[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|=== 


==== ФС 2.1.0206 Хлорамбуцил (Chlorambucilum)

*Взамен ФС.2.1.0206.18*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0206_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

4-{4-[Бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота.

Cодержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % хлорамбуцила
C~14~H~19~Cl~2~NO~2~ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных
органических растворителей вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Белый или почти белый кристаллический порошок.

*Растворимость.* Легко растворим в спирте 96 %, практически нерастворим
в воде.

[discrete]
===== Идентификация

. _ИК-спектрометрия_ (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной
области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до
400 см^–1^ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру
фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила.

. _Качественная реакция._ В 2 мл спирта 96 % растворяют 50 мг
субстанции, прибавляют 0,5 мл серебра нитрата раствора 0,1 М и нагревают
в течение 2 мин на кипящей водяной бане; должен выпасть белый
творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

[discrete]
===== Испытания

*Температура плавления.* От 64 до 68 °C (ОФС «Температура плавления»,
метод 1).

*Родственные примеси*

*_1. Примесь G._* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными
или хранят при температуре 4–8 °С в защищённом от света месте не более
суток.

_Подвижная фаза (ПФ)._ Метанол—трифторуксусной кислоты раствор 1 %
500:500.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг
субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную
колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят
объём раствора ПФ до метки.

_Раствор для проверки пригодности хроматографической системы._ В мерную
колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного
образца хлорамбуцила, содержащего примесь G, растворяют в метаноле и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь G: +
4-{2-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота
[178481-89-5] или 4-{3-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота +
[134862-11-6].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|150 × 3,9 мм, силикагель фенилсилильный для хроматографии,
4 мкм; |

|Температура колонки |25 °С; | |

|Скорость потока |1,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |20 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|2-кратное от времени удерживания основного
пика. |
|===

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической
системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Хлорамбуцил – 1 (около
11 мин); примесь G – около 1,2.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пика примеси G используют
относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для
проверки пригодности хроматографической системы.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки пригодности хроматографической системы _разрешение (R~S~)_
между пиками хлорамбуцила и примеси G должно быть не менее 1,5.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора
площадь пика примеси G не должна превышать площадь основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4 %).

*_2. Другие примеси._* Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными
и защищают от света.

_Подвижная фаза А (ПФА)_. Растворяют 1,9 г аммония ацетата в 800 мл воды
и доводят значение рН уксусной кислотой до 3,9, переносят полученный
раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора
водой до метки.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил.

_Растворитель._ Хлористоводородная кислота 1 %—ацетонитрил 10:90.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг
субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора
растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг фармакопейного
стандартного образца хлорамбуцила для проверки пригодности
хроматографической системы, содержащего примеси B и E, растворяют в
растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

*Примечание*

Примесь В: +
4-{4-[(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота
[116505-53-4].

Примесь Е: +
4-[4-({2-[(4-{4-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутаноил)окси]этил}(2-хлорэтил)амино)фенил]бутановая
кислота [1988791-13-4].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 3,0 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный
для хроматографии, 5 мкм; |

|Температура колонки |25 °С; | |

|Скорость потока |0,8 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 260 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл; | |

|Время хроматографирования 2+|2-кратное от времени удерживания основного
пика. |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |60 |40
|5–15 |60 → 10 |40 → 90
|15–25 |10 |90
|25–30 |10 → 60 |90 → 40
|===

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности
хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Хлорамбуцил – 1 (около
12 мин); примесь В – около 0,5; примесь Е – около 1,4.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пиков примесей В и Е
используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму
раствора для проверки разделительной способности хроматографической
системы и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу хлорамбуцила
для проверки пригодности хроматографической системы.

_Пригодность хроматографической системы_. На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси В и хлорамбуцила должно быть не
менее 5,0.

_Допустимое содержание примесей._ На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси В не должна более чем в 4 раза превышать площадь
основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4 %);

- площадь пика примеси Е не должна более чем в 6 раз превышать площадь
основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь
основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную
площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более
1,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на
хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

*Вода.* Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для
определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

*Сульфаты.* Не более 0,05 % (ОФС «Сульфаты», метод 1). К 0,3 г
субстанции прибавляют 15 мл воды, встряхивают до растворения и
фильтруют.

*Сульфатная зола.* Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в
испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

*Остаточные органические растворители*. В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия
(титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,3 г (точная навеска) субстанции в 25 мл предварительно
нейтрализованного спирта 96 % и титруют 0,1 М раствором натрия
гидроксида до появления розового окрашивания (индикатор – 0,1 мл
фенолфталеина раствора 1 %).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 30,42 мг
хлорамбуцила C~14~H~19~Cl~2~NO~2~.

[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


