[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0399 Глутатион


*Вводится впервые*


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0399_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

L-γ-Глутамил-L-цистеинилглицин.

Cодержит не менее 98,0 % и не более 101,0 % глутатиона
C~10~H~17~N~3~O~6~S в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные
кристаллы.

*Растворимость.* Легко растворим в воде, очень мало растворим в этаноле
96 % и метиленхлориде.

[discrete]
===== Идентификация

_ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).
Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1^ по
положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного
стандартного образца глутатиона.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От −15,5 до −17,5 в пересчёте на сухое вещество
(4 % раствор субстанции в воде ОФС «Оптическое вращение»).

*Прозрачность раствора.* Раствор 5,0 г субстанции в 50 мл воды должен
быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)
жидкостей»).

*Цветность раствора.* Раствор, полученный в испытании «Прозрачность
раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей»,
метод 2).

*Родственные примеси.* Определение проводят методом капиллярного
электрофореза (ОФС «Капиллярный электрофорез»).

Все растворы используют сразу после приготовления.

_Ведущий электролит (ВЭ)._ В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают
1,5 г натрия дигидрофосфата безводного, растворяют в 230 мл воды,
доводят значение рН фосфорной кислотой концентрированной до 1,8 и
доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор внутреннего стандарта А._ В мерную колбу вместимостью 50 мл
помещают 0,1 г (точная навеска) фенилаланина, растворяют в ВЭ и доводят
объём раствора ВЭ до метки.

_Раствор внутреннего стандарта Б._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 10,0 мл раствора внутреннего стандарта А и доводят объём
раствора ВЭ до метки.

_Испытуемый раствор А._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в ВЭ и доводят объём раствора ВЭ
до метки.

_Испытуемый раствор Б._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворе внутреннего
стандарта Б и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

_Стандартный раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг
(точная навеска) субстанции, растворяют в растворе внутреннего
стандарта А и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора ВЭ до метки.

_Раствор для проверки пригодности электрофоретической системы._ В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают по 5 мг L-цистеина, глутатиона
окисленного и L-γ-глутамил-L-цистеина, растворяют в ВЭ и доводят объём
раствора ВЭ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г
субстанции, растворяют в 5 мл ВЭ, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего
стандарта А, 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ВЭ до
метки.

_Контрольный раствор._ ВЭ.

*Примечание*

Примесь А: L-цистеинилглицин [19246-18-5].

Примесь В (L-цистеин): (2__R__)-2-амино-3-сульфанилпропановая кислота
[52-90-4].

Примесь С (глутатион окисленный):
(2→2')-бис(L-γ-глутамил-L-цистеинилглицин)дисульфид [27025-41-8].

Примесь D: L-γ-глутамил-L-цистеин [636-58-8].

Примесь E: неизвестная структура.

_Электрофоретические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Капилляр 2+|кварцевая капиллярная, 50 см × 75 мкм;  |

|Прекондиционирование нового капилляра ^|*Растворитель* ^|*Время, мин*
^|*Давление, кПа*

| |хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М |20 |138;

| |вода |10 |138;

| |ВЭ |40 |350;

| 2+|Для полного уравновешивания капилляра предыдущую стадию промывки
повторяют при напряжении 20 кВ в течение 60 мин; | 

|Прекондиционирование капилляра |ВЭ |40 |138;

|Промывка капилляра |вода |1 |138;

| |натрия гидроксида раствор 0,1 М |2 |138;

| |вода |1 |138;

| |хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М |3 |138;

| |ВЭ |10 |138;

|Температура капилляра |25 °C; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 200 нм; | |

|Ввод пробы |5 с·3,45 кПа; | |

|Напряжение |20 кВ; | |

|Время анализа |45 мин. | |
|===

Последовательно анализируют контрольный раствор, раствор для проверки
пригодности электрофоретической системы, стандартный раствор, испытуемый
раствор А и испытуемый раствор Б.

_Относительное время миграции._ Внутренний стандарт – 1 (около 14 мин);
примесь А – около 0,77; примесь В – около 1,04; примесь Е – около 1,2;
примесь С – около 1,26; примесь D – около 1,3.

_Пригодность электрофоретической системы._ На электрофореграмме
испытуемого раствора А не должно быть пика, соответствующего по времени
миграции пику внутреннего стандарта, при необходимости корректируют
площадь внутреннего стандарта.

На электрофореграмме раствора для проверки пригодности
электрофоретической системы:

- _разрешение (R~S~)_ между пиками внутреннего стандарта и примеси В
должно быть не менее 1,5, при необходимости увеличивают значение рН
натрия гидроксида раствором 8,5 %;

- _отношение максимум/минимум (p/v)_ между пиками примеси D и глутатиона
должно быть не менее 2,5, при необходимости уменьшают значение рН
фосфорной кислотой концентрированной.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания площади пиков
следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты:
примесь В – 3,0; примесь D – 1,4.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (_Х_) вычисляют по
формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0399_2.png[]
|===

где	_B~1~_	–	отношение площади пика любой примеси к площади пика внутреннего стандарта на электрофореграмме испытуемого раствора (Б); +
	_B~0~_	-	отношение площади пика глутатиона к площади пика внутреннего стандарта на электрофореграмме стандартного раствора; +
	_t~1~_	-	время миграции соответствующей примеси на электрофореграмме испытуемого раствора (Б), мин; +
	_t~0~_	-	время миграции глутатиона на электрофореграмме стандартного раствора, мин; +
	_t~is~^1^_	-	время миграции внутреннего стандарта на электрофореграмме испытуемого раствора (Б), мин; +
	_t~is~^0^_	-	время миграции внутреннего стандарта на электрофореграмме стандартного раствора, мин.


_Допустимое содержание примесей:_

- примеси А, В, Е – не более 0,5 % каждая;

- примесь С – не более 1,5 %;

- примесь D – не более 1,0 %;

- любая другая примесь – не более 0,2 %;

- сумма примесей – не более 2,5 %.

Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,05 %.

*Потеря в массе при высушивании.* Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная
навеска) субстанции.

*Аммоний.* Не более 0,02 %

_Стандартный раствор аммония._ В мерную колбу вместимостью 100 мл
помещают 74,1 мг (точная навеска) аммония хлорида, растворяют в воде и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу
вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл полученного раствора. Раствор
готовится непосредственно перед использованием.

_Испытуемый раствор_. В коническую колбу с притёртой пробкой
вместимостью 25 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в 1 мл воды,
прибавляют 0,3 г магния оксида и перемешивают.

_Эталонный раствор_. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 мл
стандартного раствора аммония, прибавляют 1 мл воды, 0,3 г магния оксида
и перемешивают.

Над реакционными смесями испытуемого и эталонного растворов подвешивают
по полоске полиэтилена шириной 1 см с прикреплёнными несколькими каплями
воды отрезками серебряно-марганцевой бумаги, и закрывают колбы пробками.
Содержимое колб перемешивают, не допуская попадания брызг на бумагу, и
выдерживают на водяной бане при температуре 40 ºС в течение 30 мин.
Окраска бумаги, используемой в испытуемом растворе, не должна быть
интенсивнее окраски бумаги, используемой в эталонном растворе.

*Железо.* Не более 0,001 % (ОФС «Железо», метод 2).

_Испытуемый раствор._ В делительную воронку помещают 1 г (точная
навеска) субстанции, растворяют в 10 мл хлористоводородной кислоты
разведённой 7,3 %, экстрагируют тремя порциями метилизобутилкетона по
10 мл, каждый раз встряхивая в течение 3 мин. Объединяют органические
извлечения, прибавляют 10 мл воды и встряхивают в течение 3 мин.
Используют водный слой.

*Сульфаты.* Не более 0,03 % (ОФС «Сульфаты», метод 2).

_Испытуемый раствор._ Смешивают 5 мл раствора, полученного в испытании
«Прозрачность раствора», и 15 мл воды.

*Хлориды.* Не более 0,02 % (ОФС «Хлориды»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г
(точная навеска) субстанции, растворяют в азотной кислоте разведённой
12,5 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную
колбу вместимостью 50 мл помещают 10,0 мл полученного раствора,
прибавляют 10 мл водорода пероксида, нагревают на водяной бане в течение
30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора
водой до метки.

*Сульфатная зола.* Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом титриметрии. (ОФС «Титриметрия
(титриметрические методы анализа)»).

В коническую колбу с притёртой пробкой помещают 0,5 г (точная навеска)
субстанции, 2,0 г калия йодида растворяют в 50 мл воды, охлаждают на
ледяной бане, прибавляют 10,0 мл хлористоводородной кислоты 25 %,
20,0 мл йода раствора 0,05 М, закрывают колбу пробкой и выдерживают в
тёмном месте в течение 15 мин, титруют натрия тиосульфата раствором
0,1 М. Индикатор прибавляют ближе к концу титрования (индикатор – 1,0 мл
крахмала раствор 1 %, содержащий 0,01 % ртути(II)).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл раствора йода 0,05__ __М соответствует 30,73 мг глутатиона
C~10~H~17~N~3~O~6~S.

[discrete]
===== Хранение

В защищённом от света месте.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


