[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===

 

==== ФС.2.1.0559 Рибофлавин (Riboflavinum)


*Взамен ФС 42-2954-93*

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0559_1.png[]
|===

[discrete]
===== Определение

7,8-Диметил-10-[(2__S__,3__S__,4__R__)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]бензо[_g_]птеридин-2,4(3__H__,10__H__)-дион.

Субстанция представляет собой продукт ферментации.

Содержит не менее 97,0 % и не более 103,0 % рибофлавина
C~17~H~20~N~4~O~6~ в пересчёте на сухое вещество.

[discrete]
===== Свойства

*Описание.* Жёлтый или оранжево-жёлтый кристаллический порошок.

+*+ Проявляет полиморфизм. Растворы рибофлавина неустойчивы на свету,
особенно в присутствии щелочей.

*Растворимость.* Очень мало растворим в воде, практически нерастворим в
спирте 96 %.

[discrete]
===== Идентификация

. _Спектрофотометрия_ (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и
видимой областях»).

[none]
* _Испытуемый раствор._ Смешивают равные объёмы испытуемого раствора,
полученного в испытании «Количественное определение», и воды.
* Спектр поглощения испытуемого раствора должен иметь максимумы при
223 нм, 267 нм, 373 нм и 444 нм. Отношение значений оптических
плотностей A~373~/A~267~ должно быть от 0,31 до 0,33. Отношение значений
оптических плотностей A~444~/A~267~ должно быть от 0,36 до 0,39.

[arabic,start=2]
. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

[none]
* _Пластинка._ ТСХ пластинка со слоем силикагеля (2-10 мкм).
* _Подвижная фаза (ПФ)._ Вода.
* _Испытуемый раствор._ К 25 мг субстанции прибавляют 10 мл воды,
встряхивают в течение 5 мин и фильтруют.
* _Раствор стандартного образца рибофлавина._ К 25 мг (точная навеска)
фармакопейного стандартного образца рибофлавина прибавляют 10 мл воды,
встряхивают в течение 5 мин и фильтруют.
* На линию старта пластинки наносят:
** 1 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл испытуемого раствора;
** 2 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл раствора стандартного
образца рибофлавина.

[none]
* После каждого последовательного нанесения в точках 1 и 2 пластинку
подсушивают в токе холодного воздуха, помещают в камеру с ПФ и
хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около
80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат в
потоке холодного воздуха до удаления следов растворителей и
просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
* _Результат_. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого
раствора по положению, величине и цвету флуоресценции должна
соответствовать зоне адсорбции рибофлавина на хроматограмме раствора
стандартного образца рибофлавина.

[arabic,start=3]
. _Качественная реакция._ Растворяют 1 мг субстанции в 100 мл воды. В
проходящем свете раствор должен иметь бледно-зеленовато-жёлтый цвет, в
отражённом свете − интенсивную желтовато-зелёную флуоресценцию, которая
должна исчезать при добавлении минеральных кислот или щелочей.

[discrete]
===== Испытания

*Удельное вращение.* От –115,0 до –135,0 в пересчёте на сухое вещество
(ОФС «Оптическое вращение»).

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг
субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 0,05 М и доводят
объём раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют в
течение 30 мин.

*Родственные примеси.* Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС
«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют сразу после приготовления и защищают от света.

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Фосфорная кислота концентрированная—вода
1:1000.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Ацетонитрил.

_Растворитель._ Натрия ацетата раствор 0,1 М.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,12 г
субстанции, растворяют в 10 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, при
необходимости обрабатывая ультразвуком, и доводят объём раствора
растворителем до метки.

_Раствор сравнения._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл
испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В
мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и
доводят объём раствора растворителем до метки.

_Раствор для проверки разделительной способности хроматографической
системы._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции,
растворяют в 1 мл натрия гидроксида раствора 0,5 М, выдерживают в
дневном свете в течение 1,5 ч, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты
разведённой 30 % и доводят объём раствора водой до метки (содержит
примеси A и B).

_Раствор для идентификации пиков._ Содержимое флакона фармакопейного
стандартного образца рибофлавина для идентификации пиков, содержащего
примеси С и D, растворяют в 1 мл смеси ПФБ—ПФА 1:9, при необходимости
обрабатывая ультразвуком.

*Примечание*

Примесь А: +
7,8,10-триметилбензо[_g_]птеридин-2,4(3__H__,10__H__)-дион
[1088-56-8].

Примесь В: +
7,8-диметилбензо[_g_]птеридин-2,4(1__H__,3__H__)-дион
[1086-80-2].

Примесь С: +
6,7-диметил-8-[(2__S__,3__S__,4__R__)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]птеридин-2,4(3__H__,8__H__)-дион
[5118-16-1].

Примесь D: +
8-(гидроксиметил)-7-метил-10-[(2__S__,3__S__,4__R__)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]бензо[_g_]птеридин-2,4(3__H__,10__H__)-дион
[52134-62-0].

_Хроматографические условия_

[cols=",,^,^",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 2+|250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный
для хроматографии, 5 мкм; |
|Температура колонки |25 °С;  | |

|Скорость потока |1,0 мл/мин; | |

|Детектор |спектрофотометрический, 267 нм; | |

|Объём пробы |10 мкл. | |
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^33%,^33%",options="header",]
|===
|Время, мин |ПФА,% |ПФБ,%
|0–5 |90 |10
|5–20 |90 → 80 |10 → 20
|20–25 |80 |20
|25–35 |80 → 50 |20 → 50
|35–45 |50 |50
|===

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки
разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения
и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений._ Рибофлавин – 1 (около
16 мин); примесь С – около 0,2; примесь D – около 0,5; примесь А – около
1,4; примесь В – около 1,9.

_Идентификация примесей._ Для идентификации пиков примесей С и D
используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму
раствора для идентификации пиков и хроматограмму, прилагаемую к
стандартному образцу рибофлавина для идентификации пиков.

_Пригодность хроматографической системы._ На хроматограмме раствора для
проверки разделительной способности хроматографической системы
_разрешение (R~S~)_ между пиками примеси А и примеси В должно быть не
менее 5.

_Поправочные коэффициенты._ Для расчёта содержания примесей площади
пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные
коэффициенты: примесь А – 0,7; примесь В и D – 1,4, примесь С – 2,3.

_Допустимое содержание примесей_. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси А не должна превышать 0,25 площади основного пика
на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,025 %);

- площадь пика каждой из примесей B, С и D не должна превышать
двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения
(не более 0,2 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь
основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную
площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более
0,5 %).

Не учитывают пики, кроме пика примеси А, площадь которых составляет
менее 0,5-площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения
(менее 0,05 %).

*Потеря в массе при высушивании.* Не более 1,5 % (ОФС «Потеря в массе
при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная
навеска) субстанции.

*Сульфатная зола.* Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

*Тяжёлые металлы.* Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии
с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А или 3Б), в зольном остатке, полученном
в испытании «Сульфатная зола» с использованием эталонного раствора 1.

{asterisk}{asterisk} *Бактериальные эндотоксины.* Не более 7,1 ЕЭ на 1 мг рибофлавина (ОФС
«Бактериальные эндотоксины»).

*Остаточные органические растворители.* В соответствии с ОФС «Остаточные
органические растворители».

*Микробиологическая чистота.* В соответствии с ОФС «Микробиологическая
чистота».

[discrete]
===== Количественное определение

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в
ультрафиолетовой и видимой областях»).

Все растворы защищают от света.

_Раствор натрия ацетата._ В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
1,4 г натрия ацетата тригидрата, растворяют воде и доводят объём
раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу из тёмного стекла вместимостью
500 мл помещают 65 мг (точная навеска) субстанции, суспендируют с 5 мл
воды до полного смачивания, прибавляют 5 мл натрия гидроксида раствора
8,5 %, перемешивают до полного растворения, тотчас прибавляют 100 мл
воды, 2,5 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до
метки. В мерную колбу из тёмного стекла вместимостью 200 мл помещают
20,0 мл полученного раствора, прибавляют 3,5 мл раствора натрия ацетата
и доводят объём раствора водой до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в
максимуме поглощения при длине волны 444 нм в кювете с толщиной слоя
1 см, используя в качестве раствора сравнения воду.

Содержание рибофлавина C~17~H~20~N~4~O~6~ в субстанции в пересчёте на
сухое вещество в процентах (_Х_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image::im_fs_2.1.0559_2.png[]
|===

где	_A_	-	оптическая плотность испытуемого раствора; +
	_328_	-	удельный показатель поглощения рибофлавина, (image:im_fs_2.1.0559_4.png[]); +
	_a_	-	навеска субстанции, г; +
	_W_	-	потеря в массе при высушивании,%.


[discrete]
===== Хранение

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.

+*+ Приводится для информации.

{asterisk}{asterisk} Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства
лекарственных препаратов для парентерального применения.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


