[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 
==== ФС.2.1.0591 Тетрациклина гидрохлорид

*Тетрациклин* +
*Tetracyclini hydrochloridum* 

*Взамен ФС 42-2519-97*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0591_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

(4__S__,4a__S__,5a__S__,6__S__,12a__S__)-3,6,10,12,12a-Пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамида
гидрохлорид.

Cодержит не менее 95,0 % и не более 102,0 % тетрациклина гидрохлорида
C~22~H~24~N~2~O~8~·HCl в пересчёте на сухое вещество.

*Субстанция образуется определёнными штаммами Streptomyces aerofaciens
или получается другими способами.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Жёлтый кристаллический порошок.

*Растворимость*. Легко растворим или растворим в воде, умеренно
растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в ацетоне.

+*+ Растворяется в растворах щелочей и карбонатов.

+*+ Водные растворы при стоянии мутнеют вследствие осаждения тетрациклина
основания.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
бромидом, в области от 4000 до 400 см^−1^ по положению полос поглощения
должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца
тетрациклина гидрохлорида.

. _Тонкослойная хроматография_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля октадецилсилильного
F~254~.
* _Подвижная фаза (ПФ_). Ацетонитрил—метанол—щавелевой кислоты раствор
0,5 М, доведённый до рН 2 аммиака раствором концентрированным 25 %
20:20:60.
* _Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.
* _Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида._ В мерную колбу
вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца
тетрациклина гидрохлорида, растворяют в метаноле и доводят объём
раствора тем же растворителем до метки.
* _Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг
фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 5 мг
демеклоциклина гидрохлорида и 5 мг окситетрациклина гидрохлорида,
растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до
метки.
* На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора,
раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида и раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы.
Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ
и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около
80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до
удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны
254 нм.
* _Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы должны
обнаруживаться три чётко разделённые зоны адсорбции.
* _Результат._ Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого
раствора по положению, интенсивности поглощения и величине должна
соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного
образца тетрациклина гидрохлорида.

[arabic,start=3]
. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика тетрациклина на
хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида
(раздел «Количественное определение»).

. _Качественная реакция_. Растворяют 2 мг субстанции в 5 мл серной
кислоты концентрированной; должно появиться фиолетово-красное
окрашивание. После прибавления 2,5 мл воды окраска должна измениться на
жёлтую.

. _Качественная реакция_. Субстанция должна давать характерную реакцию
А на хлориды (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение*. От –240 до –255 в пересчёте на сухое вещество (1 %
раствор субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ОФС
«Оптическое вращение»).

*Оптическая плотность.* Оптическая плотность испытуемого раствора,
измеренная при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 1 см
(относительно раствора сравнения), в течение 1 ч после приготовления
раствора, не должна превышать 0,5 (ОФС «Спектрофотометрия в
ультрафиолетовой и видимой областях»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты
растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

*pH раствора*. От 1,8 до 2,8 (1 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы используют свежеприготовленными.

_Раствор дикалия гидрофосфата._ В химический стакан вместимостью 1000 мл
помещают 35 г дикалия гидрофосфата, растворяют в воде, доводят значение
рН фосфорной кислотой разведённой 10 % до 9,00, переносят раствор в
мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до
метки.

_Раствор тетрабутиламмония гидросульфата._ В химический стакан
вместимостью 1000 мл помещают 10 г тетрабутиламмония гидросульфата,
растворяют в воде, доводят значение рН натрия гидроксида раствором 8,5 %
до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят
объём раствора водой до метки.

_Раствор динатрия эдетата._ В химический стакан вместимостью 1000 мл
помещают 40 г динатрия эдетата дигидрата, растворяют в воде, доводят
значение рН натрия гидроксида раствором 8,5 % до 9,00, переносят раствор
в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до
метки.

_Подвижная фаза (ПФ)._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
раствор 80,0 г _трет_-бутилового спирта в 200 мл воды, прибавляют 100 мл
раствора дикалия гидрофосфата, 200 мл раствор тетрабутиламмония
гидросульфата, 10 мл раствора динатрия эдетата и доводят объём раствора
водой до метки.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты
растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида._ В мерную колбу
вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного
стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в
хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем
же растворителем до метки.

_Раствор_ _стандартного образца примеси A_. В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 15 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца примеси A, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе
0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси C_. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца примеси C, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе
0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси D_. В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца примеси D, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе
0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 20,0 мл
раствора стандартного образца примеси A, 10,0 мл раствора стандартного
образца примеси C, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и
доводят объём раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до
метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы_. В мерную
колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца
тетрациклина гидрохлорида, 2,0 мл раствора стандартного образца примеси
A, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объём
раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного
образца примеси C и доводят объём раствора хлористоводородной кислоты
раствором 0,01 М до метки.

*Примечание*

Примесь A (4-эпитетрациклин): +
4__R__,4a__S__,5a__S__,6__S__,12a__S__)-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид +
[79-85-6].

Примесь В (2-ацетил-2-декарбамоилтетрациклин): +
(4__S__,4a__S__,5a__S__,6__S__,12a__S__)-2-ацетил-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-4a,5a,6,12a-тетрагидротетрацен-1,11(4__H__,5__H__)-дион +
[6542-44-5].

Примесь С (ангидротетрациклин): +
(4__S__,4a__S__,12a__S__)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид +
[1665-56-1].

Примесь D (4-эпиангидротетрациклин): +
(4__R__,4a__S__,12a__S__)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид +
[7518-17-4].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, сополимер стирол-дивинилбензол, 8 мкм; |
|Температура колонки |60°С; | |
|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |
|Детектор |спектрофотометрический, 254 нм; | |
|Объём пробы |20 мкл.
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки пригодности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пиков примесей используются
хроматограммы растворов для проверки пригодности и чувствительности
хроматографической системы.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки пригодности хроматографической системы:

- _разрешение (R~S~)_ между пиками примеси A (пик 1) и тетрациклина (пик
2) должно быть не менее 2,5;

- _разрешение (R~S~)_ между пиками тетрациклина (пик 2) и примеси D (пик
3) должно быть не менее 8,0:

- _фактор асимметрии_ _пика_ (_A~S~_) тетрациклина должен быть не более
1,25;

- на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической
системы _отношение сигнал/шум (S/N)_ для основного пика должно быть не
менее 3.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать площадь основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (не более 3,0 %);

- площадь пика примеси B (выходит на хвосте основного пика) не должна
превышать 0,5 площади пика примеси A на хроматограмме раствора сравнения
(не более 1,5 %);

- площадь пика примеси C не должна превышать площадь основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %);

- площадь пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

*Потеря в массе при высушивании*. Не более 2,0 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 2). Высушивают в вакууме до постоянной массы
1 г (точная навеска) субстанции при температуре 60°С и остаточном
давлении не превышающем 5 мм рт. ст.

*Сульфатная зола.* Не более 0,5 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы*. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А), в зольном остатке, полученном после
сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

{asterisk}{asterisk} *Аномальная токсичность*. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 1 мг тетрациклина в 0,5 мл воды
для инъекций на мышь. Срок наблюдения 48 ч.

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 0,5 ЕЭ/мг тетрациклина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные
примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца
тетрациклина гидрохлорида.

Содержание тетрациклина гидрохлорида C~22~H~24~N~2~O~8~·HCl в субстанции
в процентах (_Х_) в пересчёте на сухое вещество вычисляют по формуле:


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0591_2.png[]
|===


где	_S~1~_	–	площадь пика тетрациклина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика тетрациклина на хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, мг; +
	_W_	–	потеря в массе при высушивании,%; +
	_P_	–	содержание тетрациклина гидрохлорида в фармакопейном стандартном образце тетрациклина гидрохлорида,%.


[discrete]
===== Хранение

В плотно укупоренной упаковке в защищённом от света месте.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


