[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===


 
==== ФС.2.1.0442 Левосимендан (Levosimendanum)

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0442_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

_N_-{4-[(4__R__)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид.

Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % левосимендана
C~14~H~12~N~6~O в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* От жёлтого или жёлтого с зеленоватым, или жёлтого с
оранжевым оттенком цвета до тёмно-жёлтого с коричневатым оттенком цвета
аморфный порошок.

*Растворимость.* Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в
спирте 96 %, практически нерастворим в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца левосимендана.

. _Спектрофотометрия_ (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и
видимой областях»).

[none]
* _Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 12 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в этаноле и доводят объём
раствора до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл и
доводят объём раствора этанолом до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до
450 нм должен иметь максимумы при 383 нм и 289 нм, и минимум при 318 нм.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От –596 до –632 в пересчёте на сухое вещество
(0,1 % раствор субстанции в диметилформамиде, ОФС «Оптическое
вращение»).

*Прозрачность раствора*. Раствор 0,05 г субстанции в 20 мл этанола
должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции
(мутности) жидкостей»).

*Оптическая плотность.* Оптическая плотность раствора, полученного в
испытании «Прозрачность раствора», измеренная при длине волны 600 нм в
кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,3
(ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Растворяют 2,0 г натрия дигидрофосфата
дигидрата в 900 мл воды, доводят значение рН раствора фосфорной кислотой
концентрированной до 2,10, количественно переносят полученный раствор в
мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до
метки.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил.

_Растворитель._ Метанол—ПФА 200:800.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида, прибавляют
10 мл этанола и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и
доводят объём раствора растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь 1: +
(2__Z__)-({4-[(4__R__)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетамид +
[274263-65-9].

Примесь 2: +
этил[(2__Z__)-({4-[(4__R__)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетат] +
[58782509].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по
отношению к основаниям, эндкепированный, для хроматографии, 3 мкм; |

|Температура колонки |25 °C; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 380 нм; | |

|Объём пробы |30 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |80 → 70 |20 → 30
|5–15 |70 |30
|15–30 |70 → 10 |30 → 90
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Левосимендан – 1 (около
14 мин); примесь 1 – около 0,4; примесь 2 – около 1,1.

_*Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика левосимендана должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора сравнения:

_- фактор асимметрии пика (A~S~)_ левосимендана должен быть не
более 2,0;

_- относительное стандартное отклонение_ площади пика левосимендана
должно быть не более 5,0 % (6 введений).

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей 1 и 2 не должна более чем в 1,5 раза
превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения
(не более 0,15 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика
левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную
площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более
0,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на
хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической
системы (менее 0,05 %).

*Энантиомерная чистота.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

_Буферный раствор._ Растворяют 2,3 г аммония дигидрофосфата в 900 мл
воды, доводят значение рН раствора фосфорной кислотой концентрированной
до 3,50, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу
вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—буферный раствор 75:925.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида и доводят
объём раствора метанолом до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора метанолом до метки. В
мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора метанолом до метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы_. В мерную
колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг симендана, прибавляют 10 мл
диметилсульфоксида и доводят объём раствора метанолом до метки. В мерную
колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и 20 мг
фармакопейного стандартного образца левосимендана, прибавляют 10 мл
диметилсульфоксида и доводят объём раствора метанолом до метки.

*Примечание*

Декстросимендан: +
_N_-{4-[(4__S__)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид
[144238-75-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,6 мм, силикагель модифицированный овомукоидом для
хиральной хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |25 °C; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 380 нм; | |

|Объём пробы |5 мкл; | |

|Время хроматографирования |20 мин. | |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Левосимендан – 1 (около
10 мин); декстросимендан – около 1,2.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_отношение максимум/минимум (p/v)_ между пиками левосимендана и
декстросимендана должно быть не менее 1,25.

На хроматограмме раствора сравнения:

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика левосимендана должно быть не
менее 20;

- _фактор асимметрии пика (A~S~)_ левосимендана должен быть не
более 2,5;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика левосимендана
должно быть не более 5,0 % (6 введений).

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора
площадь пика декстросимендана не должна превышать площадь пика
левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6 %).

*Потеря в массе при высушивании.* Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная
навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,001 % (ОФС «Тяжёлые металлы», метод 3Б).

*Бактериальные эндотоксины.* Не более 16 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный
раствор субстанции  концентрацией 1 мг левосимендана в 1 мл этилового
спирта 96 %, нагревают не выше 70 °С и перемешивают до полного
растворения субстанции.

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси» со следующими изменениями.

Растворы используют свежеприготовленными.

_Подвижная фаза (ПФ)._ ПФБ—ПФА 400:600.

_Растворитель._ Диметилсульфоксид—этанол 10:10.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца левосимендана._ В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца левосимендана, растворяют в растворителе и доводят
объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[none]
* Объём пробы: 20 мкл; +
Время хроматографирования: 15 мин.


Хроматографируют раствор стандартного образца левосимендана и испытуемый
раствор.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора
стандартного образца левосимендана:

_- фактор асимметрии пика (A~S~)_ левосимендана должен быть не
более 2,0;

_- относительное стандартное отклонение_ площади пика левосимендана
должно быть не более 2,0 % (6 введений).

Содержание левосимендана C~14~H~12~N~6~O в субстанции в процентах в
пересчёте на сухое вещество (_X_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0442_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика левосимендана на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора стандартного образца левосимендана; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца левосимендана, мг; +
	_W_	–	потеря в массе при высушивании,%; +
	_P_	–	содержание левосимендана в фармакопейном стандартном образце левосимендана,%.


[discrete]
===== Хранение

В плотно укупоренной упаковке.

+*+ Перед проведением испытания должна быть проверена разделительная
способность хроматографической системы.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


