[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===



==== ФС 2.1.0339 Эритромицин (Erythromycinum)

*Взамен ФС 42-3577-98*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0339_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

Смесь антибиотиков-макролидов, продуцируемых штаммом Streptomyces
erythreus, основным компонентом является эритромицин A:
(3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-Тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-α-рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-β-D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион.

Cодержит не менее 93,0 % и не более 102,0 % суммы эритромицинов A, B и
C, из них эритромицинов B и C не более 5 % каждого в пересчёте на
безводное и не содержащее остаточных органических растворителей
вещество. Содержит не менее 930 мкг/мг и не более 1020 мкг/мг в
пересчёте на безводное вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или светло-жёлтый порошок или бесцветные или
светло-жёлтые кристаллы.

+*+ Гигроскопичен, проявляет полиморфизм.

*Растворимость*. Легко растворим в этаноле 96 %, растворим в метаноле,
мало растворим в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»).

[none]
* Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^–1^ по
положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного
стандартного образца эритромицина A.
* Если спектры различаются, по 50 мг субстанции и фармакопейного
стандартного образца эритромицина A растворяют отдельно в 1 мл
метиленхлорида, упаривают и сушат при температуре 60 °С в течение 3 ч
при остаточном давлении не более 0,67 кПа (5 мм. рт. ст.).
* Не учитывают полосы поглощения в области от 1980 до 2050 см^–1^.

[arabic,start=3]
. _Тонкослойная хроматография_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* _Пластинка_. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* _Подвижная фаза_. Тщательно перемешивают 4 объёма 2-пропанола, +
8 объёмов раствора ацетата аммония раствора 15 %, предварительно
доведённого до pH 9,6 аммиака раствором концентрированным 25 %, и 9
объёмов этилацетата. После расслаивания смеси используют верхний слой.
* _Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10,0 мг
субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем
же растворителем.
* _Раствор стандартного образца эритромицина А_. В мерную колбу
вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца
эритромицина A, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки
тем же растворителем.
* _Раствор стандартного образца спирамицина_. В мерную колбу вместимостью
20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца спирамицина,
растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем же
растворителем.
* На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора
(10 мкг) и растворов стандартных образцов эритромицина А (10 мкг) и
спирамицина (5 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе,
помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда
фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её
вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают
спиртовым сернокислым раствором анисового альдегида, сушат при
температуре 110 °С в течение 5 мин и просматривают в видимом свете.
* _Результат._ Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого
раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна
соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора
стандартного образца эритромицина А и отличаться по положению и окраске
от основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора стандартного
образца спирамицина.

[arabic,start=4]
. _Качественная реакция_. К 5,0 мг субстанции прибавляют 5 мл раствора
ксантгидрола и нагревают на водяной бане; появляется красное
окрашивание.

. _Качественная реакция_. Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл 25 %
хлористоводородной кислоты; через 10–20 мин появляется жёлтое
окрашивание.

[discrete]
===== Испытания

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ +
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Смесь растворителей_. Метанол—фосфатный буферный раствор pH 7,0 1:3.

_Буферный раствор_. 35,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900 мл
воды, при необходимости доводят pH до 9,0 2 М фосфорной кислотой, и
доводят объём раствора водой до 1000 мл.

_Подвижная фаза (ПФ)_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
50 мл буферного раствора, 400 мл воды, 165 мл +
2-метил-2-пропанола, 30 мл ацетонитрила и доводят объём раствора водой
до метки.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в смеси растворителей и доводят
объём раствора той же смесью до метки.

_Раствор стандартного образца эритромицина A_. В мерную колбу
вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца эритромицина A, растворяют в смеси растворителей и
доводят объём раствора той же смесью до метки.

_Стандартный раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг
(точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина B и
10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца
эритромицина C, растворяют в смеси растворителей и доводят объём
раствора той же смесью до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная
навеска) фармакопейного стандартного образца примеси B, растворяют в
20 мл стандартного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного
образца эритромицина А и доводят объём раствора стандартным раствором до
метки.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл
раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объём смесью
растворителей до метки.

_Раствор для идентификации пиков_. Распределяют 40 мг фармакопейного
стандартного образца эритромицина A по дну бюкса тонким (не более 1 мм)
слоем, нагревают при температуре 130 °С в течение 4 ч, охлаждают и
растворяют в 10,0 мл смеси растворителей.

*Примечание*

Эритромицин B: +
(3__R__,4__S__,5__S__,6__R__,7__R__,9__R__,11__R__,12__S__,13__R__,14__R__)-7,12-дигидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-_C_-метил-3-_O_-метил-α-_рибо_-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-β-D-_ксило_-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион +
[527-75-3].

Эритромицин C: +
(3__R__,4__S__,5__S__,6__R__,7__R__,9__R__,11__R__,12__R__,13__S__,14__R__)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-_C_-метил-α-_рибо_-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-α-D-_ксило_-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион +
[1675-02-1].

Примесь B: +
(3__R__,4__S__,5__S__,6__R__,7__R__,9__R__,11__R__,12__R__,13__S__,14__R__)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-_C_-метил-3-_O_-метил-α-_рибо_-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(метиламино)-β-D-_ксило_-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион +
[992-62-1].

Примесь E: +
(2__R__,3__R__,4__S__,5__R__,8__R__,9__S__,10__S__,11__R__,12__R__)-3,4-дигидрокси-9-[(2,6-дидезокси-3-_C_-метил-3-_O_-метил-α-L-_рибо_-гексопиранозил)окси]-2,4,8,10,12,14-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-β-D-_ксило_-гексопиранозил]oxy}-5-этил-6,15-диоксабицикло[10.2.1]пентадец-1(14)-ен-7-он +
[33396-29-1].

Примесь F: +
(2__R__,3__R__,6__R__,7__S__,8__S__,9__R__,10__R__)-3-[(2__R__,3__R__)-2,3-Дигидроксипентан-2-ил]-7-[(2,6-дидезокси-3-_C_-метил-3-_O_-метил-α-L-_рибо_-гексопиранозил)окси]-2,6,8,10,12-пентаметил-9-{[3,4,6-тридезоакси-3-(диметиламино)-β-D-_ксило_-гексопиранозил]окси}-4,13-диоксабицикло[8.2.1]тридец-1(12)-ен-5-он +
[105882-69-7].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, сополимер стирол-дивинилбензола для
хроматографии, 8 мкм, размер пор 100 нм; |

|Температура колонки |70 °С (термостатируют также не менее 1/3
предшествующего колонке капилляра); | |

|Скорость потока |2,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 215 нм; | |

|Объём пробы |100 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|5-кратное от времени удерживания основного
пика. |
|===

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки
разделительной способности хроматографической системы, раствор
стандартного образца эритромицина A, раствор сравнения и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений_. Эритромицин A – 1 (около
15 мин); примесь E – около 4.3; эритромицин B – около 1,8; примесь F –
около 1,5; эритромицин C – около 0,5; примесь B – около 0,45.

_Идентификация примесей_. Для идентификации эритромицинов B и C и
примеси B используют хроматограммы растворов для проверки разделительной
способности хроматографической системы и стандартного раствора,
примесей E и F – по хроматограмме раствора для идентификации и
относительным временам удерживания соединений.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы:

- _разрешение (R)_ между пиками примеси B и эритромицина C должно быть
не менее 0,8;

- _разрешение (R)_ между пиками примеси B и эритромицина A должно быть
не менее 5,5.

_Поправочные коэффициенты_. Для расчёта содержания следующих примесей
площади пиков умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты:
примесь E– 0,09; примесь F– 0,15.

_Допустимое содержание примесей_. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика
эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 3 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 2,3 раза
превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора
сравнения (не более 7 %).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,02 площади пика
эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,06 %), и
пики эритромицинов B и C.

*Тиоцианат-ионы*. Не более 0,3 %. Определяют методом спектрофотометрии
(ОФС «Спектрометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Все растворы готовят непосредственно перед использованием и защищают от
света.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г
субстанции, растворяют в 20 мл метанола, прибавляют 1,0 мл железа(III)
хлорида раствора 9 % и доводят объём раствора метанолом до метки.

_Эталонный раствор (готовят в двух повторностях)_. В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 0,1 г предварительно высушенного при
температуре 105 °С в течение 1 ч калия тиоцианата, растворяют в метаноле
и доводят объём раствора до метки тем же растворителем. В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём
раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают
5,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл 9 % раствора хлорида
железа(III) и доводят объём раствора метанолом до метки.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл
железа(III) хлорида раствора 9 % и доводят объём раствора метанолом до
метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого и эталонных растворов при
длине волны 492 нм относительно раствора сравнения.

_Пригодность системы_. Система считается пригодной, если отношение _S_
находится в пределах от 0,985 до 1,015:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0339_2.png[]
|===

где	_A~1~_ и _A~2~_	-	оптическая плотность эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно; +
	_a~1~_ и _a~2~_	-	навески калия тиоцианата при приготовлении эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно, г.


Содержание тиоцианат-ионов в субстанции в процентах (_X_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0339_3.png[]
|===

где	_A_	-	оптическая плотность испытуемого раствора; +
	_a_	-	навеска субстанции, г; +
	_58,08_	–	относительная молекулярная масса тиоцианат-иона; +
	_97,18_		относительная молекулярная масса тиоцианата калия.


*Вода*. Не более 6,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции и в качестве
растворителя раствор имидазола в метаноле 0,1 г/мл.

*Сульфатная зола*. Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы*. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после
сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с +
ОФС «Микробиологическая чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

. _ВЭЖХ._ Определение проводят в условиях испытания «Родственные
примеси».

[none]
* Содержание эритромицина A C~37~H~67~NO~13~ в субстанции в процентах
(_X_) в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических
растворителей вещество вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0339_4.png[]
|===

[none]
* где	_S~1~_	–	площадь пика эритромицина A на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного  стандартного образца эритромицинаA, мг; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей,%; +
	_P_	–	содержание эритромицина A в фармакопейном стандартном образце эритромицина A,%.

* Содержание эритромицина B C~37~H~67~NO~12~ и эритромицина C
C~36~H~65~NO~13~ в субстанции в процентах (_X_) в пересчёте на безводное
и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0339_5.png[]
|===

[none]
* где	_S~1~_	–	площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина B или эритромицина C, соответственно, мг; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей,%; +
	_P_	–	содержание эритромицина B или эритромицина C в фармакопейном стандартном образце эритромицина B или эритромицина C, соответственно,%.

[arabic,start=2]
. _Микробиологический метод._ Определение проводят в соответствии с ОФС
«Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в
агар».

[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.

+*+ Приводится для информации.
 

[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


