[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0545 Пеметрексед динатрия гептагидрат

*Пеметрексед* +
*Pemetrexedum dinatricum heptahydricum* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0545_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

(2__S__)-2-{4-[2-(2-Амино-4-оксо-4,7-дигидро-1__H__-пирроло[2,3-_d_]пиримидин-5-ил)этил]бензамидо}пентандикарбоксилат
динатрия гептагидрат.

Cодержит не менее 97,5 % и не более 102,0 % пеметрекседа динатрия
C~20~H~19~N~5~Na~2~O~6~ в пересчёте на безводное и свободное от
остаточных органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. Белый или почти белый кристаллический порошок.

*Растворимость*. Легко растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 96 % и метиленхлориде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^-1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика пеметрекседа на
хроматограмме раствора стандартного образца пеметрекседа динатрия
гептагидрата (раздел «Количественное определение»).

. _Качественная реакция._ Субстанция должна давать характерную реакцию
Б на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

+*+ *Прозрачность раствора*. Опалесценция раствора 0,56 г субстанции в
10,0 мл воды не должна превышать эталон сравнения II (ОФС «Прозрачность
и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

+*+ *Цветность раствора*. Оптическая плотность раствора, полученного в
испытании «Прозрачность раствора», измеренная в кювете с толщиной слоя
1 см при длине волны 580 нм, не должна превышать 0,10 (ОФС
«Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

*рН.* От 7,5 до 8,4 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси*. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют сразу после приготовления или хранят при
температуре 2–8 °С не более 24 ч.

_Буферный раствор._ Растворяют 1,45 г аммония формиата в 900 мл воды и
доводят значение рН муравьиной кислотой безводной до 3,5. Количественно
переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и
доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)_. Ацетонитрил—буферный раствор 50:950.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)_. Ацетонитрил—буферный раствор 300:700.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около
20 мг субстанции, растворяют в 80 мл воды и доводят объём раствора водой
до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности_ _хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 30 мг субстанции,
растворяют в 7 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки. Полученный раствор нагревают при
70 °С в течение 40 мин и охлаждают. В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до
метки.

_Раствор для проверки чувствительности_ _хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и
доводят объём раствора водой до метки.

*Примечание*

Примесь А: +
(2__S__)-2-{4-[2-(2-Амино-1-метил-4-оксо-4,7-дигидро-1__H__-пирроло[2,3-_d_]пиримидин-5-ил)этил]бензамидо}пентандикарбоновая
кислота +
[869791-42-4].

Примесь В: +
(2__S__,2'_S_)-2,2'-{[(5__R__)-2,2'-Диамино-4,4',6-триоксо-1,4,4',6,7,7'-гексагидро-1'_H_,5__H__-[5,6'-бипирроло[2,3-_d_]пиримидин]-5,5'-диил]бис[(этан-2,1-диил)бензол-4,1-диил]карбонилимино)}дипентандиовая
кислота +
[1802552-04-0].

Примесь С: +
(2__S__,2'_S_)-2,2'-{[(5__S__)-2,2'-Диамино-4,4',6-триоксо-1,4,4',6,7,7'-гексагидро-1'_H_,5__H__-[5,6'-бипирроло[2,3-_d_]пиримидин]-5,5'-диил]бис[(этан-2,1-диил)бензол-4,1-диил]карбонилимино)}дипентандиовая кислота +
[1802552-16-4].

Примесь D: +
(2__S__)-2-[(4__S__)-4-{4-[2-(2-Амино-4-оксо-4,7-дигидро-3__H__-пирроло[2,3-_d_]пиримидин-5-ил)этил]бензамидо}-4-карбоксибутанамидо]пентандикарбоновая
кислота +
[144051-68-3].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по
отношению к основаниям, для хроматографии, 3,5 мкм; |

|Температура колонки |30 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 250 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–3 |100 |0
|3–45 |100 → 0 |0 → 100
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Пеметрексед – 1 (около
25 мин); примесь А ‒ около 0,82; примесь В – около 0,87; примесь С ‒
около 0,88; примесь D ‒ около 0,91.

_Идентификация примесей._ Хроматограмма раствора для проверки
разделительной способности хроматографической системы используется для
идентификации пиков примесей B и С.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика пеметрекседа должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _отношение максимум/минимум (p/v)_ между
пиками примеси В и примеси С должно быть не менее 1,5.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей А, D не должны более чем в 1,5 раза
превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не
более 0,15 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь
основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10 %);

- суммарная площадь пиков всех примесей не должна превышать шестикратную
площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более
0,6 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на
хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической
системы (менее 0,05 %).

*Энантиомерная чистота (примесь Е).* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют сразу после приготовления или хранят при
температуре 2–8 °С не более 24 ч.

_Буферный раствор._ Растворяют 8,0 г β-циклодекстрина в 900 мл воды,
прибавляют 15 мл триэтиламина, 6 мл фосфорной кислоты концентрированной
и доводят значение рН фосфорной кислотой концентрированной до 6,00.
Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью
1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)_. Ацетонитрил—буферный раствор 50:950.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают около
12 мг субстанции, растворяют в 40 мл воды и доводят объём раствора водой
до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора водой до метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы._ В мерную
колбу вместимостью 25 мл помещают 6 мг стандартного образца пеметрекседа
для проверки пригодности системы, растворяют в 15 мл воды и доводят
объём раствора водой до метки.

*Примечание*

Примесь Е: +
(2__R__)-2-{4-[2-(2-Амино-4-оксо-4,7-дигидро-3__H__-пирроло[2,3-_d_]пиримидин-5-ил)этил]бензамидо}пентандикарбоновая кислота +
[150399-23-8].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
5 мкм; |

|Температура колонки |40 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 230 нм; | |

|Объём пробы |50 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|1,5-кратное от времени удерживания пика
пеметрекседа. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Пеметрексед – 1 (около
25 мин); примесь Е – около 0,94.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки пригодности хроматографической системы _отношение
максимум/минимум (p/v)_ между пиками примеси Е и пеметрекседа должно
быть не менее 5,0.

На хроматограмме раствора сравнения:

- _фактор асимметрии_ _пика_ (_A~S~_) пеметрекседа должен быть не более
2,0.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора
площадь пика примеси Е не должна превышать площадь основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3 %).

_Промывка колонки_

[cols="^25%,^25%,^25%,^25%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФ,% |Вода,% |Ацетонитрил,%
|0–4 |100 → 0 |0 → 50 |0 → 50
|4–9 |0 |50 |50
|9–14 |0 |50 → 10 |50 → 90
|14–54 |0 |10 |90
|54–69 |0 |10 → 95 |90 → 5
|69–100 |0 |95 |5
|===

*Вода.* От 19,0 % до 22,1 %.(ОФС «Определение воды», метод 2). Для
определения используют 20 мг (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы*. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 2), в зольном остатке, полученном после
сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с требованиями
ОФС «Остаточные органические растворители».

+*+ *Бактериальные эндотоксины.* Не более 0,17 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография»).

Все растворы используют сразу после приготовления или хранят при
температуре 2–8 °С не более 24 ч.

_Буферный раствор._ Растворяют 1,7 мл уксусной кислоты ледяной в 900 мл
воды и доводят значение рН натрия гидроксида раствором 10 М до 5,30,
количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью
1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)_. Ацетонитрил—буферный раствор 110:890.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата._ В
мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 25 мг (точная навеска)
фармакопейного стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата,
растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по
отношению к основаниям, для хроматографии, 3,5 мкм; |

|Температура колонки |30 °С; | |

|Скорость потока |2,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 285 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Время хроматографирования |10 мин. | |
|===

Хроматографируют раствор стандартного образца пеметрекседа динатрия
гептагидрата и испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора
стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата:

- _фактор асимметрии_ _пика_ (_A~S~_) пеметрекседа должен быть не более
2,5;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика пеметрекседа
должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- _эффективность хроматографической колонки (N)_, рассчитанная по пику
пеметрекседа, должна составлять не менее 3000 теоретических тарелок.

Содержание пеметрекседа динатрия C~20~H~19~N~5~Na~2~O~6~ в субстанции в
процентах в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество (_Х_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0545_2.png[]
|===

где	 +
_S~1~_ –	площадь пика пеметрекседа на хроматограмме испытуемого раствора; +
_S~0~_ –	площадь пика пеметрекседа на хроматограмме раствора стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата; +
_a~1~_ –	навеска субстанции, мг; +
_a~0~_ –	навеска стандартного образца пеметрекседа динатрия гептагидрата, мг; +
_P_ –	содержание пеметрекседа динатрия в стандартном образце пеметрекседа динатрия гептагидрата,%; +
_W_ –	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте.

+*+ Контроль по показателям качества «Прозрачность раствора», «Цветность
раствора» и «Бактериальные эндотоксины» проводят в субстанции,
предназначенной для производства лекарственных препаратов для
парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


