[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0082 Гентамицина сульфат

*Гентамицин* +
*Gentamicini sulfas* 

*Взамен ФС.2.1.0082.18*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0082_1.png[]
|===

[cols="^,^,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|C~1a~ |R=CH~2~NH~2~ |C~19~H~39~N~5~O~7~·H~2~SO~4~ |М.м. 547,6
|C~1~ |R=CH(CH~3~)NHCH~3~ |C~21~H~43~N~5~O~7~·H~2~SO~4~ |М.м. 575,7
|C~2~ |R=(_R_)-CH(CH~3~)NH~2~ |C~20~H~41~N~5~O~7~·H~2~SO~4~ |М.м. 561,6
|C~2a~ |R=(_S_)-CH(CH~3~)NH~2~ |C~20~H~41~N~5~O~7~·H~2~SO~4~ |М.м. 561,6
|C~2b~ |R=CH~2~NHCH~3~ |C~20~H~41~N~5~O~7~·H~2~SO~4~ |М.м. 561,6
|===

[discrete]
===== Определение

Смесь сульфатов гентамицина C~1~, гентамицина C~1A~, гентамицина C~2A~,
гентамицина C~2B~ и гентамицина C~2~, производимых _Micromonospora
purpurea._

*Гентамицин C~1a~*: +
_O_-3-Дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[2,6-диамино-2,3,4,6-тетрадезокси-α-D-_эритро_-гексопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:1).

*Гентамицин C~1~*: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[2-амино-2,3,4,6,7-пентадезокси-6-(метиламино)-α-D-_эритро_-гептопиранозил-(1→6)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:1).

*Гентамицин C~2~*: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[(6__R__)-2,6-диамино-2,3,4,6,7-пентадезокси-α-D-_эритро_-гептопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:1).

*Гентамицин C~2a~*: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[(6__S__)-2,6-диамино-2,3,4,6,7-пентадезокси-α-D-_эритро_-гептопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:1).

*Гентамицин C~2b~*: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[2-амино-2,3,4,6-тетрадезокси-6-метил-6-(метиламино)-α-D-_эритро_-гексопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:1).

1 мкг гентамицина сульфата соответствует специфической активности,
равной одной единице действия (ЕД).

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость.* Легко растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 96 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _ВЭЖХ._ Время удерживания пяти основных пиков на хроматограмме
испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пяти
основных пиков гентамицина, на хроматограмме раствора для идентификации
пиков (раздел «Компонентный состав»).

. _Тонкослойная хроматография_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»)

[none]
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* _Подвижная фаза (ПФ)._ Аммиака раствор концентрированный
25 %—метанол—хлороформ 33:33:33. После смешивания используют нижний
слой.
* _Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают около
25 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.
* _Раствор стандартного образца гентамицина сульфата._ В мерную колбу
вместимостью 5 мл помещают около 25 мг фармакопейного стандартного
образца гентамицина сульфата, растворяют в воде и доводят объём раствора
тем де растворителем до метки.
* На линию старта пластинки наносят по 10 мкл (50 мкг) испытуемого
раствора и раствора стандартного образца гентамицина сульфата. Пластинку
с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и
хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдёт
около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры,
сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина раствором
0,25 %, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °С в течение
5 мин и просматривают в видимом свете.
* На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться три основные
зоны адсорбции, соответствующие по положению, величине и интенсивности
поглощения основным зонам адсорбции на хроматограмме раствора
стандартного образца гентамицина сульфата.

[arabic,start=3]
. _Качественная реакция._ Субстанция должна давать характерную реакцию
на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От +107 до +121 в пересчёте на безводное вещество
(10 % раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора.* Раствор 0,8 г субстанции в 20 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Окраска раствора, полученного в испытании
«Прозрачность раствора», не должна превышать интенсивности наиболее
близко подходящего по цвету эталона сравнения 6 (ОФС «Степень окраски
жидкостей»).

*рН раствора.* От 3,5 до 5,5 (раствор, полученный в испытании
«Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Компонентный состав.* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Раствор А_. Натрия гидроксида раствор насыщенный, свободный от
карбонатов—вода 1:25.

_Подвижная фаза (ПФ)._ К 900 мл воды прибавляют 7,0 мл трифторуксусной
кислоты, 0,25 мл пентафторпропановой кислоты, 4,0 мл натрия гидроксида
раствора насыщенного, свободного от карбонатов, перемешивают и доводят
рН раствором А до 2,60. Полученный раствор количественно переносят в
мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 15 мл ацетонитрила и
доводят объём раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор А._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают
0,25 г гентамицина сульфата, растворяют в ПФ и доводят объём раствора
тем же растворителем до метки.

_Испытуемый раствор Б._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают
5,0 мл испытуемого раствора А и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для идентификации пиков._ В мерную колбу вместимостью 25 мл
помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца гентамицина для
идентификации пиков, содержащего примесь В, растворяют в ПФ и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца сизомицина сульфата._ В мерную колбу
вместимостью 20 мл помещают 20 мг фармакопейного стандартного образца
сизомицина сульфата (примесь А), растворяют в ПФ и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного
образца сизомицина сульфата и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора
стандартного образца сизомицина сульфата, прибавляют 5,0 мл испытуемого
раствора А и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для постколоночной дериватизации_. Раствор А, предварительно
дегазированный, безимпульсно добавляется к элюату колонки с помощью
смешивающей полимерной петли объёмом 375 мкл.

*Примечание*

Примесь A: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→6)-_O_-[2,6-диамино-2,3,4,6-тетрадезокси-α-D-_эритро_-гекс-4-енопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамин +
[32385-11-8].

Примесь B: +
_O_-3-дезокси-4-_C_-метил-3-(метиламино)-β-L-арабинопиранозил-(1→4)-2-дезокси-L-стрептамин +
[49751-51-1].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
5 мкм; | |

|Температура колонки |35°C; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Раствор после колонки |натрия гидроксида раствор 20 %
(свежеприготовленный); | |

|Детектор 2+|пульс-амперометрический с золотым индикаторным электродом,
хлорсеребряным электродом сравнения и стальным вспомогательными
электродом, представляющим собой корпус электрохимической ячейки;
потенциалы: +0,05 В детектирование, +0,75 В окисление, –0,15 В
восстановление с продолжительностью импульса в соответствии с
используемым инструментом;  |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Время хроматографирования |1,2-кратное от времени удерживания пика
гентамицина С~1~. | |
|===

*Примечание* – Если при проведении испытания наблюдается значительный
дрейф времени удерживания компонентов растворов, следует предусмотреть
промывку колонки между инжекциями смесью ацетонитрил—вода очищенная
80:20 в течение 15–30 мин с последующим уравновешиванием колонки
подвижной фазой.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор для идентификации пиков
и испытуемый раствор Б.

_Относительное время удерживания_. Примесь А – 1,0 (около 23 мин);
гентамицин С~1А~ – около 1,1; гентамицин С~2~ – около 1,8; гентамицин
С~2B~ – около 2,0; гентамицин С~2А~ – около 2,3; гентамицин С~1~ – около
3,0.

_Идентификация примесей_. Для идентификации пиков гентамицина С~1~,
С~1А~, С~2~, С~2А~, С~2B~ используют хроматограмму раствора для
идентификации пиков и хроматограмму, прилагаемую к фармакпейному
стандартному образцу гентамицина для идентификации пиков.

_Пригодность хроматографической системы_

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы _отношение сигнал/шум_ (_S/N_) для пика
сизомицина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы:

- _разрешение_ (_R~S~_) между пиками сизомицина и гентамицина С~1А~
должно быть не менее 1,2 (при необходимости увеличивают долю
ацетонитрила в ПФ до 50 мл/л);

- _разрешение_ (_R~S~_) между пиками гентамицина С~2~ и гентамицина
С~2В~ должно быть не менее 1,5 (при необходимости увеличивают долю
ацетонитрила в ПФ до дополнительных 50 мл/л).

_Допустимое содержание компонентов._ Содержание каждого компонента в
субстанции в процентах вычисляют методом нормирования (ОФС
«Хроматография»):

- гентамицин С~1~ – от 25,0 до 45,0 %;

- гентамицин С~1А~ – от 10,0 до 30,0 %;

- сумма гентамицинов С~2~, С~2А~ и С~2B~ – от 35,0 до 55,0 %.

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях
испытания «Компонентный состав» со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы и испытуемый раствор А.

_Допустимое содержание примесей:_

- площадь пика каждой из примесей А и В не должна более чем в 3 раза
превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки
чувствительности хроматографической системы (не более 3 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна более чем в 3 раза
превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки
чувствительности хроматографической системы (не более 3 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 10 раз
превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки
чувствительности хроматографической системы (не более 10 %).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади
основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы (менее 0,5 %).

*Метанол.* Не более 1,0 %. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая
хроматография»).

_Раствор внутреннего стандарта_. В мерную колбу вместимостью 200 мл
помещают 0,2 г пропанола, прибавляют 20 мл воды, перемешивают и доводят
объём раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1,0 мл
раствора внутреннего стандарта, доводят объём раствора водой до метки и
перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для
парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

_Стандартный раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г
(точная навеска) метанола, прибавляют 20 мл воды, доводят объём раствора
водой до метки и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора
внутреннего стандарта, доводят объём раствора водой до метки и
перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для
парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

_Контрольный раствор._ Помещают 1,0 мл воды во флакон для парофазного
анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

 
_Хроматографические условия_
 

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |кварцевая капиллярная 30 м × 0,53 мм, покрытая слоем
полиэтиленгликоля, деактивированного по отношению к основаниям,
0,5 мкм; | |

|Детектор |пламенно-ионизационный; | |

|Газ-носитель |азот; | |

|Деление потока |1:4; | |

|Скорость потока |1,7 мл/мин; | |

|Объём пробы |1 мкл. | |
|===

_Температурная программа_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
| |Время, мин |Температура, °C
|Колонка |0–5 |40
| |5–11 |40 → 100
|Инжектор | |150
|Детектор | |200
|===

_Условия парофазного анализа_

[cols="85%,^15%",]
|===

|Температура уравновешивания |80 °С;
|Время уравновешивания |45 мин;
|Температура петли |90 °С;
|Температура линии переноса |100 °С.
|===

Хроматографируют контрольный раствор, стандартный и испытуемый растворы.

Содержание метанола в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по формуле:


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0082_2.png[]
|===

где	_B~1~_	-	отношение площади пика метанола к площади пика пропанола на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_B~0~_	-	отношение площади пика метанола к площади пика пропанола на хроматограмме стандартного раствора; +
	_a~1~_	-	навеска испытуемой субстанции, г; +
	_a~0~_	-	навеска метанола, взятая для приготовления стандартного раствора, г; +
	_P_	–	чистота метанола,%.


*Сульфаты*. От 32,0 до 35,0 % в пересчёте на безводное вещество.
Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 100 мл воды и доводят
значение рН до 11,0 аммиака раствором концентрированным 32 %. Прибавляют
10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида и около 0,5 мг фталеинового
пурпурного. Титруют 0,1 М раствором натрия эдетата, прибавляя 50 мл
спирта 96 % при начале изменения окраски, до исчезновения
фиолетово-синего окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида соответствует 9,606 мг сульфат-иона
SO~4~.

*Сульфатная зола*. Не более 1,0 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

*Вода.* Не более 15,0 % (ОФС «Определение воды»). Для определения
используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с требованиями
ОФС «Остаточные органические растворители».

+*+ *Аномальная токсичность*. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 0,5 мг гентамицина в 0,5 мл воды
для инъекций на мышь, внутривенно. Скорость введения – 0,1 мл/с. Срок
наблюдения – 48 ч.

+*+ *Бактериальные эндотоксины*. Не более 0,71 ЕЭ на 1 мг гентамицина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с требованиями
ОФС «Микробиологическая чистота».

+*+ *Стерильность.* Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение
антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте в герметично закрытой упаковке.

+*+ Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


