[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0585 Тенофовира дизопроксила фумарат

*Тенофовир* +
*Tenofoviri disoproxili fumaras* 

*Вводится впервые*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0585_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

Бис({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)[({[(2__R__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфоната]
(2__E__)-бут-2-ендиоат (1:1).

Содержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % тенофовира дизопроксила
фумарата C~19~H~30~N~5~O~10~P·C~4~H~4~O~4~ в пересчёте на безводное и
свободное от остаточных органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание*. Белый или почти белый кристаллический порошок.

*Растворимость*. Легко растворим в диметилформамиде, легко растворим или
растворим в метаноле, мало растворим или очень мало растворим в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^−1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата.

. _ВЭЖХ_. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика тенофовира
дизопроксила на хроматограмме раствора стандартного образца тенофовира
дизопроксила фумарата (раздел «Количественное определение»).

[discrete]
===== Испытания

*Температура плавления*. От 114 до 118 °C (ОФС «Температура плавления»).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

*_1. Энантиомерная чистота_*

_Буферный раствор_. Растворяют 7,7 г аммония ацетата в 800 мл воды и
доводят значение pH аммиака раствором 5 % или уксусной кислотой ледяной
до 6,8, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу
вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза (ПФ)_. Метанол—буферный раствор 150:850.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около
25,0 мг субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора ПФ до
метки.

_Раствор стандартного образца_ _тенофовира дизопроксила фумарата_. В
мерную колбу вместимостью 20 мл помещают около 50,0 мг фармакопейного
стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата, растворяют в ПФ и
доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл
раствора стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата и доводят
объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг фармакопейного
стандартного образца примеси А тенофовира дизопроксила фумарата,
растворяют в ПФ, доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
10 мл раствора стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата, и
доводят объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 мл раствора сравнения и
доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до
метки.

*Примечание*

Примесь А: +
бис({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)[([(2__S__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфонат] +
[1280130-08-6].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 4,0 мм, силикагель модифицированный α~1~-кислотным
гликопротеином для хиральной хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |15 °С; | |

|Температура образца |4–8 °С; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования |30 мин. | |
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Тенофовира дизопроксил –
1,0 (около 7 мин); примесь A – 1,4.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика тенофовира дизопроксила должно быть не менее
10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~S~)_ между пиками тенофовира
дизопроксила и примеси A должно быть не менее 1,5.

На хроматограмме раствора сравнения:

- _фактор асимметрии_ _пика_ _(A~S~)_ тенофовира дизопроксила должен
быть не более 2,5.

_Допустимое содержание примесей._ Содержание примеси А в субстанции в
процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

- примесь А – не более 1,0 %.

*_2. Другие примеси_*

_Буферный раствор_. Растворяют 1,41 г динатрия гидрофосфата безводного в
800 мл воды и доводят значение pH раствора фосфорной кислотой
концентрированной до 5,5, количественно переносят полученный раствор в
мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до
метки.

_Подвижная фаза А (ПФА)_. 2-Метил-2-пропанол—метанол—буферный раствор
25:275:700.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)_. 2-Метил-2-пропанол—метанол—буферный раствор
25:675:300.

_Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в ПФА и доводят объём раствора
ПФА до метки.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают около
5,0 мг фумаровой кислоты, растворяют в ПФА и доводят объём раствора ПФА
до метки.

_Раствор стандартного образца_ _тенофовира дизопроксила фумарата_. В
мерную колбу вместимостью 20 мл помещаю 10 мг (точная навеска)
стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата, растворяют в ПФА
и доводят объём раствора ПФА до метки. В мерную колбу вместимостью
100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФА
до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора ПФА до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 7,5 мг тенофовира
(примесь 1) и 7,5 мг аденина (примесь 2), растворяют в ПФА и доводят
объём раствора ПФА до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФА до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы_. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного
образца тенофовира дизопроксила фумарата и доводят объём раствора ПФА до
метки.

*Примечание*

Примесь 1: +
({[(2__R__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфоновая
кислота [147127-20-6].

Примесь 2: 9__H__-пурин-6-амин [73-24-5].

Примесь 3: +
({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)({[(2__R__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфонат) +
[211364-69-1].

Примесь 4: +
({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил){[(этоксикарбонил)окси]метил}[({[(2__R__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфонат] +
[1422284-16-9].

Примесь 5: +
(пропан-2-ил)({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)[({[(2__R__)-1-(6-амино-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфонат] +
[1246812-40-7].

Примесь 6: +
бис({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)[({[(2__R__)-1-(6-{[(пропан-2-илокси)карбонил]амино}-9__H__-пурин-9-ил)пропан-2-ил]окси}метил)фосфонат] +
[1244022-54-5].

Примесь 7: +
тетракис({[(пропан-2-илокси)карбонил]окси}метил)метиленбис[азандиил-9__H__-пурин-6,9-диил(2__R__)-1,2-пропандиилоксиметилен]бис(фосфонат), +
[1093279-76-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
5 мкм; |

|Температура колонки |35 °С; | |

|Температура образца |4–8 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–2 |100 |0
|2–30 |100 → 0 |0 → 100
|30–45 |0 |100
|45–50 |0 → 100 |100 → 0
|50–60 |100 |0
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор для проверки разделительной
способности хроматографической системы, раствор стандартного образца
тенофовира дизопроксила фумарата, раствор сравнения и испытуемый
раствор.

_Относительное время удерживания соединений_. Тенофовира дизопроксил – 1
(около 21 мин); фумаровая кислота – около 0,10; примесь 1 – около 0,12;
примесь 2 – около 0,14; примесь 3 – около 0,22; примесь 4 – около 0,78;
примесь 5 – около 0,80; примесь 6 – около 1,38; примесь 7 – около 1,76.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика фумаровой кислоты
используют хроматограмму раствора сравнения.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для пика тенофовира дизопроксила должно быть не менее
10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности
хроматографической системы _разрешение (R~S~)_ между пиками примесей 1 и
2 должно быть не менее 1,5.

На хроматограмме раствора стандартного образца тенофовира дизопроксила
фумарата:

- _фактор асимметрии_ _пика_ _(A~S~)_ тенофовира дизопроксила должен
быть не более 2,0.

_Поправочные коэффициенты_. Для расчёта содержания площади пиков
следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь 1 – 0,47; примесь 2 – 0,23; примесь 3 – 0,68;
примесь 4 – 1,39; примесь 6 – 1,37.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют
по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0585_2.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика тенофовира дизопроксила на хроматограмме раствора стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата, мг; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей; +
	_P_	–	содержание действующего вещества в фармакопейном стандартном образце тенофовира дизопроксила фумарата,%;


_Допустимое содержание примесей:_

- примесь 3 – не более 1,0 %;

- примесь 5 – не более 0,3 %;

- примеси 1, 2, 4, 6 и 7 – не более 0,15 % каждая;

- любая другая примесь – не более 0,10% каждая;

- сумма примесей – не более 2,0 %.

Не учитывают пики с относительным временем удерживания менее 0,1 от
времени удерживания пика тенофовира дизопроксила, пика фумаровой кислоты
и пики, площадь которых меньше площади пика тенофовира дизопроксила на
хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической
системы (менее 0,05 %).

*Хлорметилизопропилкарбонат*. Не более 0,15 %. Определение проводят
методом ГХ (анализ равновесного пара, ОФС «Газовая хроматография»).

_Испытуемый раствор._ Во флакон для парофазного анализа помещают 0,5 г
(точная навеска) субстанции, прибавляют 5,0 мл бензилового спирта,
закрывают и перемешивают до получения раствора.

_Раствор сравнения_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,2 г
(точная навеска) хлорметилизопропилкарбоната, растворяют в бензиловом
спирте и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную
колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят
объём раствора бензиловым спиртом до метки. Во флакон для парофазного
анализа помещают 5,0 мл полученного раствора.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._ В
мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл раствора сравнения и
доводят объём раствора бензиловым спиртом до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",,,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|длина 30 м; внутренний диаметр 0,53 мм ID, покрытая 3 мкм
плёнкой поли[(цианопропил)(фенил)][диметил]силоксана; |
|Газ-носитель |азот; | |

|Деление потока |1:5; | |

|Температура инжектора |180 °С; | |

|Температура детектора |260 °С; | |

|Температура колонки |
75 °С в течение 5 мин, +
нагрев до 150 °С со скоростью 10 °С/мин, +
нагрев до 230 °С со скоростью 40 °С/мин, +
230 °С в течение 5 мин; | |
|Детектор |пламенно-ионизационный. | |
|===

_Условия для парофазного хроматографирования_

[cols="20%,80%",grid=none,frame=none]
|===

|Объём флакона |20 мл;
|Температура инкубации |90 °С;
|Время инкубации |20 мин;
|Скорость перемешивания |600 об/мин;
|Температура шприца |105 °С;
|Время продувки |2 мин;
|Время хроматографирования |19,5 мин;
|Растворитель (холостой раствор) |бензиловый спирт.
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки чувствительности хроматографической системы отношение
_сигнал/шум (S/N)_ для пика хлорметилизопропилкарбоната должно
составлять не менее 10.

На хроматограмме раствора сравнения _относительное стандартное
отклонение_ площади пика хлорметилизопропилкарбоната должно быть не
более 15 % (6 введений).

Содержание хлорметилизопропилкарбоната (_X_) в процентах вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0585_3.png[]
|===

где	_S~1~_	-	площадь пика хлорметилизопропилкарбоната на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	-	площадь пика хлорметилизопропилкарбоната на хроматограмме раствора сравнения; +
	_a~1~_	-	навеска субстанции, г; +
	_a~0~_	-	навеска хлорметилизопропилкарбоната, г.


*Вода*. Не более 1,0 % (ОФС «Определение воды», способ 1). Для
определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии
с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б), в зольном остатке,
полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного
раствора 2.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

_1. Фумаровая кислота_. Определение проводят методом титриметрии. (ОФС
«Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

[none]
* Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 50 мл воды и титруют
0,1 М раствором гидроксида натрия. Конечную точку титрования
определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
* Параллельно проводят контрольный опыт.
* 1 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия соответствует 5,804 мг фумаровой
кислоты C~4~H~4~O~4~.
* Содержит не менее 17,5 % и не более 19,0 % фумаровой кислоты в пересчёте
на безводное и свободное от остаточных органических растворителей
вещество.

_2. Тенофовира дизопроксила фумарат_. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

[none]
* Все растворы, содержащие тенофовира дизопроксил и его примеси,
используют свежеприготовленными.
* _Буферный раствор_. Растворяют 1,0 мл триэтиламина в 500 мл воды и
доводят pH раствора фосфорной кислотой концентрированной до 6,0,
количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью
1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.
* _Подвижная фаза (ПФ)_. Ацетонитрил—буферный раствор 450:550.
* _Растворитель_. Ацетонитрил—вода 5:95.
* _Испытуемый раствор_. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём
раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора
растворителем до метки.
* _Раствор стандартного образца_ _тенофовира дизопроксила фумарата_. В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска)
фармакопейного стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата,
растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до
метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного
раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии,
5 мкм; |

|Температура колонки |30 °С; | |

|Температура образца |4–8 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования |20 мин. | |
|===

Хроматографируют раствор стандартного образца тенофовира дизопроксила
фумарата и испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора
стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата:

- _относительное стандартное отклонение_, площади пика тенофовира
дизопроксила должно быть не более 2,0 %;

- _фактор асимметрии_ _пика_ _(A~S~)_ тенофовира дизопроксила должен
быть не более 2,0.

Содержание тенофовира дизопроксила фумарата
C~19~H~30~N~5~O~10~P·C~4~H~4~O~4~ в субстанции в процентах (_X_) в
пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических
растворителей вещество вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0585_4.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика тенофовира дизопроксила на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика тенофовира дизопроксила на хроматограмме раствора стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата; +
	_а~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_а~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца тенофовира дизопроксила фумарата, мг; +
	_P_	–	содержание тенофовира дизопроксила фумарата в фармакопейном стандартном образце тенофовира дизопроксила фумарата,%; +
	_W_	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,%.


[discrete]
===== Хранение

В плотно укупоренной упаковке.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


