствора сравнения А должна быть не
менее 15000 теоретических тарелок.

[[tab_ofs_1.5.3.0017_3]]
[caption="Таблица 3. "]
.Смесь веществ, применяемых для калибровки (для газовой хроматографии с капиллярной колонкой и системой с делением потока)
[cols="^50%,^50%",options="header",]
|===
|*Смесь веществ* |*Состав (в процентах м/м)*
|Метилкапроат |10
|Метилкаприлат |10
|Метилдеканоат |20
|Метиллаурат |20
|Метилмиристат |40
|===

Примечание − при выполнении качественного анализа с использованием
калибровочных кривых в калибровочную смесь рекомендуется добавлять
компонент испытуемого раствора с максимальным числом атомов углерода в
цепи.

Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать
неразделённые пики (наличие компонентов с небольшим различием между
временами удерживания, например, линоленовая и арахидоновая кислоты).

*_Качественный анализ_.* Идентифицируют пики на хроматограмме раствора
сравнения В (изотермические условия хроматографирования или линейный
градиент температуры).

При использовании изотермических условий хроматографирования пики могут
быть также идентифицированы построением калибровочных кривых с
использованием хроматограммы раствора сравнения А и данных таблиц <<tab_ofs_1.5.3.0017_1,1>>, <<tab_ofs_1.5.3.0017_2,2>> или <<tab_ofs_1.5.3.0017_3,3.>>

На хроматограмме раствора сравнения А измеряют приведённое время
удерживания (tʹ~R~) каждого пика.

tʹ~R~ – разница между временем удерживания пика растворителя и временем
удерживания несорбирующегося (в условиях определения) вещества.

Строят график линейной зависимости:

Lg (tʹ~R~) = f (эквивалент числа атомов углерода в цепи).

Логарифмы tʹ~R~ ненасыщенных жирных кислот расположены на этой линии в
точках, соответствующих не целым значениям «эквивалента числа атомов
углерода в цепи». Эквивалент числа атомов углерода в цепи представляет
собой длину теоретической цепи насыщенной жирной кислоты, которая должна
была иметь такое же tʹ~R~ , как идентифицируемая жирная кислота.
Например, у линолевой кислоты такое же tʹ~R~ , как у теоретической
насыщенной жирной кислоты, имеющей 18,8 атомов углерода.

Идентификацию пиков на хроматограмме испытуемого раствора проводят по
прямой линии и уменьшающимся временам удерживания.

Эквиваленты числа атомов углерода в цепи представлены в <<tab_ofs_1.5.3.0017_4,таблице 4.>>

[[tab_ofs_1.5.3.0017_4]]
[caption="Таблица 4. "]
.Эквиваленты числа атомов углерода в цепи (значения рассчитаны с использованием калибровочных кривых и приведены в качестве примера для колонки с макроголом 20 000)
[cols="^50%,^50%",options="header",]
|===
|*Жирная кислота* |*Эквивалент числа атомов углерода в цепи*
|Капроновая кислота |6,0
|Каприловая кислота |8,0
|Каприновая кислота |10,0
|Лауриновая кислота |12,0
|Миристиновая кислота |14,0
|Пальмитиновая кислота |16,0
|Пальмитолеиновая кислота |16,3
|Маргариновая кислота |17,0
|Стеариновая кислота |18,0
|Олеиновая кислота |18,3
|Линолевая кислота |18,8
|Гамма-линоленовая кислота |19,0
|Альфа-линоленовая кислота |19,2
|Арахиновая кислота |20,0
a|
11-Эйкозеиновая кислота (гондоиновая кислота)

|20,2
|Арахидоновая кислота |21,2
|Бегеновая кислота |22,0
|Эруковая кислота |22,2
|12-Оксостеариновая кислота |22,7
|Рицинолевая кислота |23,9
|12-Гидроксистеариновая кислота |23,9
|Лигноцериновая кислота |24,0
|Нервоновая кислота |24,2
|===

*_Количественный анализ_.* Используют метод внутренней нормализации. Не
учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05 % от суммы
площадей всех пиков.

В определённых случаях, например, при наличии жирных кислот с 12 или
менее атомами углерода, в фармакопейной статье должен быть указан
поправочный коэффициент для преобразования площадей пиков в проценты
(м/м).

Содержание олеиновой кислоты представляет собой сумму олеиновой кислоты
(18:1 n-9) и цис-вакциновой кислоты (18:1 n-7).

====== Методика 2

Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных
кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, циклопропиловыми и
циклопропениловыми группами или для масел с кислотным числом более 2,0.

_Испытуемый раствор._ В центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой
помещают 0,1 г (точная навеска) испытуемого образца, растворяют в смеси
1 мл гептана (гексана или другом растворителе с соответствующей
полярностью) с 1 мл диметилкарбоната, энергично перемешивают и нагревают
до температуры 50±5 ºС. Прибавляют к ещё тёплому раствору 1 мл натрия
раствора 1,2 % в метаноле и энергично перемешивают в течение 5 мин,
прибавляют 3 мл воды и энергично перемешивают в течение 30  с. Смесь
центрифугируют 15 мин со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость
используют в качестве испытуемого раствора.

_Растворы сравнения и анализ данных._ Если в фармакопейной статье нет
других указаний, поступают, как указано в методике 1.

_Условия хроматографирования_

[cols="15%,55%,15%,15%",]
|===

|Колонка |Кварцевая капиллярная 30 м × 0,25 мм, макрогол 20000, 025 мкм
| |

|Детектор |пламенно-ионизационный | |

|Газ-носитель |гелий для хроматографии | |

|Деление потока |1:100 | |

|Скорость потока, мл/мин |0,9 | |

|Объём пробы, мкл |1 | |

.5+.^|Температура .3+.^|Колонка |0–15 мин |100
|15–36 мин |100 → 225 °С
|36–61 мин |225 °С 
|Инжектор | |250 °С
|Детектор | |250 °С
|===

====== Методика 3

Методика неприменима для масел, содержащих глицериды жирных
кислот с эпокси-, гидроэпокси-, гидроперокси-, альдегидными, кетоновыми,
циклопропиловыми и циклопропениловыми группами и сопряженными
полиненасыщенными и ацетиленовыми соединениями из-за частичного или
полного разрушения этих групп.

_Испытуемый раствор._ В коническую колбу вместимостью 25 мл помещают
0,1 г испытуемого образца, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора
в метаноле 2 % и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин.
Прибавляют через холодильник 2,0 мл бора фторида в метаноле 14 % и
кипятят в течение 30 мин, прибавляют через холодильник 4,0 мл гептана и
кипятят в течение 5 мин. Смесь охлаждают, прибавляют 10,0 мл натрия
хлорида насыщенного раствора, встряхивают в течение 15 с и прибавляют
такое количество натрия хлорида насыщенного раствора, чтобы верхний слой
поднялся к горлу колбы. Отбирают 2,0 мл верхнего слоя, помещают в
делительную воронку, промывают тремя порциями воды, по 2 мл каждая, и
сушат полученный экстракт над натрия сульфатом безводным.

_Растворы сравнения, хроматографическая методика и анализ данных_. Если
в фармакопейной статье нет других указаний, поступают, как указано в
методике 1.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


