[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 
 
==== ФС.2.1.0380 Атазанавира сульфат

*Атазанавир* +
*Atazanaviri sulfas* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0380_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

Диметил[(3__S__,8__S__,9__S__,12__S__)-9-бензил-3,12-ди(_трет_-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-6-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоата]
сульфат (1:1).

Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % атазанавира сульфата
C~38~H~54~N~6~O~11~S в пересчёте на безводное и свободное от
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. От белого до светло-жёлтого цвета кристаллический порошок,
может содержать агломераты.

+*+ Гигроскопичен.

*Растворимость*. Легко растворим в метаноле и спирте 96 %, мало
растворим или практически нерастворим в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом (3 мг
субстанции в 300 мг калия бромида), в области от 4000 до 400 см^-1^ по
положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного
стандартного образца атазанавира сульфата.

[none]
* Если спектры различаются, 20 мг испытуемой субстанции и 20 мг
фармакопейного стандартного образца по отдельности растворяют в 4 мл
смеси изопропиловый спирт—этилацетат 1:1, нагревают на водяной бане при
температуре около 50 °С до растворения, фильтруют, фильтр промывают 3 мл
нагретого до той же температуры растворителя. Фильтрат выдерживают в
холодильнике при температуре 5±1 °С в течение 14 ч и выпаривают в
вакуумном шкафу при температуре не более 55 °С, выдерживают в эксикаторе
в течение 1 ч при комнатной температуре и записывают спектры сухих
остатков.

[arabic,start=2]
. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика атазанавира на
хроматограмме раствора стандартного образца атазанавира сульфата (раздел
«Количественное определение»).

. _Качественная реакция_. Субстанция должна давать характерную реакцию
на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От –40 до –44 в пересчёте на безводное и свободное
от органических растворителей вещество (1 % раствор субстанции в
метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

*Родственные примеси*. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Буферный раствор._ В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают
2,73 г калия дигидрофосфата, растворяют в 900 мл воды и доводят значение
pH раствора фосфорной кислотой концентрированной до 3,5. Количественно
переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и
доводят объём раствора водой до метки.

_Растворитель_. Буферный раствор—ацетонитрил 50:50.

_Подвижная фаза А (ПФА)_. Ацетонитрил—буферный раствор 250:750.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)_. Буферный раствор—ацетонитрил 250:750.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, прибавляют 40 мл растворителя, обрабатывают
ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и
доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 4 мг фармакопейного
стандартного образца атазанавира смеси для проверки пригодности системы
(содержит примесь F), прибавляют 8 мл растворителя, обрабатывают
ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и
доводят объём раствора растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь A: 4-(пиридин-2-ил)бензойная кислота [4385-62-0].

Примесь B: 4-(пиридин-2-ил)бензальдегид [127406-56-8].

Примесь C:
диметил[(3S,8S,9S,12S)-9-бензил-3,12-ди(трет-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоат]
[1192224-24-0].

Примесь D:
(2S,3S)-3-амино-1-[(E)-1-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метилиден}гидразин-1-ил]-4-фенилбутан-2-ол.

Примесь F (атазанавир R,S,S,S-диастереомер):
диметил[(3R,8S,9S,12S)-9-бензил-3,12-ди(трет-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-6-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоат]
[1332981-14-2].

Примесь I:
метил{[(2__S__)-1-{[(2__S__,3__S__)-3-гидрокси-4-[(_E_)-1-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метилиден}гидразин-1-ил]-1-фенилбутан-2-ил]амино}-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил]карбамат}.

_Хроматографические условия_

[cols=",^,^,^",grid=none,frame=none]
|===
|Колонка |150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный,
для хроматографии, 3 мкм; | |
|Температура |25 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 215 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |100 |0
|5–45 |100 → 0 |0 → 100
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Атазанавир – 1 (около
30 мин); примесь A – около 0,3; примесь B – около 0,55; примесь C –
около 0,66; примесь D – около 0,76; примесь F – около 0,99; примесь I –
около 1,3.

_Идентификация примесей_. Для идентификации пиков примесей A, B, C, D и
I используют относительное время удерживания соединений. Для
идентификации пика примеси F используют относительное время удерживания
соединений, хроматограмму раствора для проверки разделительной
способности системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному
стандартному образцу атазанавира смеси для проверки пригодности системы.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение_ (_R~S~_) между пиками атазанавира и пиком примеси F должно
быть не менее 1,5.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания примесей площади
пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь A – 0,625; примесь B – 0,435; примесь C – 1,695;
примесь D – 0,67; примесь I – 0,67.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0380_2.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика атазанавира на хроматограмме раствора сравнения; +
	_P_	–	содержание атазанавира сульфата в фармакопейном стандартном образце атазанавира сульфата,%.


_Допустимое содержание примесей:_

- любая примесь – не более 0,10 %;

- сумма примесей – не более 0,5 %.

Не учитывают пики с относительными временами удерживания менее 0,2 и
пики, площадь которых менее 0,5 площади пика атазанавира на
хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

{asterisk}{asterisk} *_Примесь K_.* Не более 0,15 %. Определение проводят методом ВЭЖХ в
условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

_Раствор стандартного образца примеси К._ В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца
примеси К, прибавляют 9 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком до
растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до
метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 3,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь K: (2__S__)-2-[(метоксикарбонил)амино]-3,3-диметилбутановая
кислота [162537-11-3].

_Хроматографические условия_

[cols="32%,^68%",]
|===

|Объём пробы |20 мкл.
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |95 |5
|5–8 |95 → 0 |5 → 100
|8–14 |0 |100
|===

Хроматографируют раствор стандартного образца примеси К и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Атазанавир – 1 (около
10 мин); примесь К – около 0,4.

Для идентификации пика примеси К используют относительное время
удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца
примеси К.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора
стандартного образца примеси К _относительное стандартное отклонение_
площади примеси К должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Содержание примеси К в субстанции в процентах (_Х)_ вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0380_3.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика примеси К на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика примеси К на хроматограмме раствора стандартного образца примеси К; +
	_a~0~_	-	навеска фармакопейного стандартного образца примеси К, мг; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, мг.


*Вода.* Не более 1,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 % (ОФС «Тяжёлые металлы», метод 3Б).
Определение проводят в зольном остатке, полученном в испытании
«Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси» со следующими изменениями.

_Подвижная фаза (ПФ)_. Ацетонитрил—буферный раствор 500:500.

_Раствор стандартного образца атазанавира сульфата._ В мерную колбу
вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца атазанавира сульфата, прибавляют 40 мл
растворителя, обрабатывают ультразвуком до растворения, охлаждают до
комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[cols="32%,^68%",]
|===

|Объём пробы |25 мкл;
|Время хроматографирования |1,6-кратное от времени удерживания пика
атазанавира.
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
системы, раствор стандартного образца атазанавира сульфата и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Атазанавир – 1 (около
9,5 мин); примесь F – около 0,94.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора
стандартного образца атазанавира сульфата:

- _фактор асимметрии_ _пика_ (_A~S~_) атазанавира должен быть не более
1,5.

Содержание атазанавира сульфата C~38~H~52~N~6~O~7~·H~2~SO~4~ в
субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0380_4.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика атазанавира на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика атазанавира на хроматограмме раствора стандартного образца атазанавира сульфата; +
	_a~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца атазанавира сульфата, мг; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_P_	–	содержание атазанавира сульфата в фармакопейном стандартном образце атазанавира сульфата,%; +
	_W_	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Определение проводят в случае, если присутствие примеси обусловлено
технологическим процессом производства субстанции.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


