[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===



===== ОФС.1.2.1.0009 Оптическая микроскопия

*Взамен ОФС.1.2.1.0009.15*


Оптической микроскопией называют совокупность методов исследования
частиц фармацевтических образцов лекарственных средств, невидимых
невооруженным глазом, с помощью оптического микроскопа.

Размер частиц, которые могут быть исследованы данным методом,
определяется разрешающей способностью микроскопа и обычно составляет
1 мкм и более. Используют также микроскопы с общим увеличением более
1500 крат, что позволяет характеризовать объекты размером от 0,5 мкм с
разрешением отдельных структур объекта до 0,1 мкм.

====== Область применения

Оптическую микроскопию применяют:

- в фармакопейном анализе для определения размера частиц при контроле
качества мягких лекарственных форм, суспензий, эмульсий, аэрозолей;

- в технологии лекарственных форм для определения степени измельчения
фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ;

- для исследования кристаллической структуры фармацевтических
субстанций;

- для определения характеристик (формы и размера) частиц
фармацевтических субстанций, которые не являются сферическими (не имеют
сферическую форму).

====== Оборудование

Оптический микроскоп имеет двухступенчатую систему увеличения,
образованную объективом и окуляром. Все узлы микроскопа монтируются на
массивном основании. На основании микроскопа установлен трубодержатель,
в котором укреплён тубус с объективом и окуляром. Под объективом
находится предметный столик, под которым расположена осветительная
система (зеркало, коллектор, конденсор).

Для освещения объекта наблюдения может быть использован как естественный
свет, так и специальные источники света (встроенные или внешние
осветители).

Микроскоп может быть снабжён дополнительными приспособлениями
(фазово-контрастными устройствами, конденсорами тёмного поля,
поляризаторами, анализаторами и др.) и, в зависимости от выбранного
метода исследования, может быть светлопольным, тёмнопольным,
фазово-контрастным, поляризационным и др.

Испытуемый образец помещают на предметный столик. Свет от источника
света, проходя через осветительную систему, испытуемый образец (далее –
образец) и объектив, попадает в окуляр или установленную вместо него
систему регистрации, фото- или видеокамеру. Через окуляр осуществляют
визуальное исследование образца, а соединённая с компьютером цифровая
фото- или видеокамера позволяет регистрировать изображения образца,
после чего их можно обрабатывать по специальным программам в полу- или
полностью автоматическом режиме.

====== Условия калибровки и измерения

Увеличение микроскопа (произведение увеличений объектива, окуляра и
дополнительных приставок) должно быть достаточным для адекватного
описания и определения размеров самых мелких частиц испытуемого образца.

Для каждого диапазона увеличения следует выбирать максимальную числовую
апертуру объектива. Для контроля контрастности и детализации изображения
окрашенных образцов необходимо использовать цветные фильтры с
относительно узким спектром пропускания. Цветные фильтры могут
применяться и для ахроматических (бесцветных) образцов.

Настройку всех элементов оптической системы и фокусировку проводят в
соответствии с прилагаемой к микроскопу инструкцией. Калибровку проводит
сертифицированная специализированная организация.

====== Методика

Испытуемые образцы исследуют с использованием или без использования
иммерсионной жидкости. Природа применяемой иммерсионной жидкости в
значительной степени определяется физическими свойствами испытуемого
образца, который не должен в ней растворяться. В качестве иммерсионной
жидкости при исследовании фармацевтических субстанций и вспомогательных
веществ, если нет других указаний в фармакопейной статье, используют
минеральные масла: вазелиновое масло, иммерсионное масло для микроскопии
классическое или профессиональное, водный раствор глицерина и др.

Частицы порошка должны находиться в одной плоскости и должны быть
диспергированы так, чтобы были видны отдельные частицы (недопустимо
слипание частиц).

При приготовлении образца для микроскопии (в том числе, при
диспергировании в иммерсионной жидкости) должны быть сохранены
первоначальный размер частиц и их распределение по размерам,
свойственные испытуемому образцу.

Лекарственные формы анализируют без разведения или разводят, как указано
в фармакопейной статье.

При исследовании порошков от 5 мг до 100 мг порошка суспендируют в
подходящем объёме, например, 10 мл иммерсионной жидкости, добавляя при
необходимости смачивающий агент (поверхностно-активные вещества).

На предметное стекло в счётное поле микроскопа помещают 1–2 капли
полученной гомогенной суспензии, содержащей не менее 10 мкг вещества.

Предел размера частиц и допустимое количество частиц, превышающее этот
предел, для каждой фармацевтической субстанции указан в фармакопейной
статье или определяется в зависимости от задач проводимых испытаний.

Анализ лекарственных форм (по показателю «Размер частиц») проводят, как
указано в соответствующей фармакопейной статье.

*_Определение кристаллического состояния вещества_*. Если не указано
иное, испытуемый образец в минеральном масле помещают на предметное
стекло и исследуют при помощи поляризационного микроскопа: при вращении
предметного столика частицы проявляют двойное лучепреломление
(демонстрируют интерференционную окраску) и положение экстинкции
(поглощение и рассеяние света).

*_Фотографирование объекта_*. При необходимости фотографирования объекта
используют цифровую фото- или видеокамеру, соединённую с компьютером с
установленным программным обеспечением.

Испытуемый образец нужно чётко сфокусировать на плоскости фотоэмульсии;
затем определить фактическое увеличение с помощью калиброванного объект
– микрометра, используя фотопленку с достаточной светосилой, разрешающей
способностью и контрастностью; экспозиция и обработка должны быть
одинаковы как для фотографий испытуемого образца, так и для определения
увеличения.

На видимый размер фотографии влияют процессы экспонирования, проявления
и печати, разрешающая способность микроскопа.

====== Характеристика формы частиц

На <<im_ofs_1.2.1.0009_1,рис. 1>> представлены наиболее часто встречающиеся формы частиц.

[[im_ofs_1.2.1.0009_1]]
[caption="Рисунок 1. "]
.Формы частиц: 1 – равносторонние: частицы с одинаковой длиной, шириной и толщиной, включая кубические и сферические частицы; 2 – игольчатые: тонкие, похожие на иглу частицы, или сходные с ней по соотношению длины и толщины; 3 – колоннообразные: длинные, тонкие частицы с шириной и толщиной больше, чем игольчатые; 4 – чешуйчатые: тонкие, плоские с одинаковой шириной и длиной; 5 – пластинчатые: плоские, одинаковые по длине и ширине, но с большей толщиной, чем чешуйчатые; 6 – планкообразные: крупные, тонкие, пластинчатые частицы. 
image::im_ofs_1.2.1.0009_1.png[]




Частицы могут быть иной, неопределённой формы.

====== Характеристика размера частиц

Способ определения размера частицы зависит от её формы. Для сферических
частиц размер определяется диаметром. Размер частиц, представленных на
<<im_ofs_1.2.1.0009_1,рис. 1>>, обычно определяют по значению максимальной длины. На <<im_ofs_1.2.1.0009_2,рис. 2>> представлены размеры, обычно используемые для характеристики частиц неправильной формы.

[[im_ofs_1.2.1.0009_2]]
[caption="Рисунок 2. "]
.Способы определения размеров частиц неправильной формы: 1 – Диаметр Фере – расстояние между параллельными линиями, касательными к случайно ориентированной частице и перпендикулярными к шкале окуляра; 2 –Диаметр Мартина – длина хорды, которая делит площадь проекции случайно ориентированной частицы на две равные части; 3 – Эквивалентный диаметр – диаметр окружности, площадь которой равна площади проекции частицы; 4 –Максимальный размер по горизонтали; 5 – Длина – максимальный размер частицы, ориентированной параллельно шкале окуляра, от одного её конца до другого; 6 – Ширина – максимальный размер частицы, измеренный под прямым углом к длине.
image::im_ofs_1.2.1.0009_2.png[]

Под единичной частицей, как правило, подразумевают мельчайшее
образование. Частица может быть жидкой или вязкой каплей, моно- или
поликристаллической, аморфной или агломератом; частицы могут быть
ассоциированными.

По степени ассоциации частицы могут быть описаны следующими терминами:

- _ламеллары_ – скученные пластинки;

- _агрегаты_ – масса слипшихся частиц;

- _агломераты_ – сплавленные или сцементированные частицы;

- _конгломераты_ – смесь двух или более типов частиц;

- _сферолиты_ – сферический кластер тонких игольчатых кристаллов;

- _друзы_ – частицы, покрытые очень мелкими частицами.

Поверхность частиц может быть описана следующим образом:

- _гладкая_ – свободная от неровностей, шероховатости или налипаний;

- _шероховатая_ – неровная, негладкая;

- _ломкая_ – частично расщеплённая, разрушенная, с трещинами;

- _пористая_ – имеющая отверстия или ходы;

- _изрытая_ – с маленькими выемками.

Частицы могут быть описаны также:

- _по форме краёв_ – угловатые, зазубренные, гладкие, острые, ломкие;

- _по оптическим свойствам_ – окрашенные, прозрачные, полупрозрачные,
непрозрачные;

- _по наличию дефектов_ – без включений, с включениями.
 

[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


