[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 
==== ФС.2.1.0485 Тобрамицин (Tobramycinum)

*Взамен ВФС 42-2011-90*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0485_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

_O_-3-Амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил-(1→6)-_O_-[2,6-диамино-2,3,6-тридезокси-α-D-_рибо_-гексопиранозил-(1→4)]-2-дезокси-D-стрептамин.

Тобрамицин получают с использованием штаммов _Streptomyces tenebrarius_
или другим способом.

Cодержит не менее 900 мкг на 1 мг тобрамицина C~18~H~37~N~5~O~9~ в
пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических
растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый порошок.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость*. Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте
96 %, практически нерастворим в хлороформе и эфире.

[discrete]
===== Идентификация

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме
испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика
тобрамицина на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина
(раздел «Количественное определение»).

. _ТСХ_. (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* Растворы используют свежеприготовленными.
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* _Подвижная фаза (ПФ)._ Хлороформ—аммиака раствор концентрированный
25 %—метанол 25:30:60.
* _Реактив для детектирования._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 1,0 г нингидрина, растворяют в смеси пиридин—бутанол 1:100 и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
* _Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 60 мг
субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.
* _Раствор стандартного образца тобрамицина._ В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца тобрамицин, растворяют в 5 мл воды и доводят объём раствора тем
же растворителем до метки.
* _Стандартный раствор._ Смешивают равные объёмы испытуемого раствора и
раствора стандартного образца тобрамицина.
* На линию старта пластинки наносят по 3 мкл испытуемого раствора
(18 мкг), раствора стандартного образца тобрамицина (18 мкг) и
стандартного раствора (18 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами
высушивают на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют
восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80–90 % длины
пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления
следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре
110 °С в течение 15 мин, опрыскивают реактивом для детектирования и
просматривают при дневном свете.
* _Результат._ Основные зоны адсорбции на хроматограмме испытуемого и
стандартного раствора по положению, интенсивности окраски и величине
должны соответствовать основным зонам адсорбции на хроматограмме
раствора стандартного образца тобрамицина.

[arabic,start=3]
. _Качественная реакция._ Растворяют 5,0 мг субстанции в 5 мл воды,
прибавляют 5 мл раствора нингидрина, нагревают на водяной бане в течение
3 мин; должно появиться фиолетово-синее окрашивание.

[none]
* _Раствор нингидрина._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,0 г
нингидрина, растворяют в спирте 96 % и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От +138 до +148 в пересчёте на безводное вещество
(4 % раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора.* Раствор 50 мг субстанции в 1 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y~6~ (ОФС «Степень
окраски жидкостей», метод 2).

*рН раствора.* От 9,0 до 11,0 (10 % раствор в воде, ОФС «Ионометрия»,
метод 3).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ТСХ (ОФС
«Тонкослойная хроматография»).

Растворы используют свежеприготовленными.

_Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

_Раствор натрия хлорида._ Растворяют 29,2 г натрия хлорида в 100 мл
воды.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Вода—спирт 96 %—раствор натрия хлорида 20:30:50.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг
субстанции, растворяют в 7 мл воды, доводят значение рН до 5,5 серной
кислоты раствором 0,5 М и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

_Реактив для детектирования (А)._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 20 мл натрия гипохлорита раствора концентрированного и доводят
объём раствора водой до метки.

_Реактив для детектирования (Б)._ Растворяют 1,1 г калия йодида в 60 мл
воды, кипятят в течение 15 мин, медленно прибавляют суспензию 1,5 г
крахмала растворимого в 10 мл воды, прибавляют 25 мл воды и кипятят в
течение 10 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры,
переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём раствора
водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг)
и раствора сравнения (0,05 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами сушат
на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим
способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80–90 % длины пластинки от линии
старта, её вынимают из камеры, сушат в потоке горячего воздуха до
удаления следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при
температуре 110 °С в течение 10 мин. Горячую пластинку обрабатывают
реактивом для детектирования (А), сушат в потоке холодного воздуха, пока
при добавлении капли реактива для детектирования (Б) зона адсорбции,
расположенная ниже основной зоны адсорбции, не приобретёт бледно-голубое
окрашивание. Затем обрабатывают пластинку реактивом для
детектирования (Б) и просматривают в дневном свете. Зона адсорбции,
расположенная ниже основной зоны адсорбции, из бледно-голубого
окрашивания переходит в голубовато-фиолетовое.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора
зона адсорбции любой примеси по совокупности величины и интенсивности
окраски не должна превышать зону адсорбции тобрамицина на хроматограмме
раствора сравнения (не более 1,0 %).

*Вода.* Не более 8,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 0,3 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы*. Не более 0,003 %. Определение проводят в соответствии
с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке,
полученном после сжигания 0,33 г субстанции, с использованием эталонного
раствора 1, или методом 12.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Аномальная токсичность.* Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 0,5 мг тобрамицина в 0,5 мл
натрия хлорида раствора 0,9 % для инъекций на мышь, внутривенно. Срок
наблюдения – 48 ч.

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 2,0 ЕЭ на 1 мг тобрамицина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

*Стерильность*. Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография»).

_Подвижная фаза (ПФ)._ В мерную колбу вместимостью 2000 мл помещают
2,0 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в 800 мл воды,
прибавляют 20 мл серной кислоты раствора 0,5 М, доводят объём раствора
ацетонитрилом до метки, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют
через фильтр с размером пор 0,2 мкм.

_Раствор фтординитробензола._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 1,0 г фтординитробензола, растворяют в спирте 96 % и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор трис(гидроксиметил)аминометана._ В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 0,75 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в воде
и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью
200 мл помещают 40,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
диметилсульфоксидом до метки. Срок годности раствора – 4 ч.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 67 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора
водой до метки.

_Раствор стандартного образца тобрамицина._ В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 11 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца тобрамицина, прибавляют 0,2 мл серной кислоты раствора 0,5 М,
растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора водой до метки.

_Дериватизация растворов._ В отдельные мерные колбы вместимостью 50 мл
помещают по 4,0 мл испытуемого раствора, раствора стандартного образца
тобрамицина и воды, прибавляют по 10,0 мл раствора фтординитробензола,
по 10,0 мл раствора трис(гидроксиметил)аминометана, перемешивают,
герметично закрывают, нагревают на водяной бане при температуре 60 °С в
течение 50 мин, вынимают из водяной бани, оставляют на 10 мин,
прибавляют ацетонитрил, почти доводя объём растворов до метки, охлаждают
до комнатной температуры и доводят объём растворов ацетонитрилом до
метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг
нафтолбензеина, растворяют в ацетонитриле и доводят объём раствора
ацетонитрилом до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора дериватизированным
раствором стандартного образца тобрамицина до метки. Раствор используют
сразу после приготовления.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|300 × 3,9 мм, *силикагель октадецилсилильный для
хроматографии, 5 мкм*; | 

|Температура колонки |25 °С; | | 

|Скорость потока |1,2 мл/мин; | | 

|Детектор |спектрофотометрический, 365 нм; | | 

|Объём пробы |20 мкл; | | 

|Время хроматографирования 2+|2,5-кратное от времени удерживания пика
тобрамицина. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы и дериватизированные растворы.

_Относительные времена удерживания соединений._ Тобрамицин – 1 (около
9 мин); нафтолбензеин – около 0,6.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками нафтолбензеина и тобрамицина должно
быть не менее 4,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина
_относительное стандартное отклонение_ площади пика тобрамицина должно
быть не более 2,0 % (6 определений).

Содержание тобрамицина C~18~H~37~N~5~O~9~ в субстанции в мкг/мг в
пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических
растворителей вещество (_X_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0485_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца тобрамицина, мкг; +
	_P_	–	содержание тобрамицина в фармакопейном стандартном образце тобрамицина, мкг/мг; +
	_W_	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


