[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===
 

==== ФС 2.1.0350 Амикацина сульфат

*Амикацин* +
*Amikacini sulfas* 

*Взамен ВФС 42-1879-89*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0350_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

1-__N__-[(2__S__)-4-Амино-2-гидроксибутаноил]-6-__O__-(3-амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-4-__O__-(6-амино-6-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-D-стрептамина
сульфат (1:2).

Субстанцию получают полусинтетическим путём из канамицина А. Cодержит не
менее 96,5 % и не более 102,0 % амикацина сульфата
C~22~H~43~N~5~O~13~·2H~2~SO~4~ в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый порошок.

*Растворимость*. Легко растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 96 % и ацетоне.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»)_._ Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца амикацина сульфата.

. _ВЭЖХ._ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого
раствора должно соответствовать времени удерживания пика амикацина на
хроматограмме раствора стандартного образца амикацина сульфата (раздел
«Количественное определение»).

. _ТСХ_ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
* _Подвижная фаза (ПФ)._ Метиленхлорид—аммиака раствор—метанол 25:30:40.
* _Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 25 мг
субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
* _Раствор стандартного образца амикацина сульфата._ В мерную колбу
вместимостью 10 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца
амикацина сульфата, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до
метки.
* _Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного
стандартного образца канамицина моносульфата, растворяют в 1 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.
* На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора
(12,5 мкг), раствора стандартного образца амикацина сульфата (12,5 мкг)
и раствора для проверки разделительной способности хроматографической
системы (по 2,5 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами высушивают на
воздухе в течение 5 мин, помещают в предварительно насыщенную в течение
1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ
пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из
камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина
раствором уксусно-спиртовым 1,7 %, нагревают при 110 °C в течение 5 мин
и просматривают при видимом свете.
* _Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы должны
обнаруживаться 2 разделённые зоны адсорбции.
* _Результат_. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого
раствора по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне
адсорбции амикацина на хроматограмме раствора стандартного образца
амикацина сульфата.

[arabic,start=4]
. _Качественная реакция._ Раствор 45 мг субстанции в 5 мл воды должен
давать реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От +76 до +84 в пересчёте на сухое вещество (2 %
раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора.* Раствор 2,0 г субстанции в 5 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y~4~ или BY~4~ (ОФС
«Степень окраски жидкостей», метод 2).

*рН раствора.* От 2,0 до 4,0 (1 % раствор, ОФС «Степень окраски
жидкостей», метод 3).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

_Подвижная фаза А (ПФА)._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
1,8 г натрия октансульфоната, 20 г натрия сульфата безводного,
растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, прибавляют 14 мл
тетрагидрофурана и 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М,
предварительно доведённого фосфорной кислоты раствором 1 М до рН 3,0.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
1,8 г натрия октансульфоната, 28 г натрия сульфата безводного,
растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, прибавляют 14 мл
тетрагидрофурана и 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М,
предварительно доведённого фосфорной кислоты раствором 1 М до рН 3,0.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 33 мг
субстанции, растворяют в ПФА и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

_Раствор сравнения А_. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора ПФА до метки.

_Раствор сравнения Б_. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл
раствора сравнения А и доводят объём раствора ПФА до метки.

_Стандартный раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг
фармакопейного стандартного образца амикацина для проверки пригодности
хроматографической системы, содержащего примеси A, B, F и H, растворяют
в ПФА и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Раствор стандартного образца примеси I._ В мерную колбу вместимостью
20 мл помещают 6,6 мг фармакопейного стандартного образца примеси
амикацина I, растворяют в ПФА и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФА до метки.

_Постколоночный раствор_. Смесь натрия гидроксида раствор насыщенный,
свободный от карбонатов—вода, свободная от углерода диоксида 1:24,
который добавляется беспульсовым образом к эффлюенту колонки с помощью
полимерной смесительной спирали объёмом 375 мкл.

*Примечание*

Примесь A: +
1-_N_-[(2__S__)-4-амино-2-гидроксибутаноил]-4-_O_-(3-амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-6-_O_-(6-амино-6-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-L-стрептамин
[50725-24-1].

Примесь B: +
1,3-_N_-бис[(2__S__)-4-амино-2-гидроксибутаноил]-6-_O_-(3-амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-4-_O_-(6-амино-6-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-D-стрептамин
[927821-99-6].

Примесь F: +
4-_O_-{6-[(2__S__)-4-амино-2-гидроксибутанамидо]-6-дезокси-α-D-глюкопиранозил}-1-_N_-[(2__S__)-4-амино-2-гидроксибутаноил]-6-_O_-(3-амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-D-стрептамин
[197909-67-4].

Примесь H: +
1-_N_-[(2__S__)-4-амино-2-гидроксибутаноил]-6-_O_-(3-амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил)-4-_O_-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-D-стрептамин
[48237-20-3].

Примесь I: (2__S__)-4-Амино-2-гидроксибутановая кислота [40371-51-5].

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный,
для хроматографии, 5 мкм; | |

|Температура колонки |40 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |
импульсный амперометрический или эквивалентный с золотым индикаторным
электродом, хлорсеребряным электродом сравнения и вспомогательным
электродом из нержавеющей стали, образующим корпус ячейки;

потенциал детекции +0,05 В;

потенциал окисления +0,75 В;

потенциал восстановления −0,15 В; | |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Скорость постколоночного раствора |0,3 мл/мин. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–3 |100 |0
|3–38,0 |100 → 30 |0 → 70
|38,0–38,1 |30 → 0 |70 → 100
|38,1–68 |0 |100
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, растворы сравнения А и Б, стандартный
раствор и раствор стандартного образца примеси I.

_Относительное время удерживания соединений_. Амикацина сульфат – 1
(около 28 мин); примесь I – около 0,13; примесь F – около 0,92; примесь
B – около 0,95; примесь A – около 1,62; примесь H – около 1,95.

Для идентификации пиков примесей A, B, F и H используют хроматограмму
стандартного раствора и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному
стандартному образцу амикацина для проверки пригодности системы. Для
идентификации пика примеси I используют хроматограмму раствора
стандартного раствора I.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме стандартного
раствора _отношение максимум/минимум (p/v)_ между пиками примеси В и
амикацина сульфата должно быть не менее 5.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси I не должна превышать площади пика примеси I на
хроматограмме раствора стандартного образца примеси I (не более 0,5 %);

- площадь пика каждой из примесей A, B, F и H не должна превышать 0,5
площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более
0,5 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,5 площади
основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать 1,5 площади
основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 1,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на
хроматограмме раствора сравнения Б (менее 0,1 %).

*Потеря в массе при высушивании.* Не более 13,0 % (ОФС «Определение
воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска)
субстанции.

*Сульфаты.* От 23,3 до 25,8 % в пересчёте на сухое вещество. Определение
проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы
анализа)»).

Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 100 мл воды, доводят
значение pH аммиака раствором концентрированным 25 % до 11,0. Прибавляют
10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида и 0,5 мг фталеинового пурпурного.

Полученный раствор титруют 0,1 М раствором натрия эдетата. Когда окраска
начинает меняться, прибавляют 50 мл спирта 96 % и продолжают титрование
до исчезновения фиолетово-синей окраски.

Параллельно проводят контрольный опыт.

Разность объёмов 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует объёму
0,1 М раствора бария хлорида, прореагировавшего с сульфатами.

Содержание сульфата SO~4~ в пересчёте на сухое вещество в процентах
(_Х_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0350_2.png[]
|===

где	_V~1~_	-	объём 0,1 М раствора натрия эдетата, израсходованный на титрование в основном опыте, мл; +
	_V~0~_	-	объём 0,1 М раствора натрия эдетата, израсходованный на титрование в контрольном опыте, мл; +
	_a_	–	навеска субстанции, мг; +
	_K_	-	поправочный коэффициент 0,1 М раствора натрия эдетата; +
	_9,606_	-	количество сульфата, мг, соответствующее 1 мл 0,1 М раствора бария хлорида, мг/мл; +
	_W_	–	потеря в массе при высушивании,%.


*Сульфатная зола.* Не более 1,0 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в
испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

+*+ *Аномальная токсичность.* Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 1,0 мг амикацина в 0,5 мл натрия
хлорида раствора 0,9 % для инъекций на мышь, внутривенно. Срок
наблюдения – 48 ч.

+*+ *Бактериальные эндотоксины.* Не более 0,33 ЕЭ на 1 мг амикацина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

+*+ *Стерильность.* Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

*Микробиологическая чистота*. В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография»).

_Подвижная фаза (ПФ)._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
1,8 г натрия октансульфоната, 20 г натрия сульфата безводного,
растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, прибавляют 58 мл
ацетонитрила и 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М, предварительно
доведённого фосфорной кислоты раствором 1 М до рН 3,0.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора ПФ
до метки.

_Раствор стандартного образца амикацина._ В мерную колбу вместимостью
10 мл помещают 37,4 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного
образца амикацина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора ПФ до метки.

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный,
для хроматографии, 5 мкм; | |

|Температура колонки |40 °С; | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 200 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл. | |
|===

Хроматографируют раствор стандартного образца амикацина и испытуемый
раствор.

Время удерживания амикацина – около 30 мин.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора
стандартного образца амикацина:

- _фактор асимметрии_ _пика (A~S~)_ амикацина должен быть не более 1,5;

- _относительное стандартное отклонение_ площади пика амикацина должно
быть не более 1,5 % (6 введений).

Содержание амикацина сульфата C~22~H~43~N~5~O~13~·2H~2~SO~4~ в
субстанции в процентах в пересчёте на сухое вещество (_X_) вычисляют по
формуле:


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_fs_2.1.0350_3.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика амикацина на хроматограмме испытуемого раствора; +
	_S~0~_	–	площадь пика амикацина на хроматограмме раствора стандартного образца амикацина; +
	_a~1~_	–	навеска субстанции, мг; +
	_a~0~_	–	навеска фармакопейного стандартного образца амикацина, мг; +
	_W_	–	потеря в массе при высушивании,%; +
	_P_	–	содержание амикацина в фармакопейном стандартном образце амикацина,%; +
	_585,60_	–	молекулярная масса амикацина; +
	_781,76_	–	молекулярная масса амикацина сульфата.


[discrete]
===== Хранение

В герметично закрытой упаковке.

+*+ Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


