[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|*ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ*
|===



===== ОФС.1.2.2.2.0031 Примеси _N_-нитрозаминов

*Вводится впервые*

 
Методики определения примесей _N_-нитрозаминов в фармацевтических
субстанциях синтетического происхождения группы сартана основаны на
использовании масс-спектрометрии.

_N_-нитрозамины – это класс органических веществ, молекулы которых
содержат алкилнитрозаминогруппу:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_ofs_1.2.2.2.0031_1.png[]
|===

Соединения _N_-нитрозаминов классифицируются как вероятные канцерогены
для человека. В силу потенциальной токсичности этих примесей
рекомендуется применять меры по контролю и ограничению их присутствия в
фармацевтических субстанциях.

Целесообразность определения примесей _N_-нитрозаминов в лекарственных
препаратах устанавливается на этапе фармацевтической разработки.

Особое значение имеют соединения, приведенные в <<tab_ofs_1.2.2.2.0031_1,таблице 1.>>

[[tab_ofs_1.2.2.2.0031_1]]
[caption="Таблица 1. "]
[cols="37%,^27%,^15%,^21%",options="header",]
|===
^|*Химическое название* |*Структурная формула* |*Брутто-формула*
|*Молекулярная масса*
|_N_-нитрозо-диметиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_2.png[] |C~2~H~6~N~2~O
|74,082

|_N_-нитрозо-диэтиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_3.png[] |C~4~H~10~N~2~O
|102,135

|N-нитрозо-дибутиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_4.png[] |C~8~H~18~N~2~O
|158,241

|_N_-нитрозо-_N_-метил-4-аминобутановая кислота
|image:im_ofs_1.2.2.2.0031_5.png[] |C~5~H~10~N~2~O~3~ |143,145

|_N_-нитрозо-диизопропиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_6.png[]
|C~6~H~14~N~2~O |130,188

|_N_-нитрозо-этил-изопропиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_7.png[]
|C~5~H~12~N~2~O |116,162

|_N_-нитрозо-дипропиламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_8.png[] |C~6~H~14~N~2~O
|130,188

|_N_-нитрозо-метил-фениламин |image:im_ofs_1.2.2.2.0031_9.png[]
|C~7~H~8~N~2~O |136,151
|===

Нормы содержания примесей _N_-нитрозаминов должны быть приведены в
фармакопейной статье. В случае их отсутствия нормы содержания должны
быть рассчитаны с использованием значений максимально допустимой
суточной дозы примесей указанных веществ (<<tab_ofs_1.2.2.2.0031_2,табл. 2>>).

[[tab_ofs_1.2.2.2.0031_2]]
[caption="Таблица 2. "]
.Максимально допустимая суточная доза примесей _N_-нитрозаминов

[cols="50%,^50%",options="header",]
|===
^|*Наименование примеси* |*Допустимая суточная доза, нг/сут*
|_N_-нитрозо-диметиламин (НДМА) |не более 96,0
|_N_-нитрозо-диэтиламин (НДЭА) |не более 26,5
|_N_-нитрозо-_N_-метил-4-аминобутановая кислота (НМАК) |не более 96,0
|_N_-нитрозо-диизопропиламин (НДИПА) |не более 26,5
|_N_-нитрозо-этил-изопропиламин (НЭИПА) |не более 26,5
|===

К наиболее вероятным причинам образования примесей _N_-нитрозаминов в лекарственных средствах относятся:

* использование натрия нитрита или других нитрозирующих соединений в
синтезе фармацевтической субстанции.

[none]
* Например:


[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_ofs_1.2.2.2.0031_10.png[]
|===

* использование загрязнённых сырьевых материалов (растворителей,
реагентов и катализаторов) в синтезе фармацевтической субстанции;

* регенерация растворителей, реагентов и катализаторов в процессе
синтеза;

* использование контаминированных исходных материалов;

* контаминация от перекрёстно протекающих процессов синтеза;

* деградация исходных материалов, промежуточных продуктов или
лекарственных веществ, в том числе при хранении;

* использование определенных видов упаковки (например, возможна
контаминация лекарственного препарата в его первичной упаковке; в
контурной ячейковой упаковке (блистере), так как покрывающая фольга,
содержащая нитроцеллюлозный праймер, способна реагировать с аминами в
чернилах с образованием нитрозаминов, которые могут быть перенесены в
препарат при определенных условиях упаковки).

Определение _N_-нитрозаминов проводят приведёнными ниже методиками или
иными методиками, указанными в фармакопейной статье.

====== Методика 1

Методика распространяется на определение семи примесей _N_-нитрозаминов в валсартане, ирбесартане и лозартане калия:
_N_-нитрозо-диметиламина (НДМА), _N_-нитрозо-диэтиламина (НДЭА),
_N_-нитрозо-этил-изопропиламина (НЭИПА), _N_-нитрозо-диизопропиламина
(НДИПА), _N_-нитрозо-дибутиламина (НДБА), N-нитрозо-метил-фениламина (НМФА) и
_N_-нитрозо-_N_-метил-4-аминобутановой кислоты (НМАК).

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография») с использованием масс-спектрометрии (ОФС
«Масс-спектрометрия»).

_Подвижная фаза А (ПФА)_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
10 мл муравьиной кислоты безводной, прибавляют 500 мл воды и доводят
объём раствора водой до метки.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)_. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
10 мл муравьиной кислоты безводной, прибавляют 500 мл метанола и доводят
объём раствора метанолом до метки.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 0,1 г
(точная навеска) субстанции, прибавляют 4 мл метанола, интенсивно
перемешивают до растворения, доводят объём раствора метанолом до метки и
фильтруют через шприцевой мембранный фильтр из поливинилиденфторида с
размером пор 0,22 мкм, отбрасывая первый 1 мл фильтрата.

_Стандартный раствор примесей N-нитрозамина._ Готовят раствор
фармакопейных стандартных образцов НДМА, НДЭА, НДБА, НМАК, НДИПА, НЭИПА
и НМФА в метаноле с концентрацией по 6 нг/мл.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы._
Готовят раствор фармакопейных стандартных образцов НДМА, НДЭА, НДБА,
НМАК, НДИПА, НЭИПА, НМФА в метаноле с концентрацией по 1 нг/мл.

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка |100 × 4,6 мм, силикагель пентафторфенилпропильный,
эндкепированный, для хроматографии, 2,6 мкм; | | 
|Температура колонки |40 °С; | | 

|Температура образца |4 °С; | | 

|Скорость потока |0,6 мл/мин; | | 

|Объём пробы |3 мкл. | | 
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^34%,^32%",options="header"] 
|===
|Время, мин |ПФА, % |ПФБ, %
|0–1,5 |90 |10
|1,5–7,0 |90 → 45 |10 → 55
|7,0–17,0 |45 |55
|17,0–17,1 |45 → 10 |55 → 90
|17,1–21,0 |10 |90
|21,0–21,1 |10 → 90 |90 → 10
|21,1–25,0 |90 |10
|===

_Условия детектирования_

[width="99%",cols="30%,^10%,^10%,^10%,^10%,^10%,^10%,^10%"]
|===

4+^h|Источник ионизации 4+^h|электронная ионизация
^h|*Примесь* ^h|*НДМА* ^h|*НМАК* ^h|*НДЭА* ^h|*НЭИПА* ^h|*НДИПА* ^h|*НМФА* ^h|*НДБА*

|Режим сканирования |SIM |SIM |PRM  |SIM |SIM |SIM |PRM

|Полярность |{plus} |– |{plus} |{plus} |{plus} |{plus} |{plus}

|Начало-окончание сканирования, мин |1,0–3,5 |3,5–5,5 |5,5–7,0 
|7,0–8,5 |8,5–10 |8,5–10 |13,0–15,5

|Величина m/z (PRM) |– |– |103,0866  |– |– |– |159,1492

|Нормализованная энергия столкновения |– |– |25  |– |– |– |20

|Диапазон сканирования |
m/z +
74,3–75,8
|m/z +
144,3–145,8 
|m/z +
50,0–114,0
|m/z +
116,4–117,9
|m/z +
130,4–131,9 
|m/z +
136,3–137,8
|m/z +
50,0–170,0

|Микросканирования |3 |3 |3  |3 |3 |3 |3

|Разрешение |30000 |60000 |30000  |60000 |60000 |60000 |60000

|Автоматический контроль усиления (%) |250 |250 |250  |250 |250 |250
|250
|===

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности
хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

_Относительное время удерживания соединений:_ НДБА – 1,0 (около,
14,2 мин); НДМА – около 0,20; НМАК – около 0,31, НДЭА – около 0,46;
НЭИПА – около 0,57; НДИПА – около 0,66; НМФА – около 0,67.

_Пригодность ВЭЖХ-МС системы_

На хроматограмме стандартного раствора _относительное стандартное
отклонение_ площади каждого из пиков примесей +
_N_-нитрозаминов должно быть не более 20,0 % (6 введений).

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей _N_-нитрозаминов должно
быть не менее 10.

_Обработка результатов_

Для количественного определения используются площади пиков целевых ионов
с допуском m/z 15 ppm. Ниже перечислены целевые значения _m/z_:

[cols="^16%,^12%,^12%,^12%,^12%,^12%,^12%,^12%",options="header",]
|===
|*Примесь* |*НДМА* |*НМАК* |*НДЭА* |*НЭИПА* |*НДИПА* |*НМФА* |*НДБА*
|Целевое значение _m/z_ |75,0553 |145,0619 |75,0553, +
103,0866

|117,1022 |131,1179 |137,0709 |57,0704, +
103,0872, +
159,1492

|===

Примечание – Примеси НМАК и НЭИПА существуют как синконформационный и
антиконформационный изомеры из-за ограниченного вращения связи N–N. Эти
изомеры в условиях метода разделяются частично. Пик НМАК наблюдается как
дублет, для расчёта концентрации НМАК интегрируют оба пика и используют
суммарную площадь. Пик НЭИПА может быть как дублетом, так и одиночным
пиком с хвостовым плечом. Если конформеры разделяются, для расчёта
концентрации НЭИПА интегрируют оба пика и суммируют их площади, если же
конформеры разделены не полностью (наблюдается полупик), для расчёта
концентрации НЭИПА интегрируют основной пик и полупик как единый.

Содержание каждой из примесей _N_-нитрозаминов в субстанции в процентах
(_Х_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_ofs_1.2.2.2.0031_11.png[]
|===

где	_S~1~_	–	площадь пика каждой из примесей N-нитрозаминов на хроматограмме испытуемого раствора;
_S~0~_	–	площадь пика соответствующей примеси N-нитрозаминов на хроматограмме стандартного раствора;
_С~1~_	–	концентрация субстанции в испытуемом рвстворе, нг/мл;
_С~0~_	–	концентрация каждой из примеси НДМА, НДЭА, НДБА, НМАК, НДИПА, НЭИПА и НМФА в стандартном растворе, нг/мл;
_P_	–	содержание основного вещества в стандартном образце соответствующей примеси, %.


====== Методика 2

Методика распространяется на определение четырёх примесей +
_N_-нитрозаминов в валсартане, ирбесартане, лозартане калия, олмесартане
медоксомиле, кандесартане цилексетиле и телмисартане: +
_N_-нитрозодиметиламина (НДМА), _N_-нитрозодиэтиламина (НДЭА),
нитрозоэтилизопропиламина (НЭИПА) и _N_-нитрозодиизопропиламина (НДИПА).

Определение проводят методом ГХ (парофазный анализ, ОФС «Газовая
хроматография») с использованием масс-спектрометрии (ОФС
«Масс-спектрометрия»).

_Раствор внутреннего стандарта А._ Готовят раствор
_N_-нитрозо-диметиламина-d~6~ в метаноле с концентрацией 0,4 мкг/мл.

_Раствор внутреннего стандарта Б._ В мерную колбу вместимостью 50 мл
помещают 2,0 мл раствора внутреннего стандарта А и доводят объём
раствора метанолом до метки.

_Испытуемый раствор._ В хроматографический флакон для парофазного
анализа помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, 0,1 г имидазола,
1,0 мл раствора внутреннего стандарта Б и 1,0 мл ацетонитрила.
Укупоривают пробкой, закрывают крышкой и плотно прижимают их обкаткой.

_Стандартный раствор А._ Готовят раствор фармакопейных стандартных
образцов НДМА, НДЭА, НДИПА и НЭИП в метаноле с концентрацией по
0,4 мкг/мл.

_Стандартный раствор Б._ В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают
2,0 мл стандартного раствора А и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта А
и доводят объём раствора метанолом до метки.

_Стандартный раствор В._ Помещают 1,0 мл стандартного раствора Б во
флакон для парофазного анализа, содержащий 0,1 г имидазола и 1,0 мл
ацетонитрила. Укупоривают пробкой, закрывают крышкой и плотно прижимают
их обкаткой.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы А._ В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 мл стандартного раствора А
и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта А и доводят объём раствора
метанолом до метки.

_Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы Б._ Во
флакон для парофазного анализа, содержащий 0,1 г имидазола и 1,0 мл
ацетонитрила, помещают 1,0 мл раствора для проверки чувствительности
хроматографической системы А. Укупоривают пробкой, закрывают крышкой и
плотно прижимают их обкаткой.

_Контрольный раствор_. В хроматографический флакон помещают около 0,1 г
(точная навеска) имидазола, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего
стандарта Б и 1,0 мл ацетонитрила. Укупоривают пробкой, закрывают
крышкой и плотно прижимают их обкаткой.

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 3+|кварцевая капиллярная 30 м × 0,32 мм, покрытая слоем макрогола
20 000, 1,0 мкм; 

|Детектор 3+|масс-спектрометрический; 

|Газ-носитель 3+|гелий для хроматографии; 

|Деление потока 3+|1:1 или 1:3; 

|Скорость потока 3+|1,8 мл/мин; 

|Температура |колонка |0–3 мин |45 °С

| | |3–10 мин |45 → 130 °С

| | |10 мин |190 → 240 °С
|===

_Условия парофазного анализа_

[cols="71%,^29%",]
|===

|Температура уравновешивания |95–110  °С;
|Время уравновешивания |10 мин;
|Температура петли |150 °С;
|Температура линии переноса |160 °С.
|===

_Условия детектирования_

[cols="50%,50%",]
|===

|Источник ионизации |электронная ионизация (EI);
|Режим детектирования |мониторинг реакций заданных ионов (MRM).
|===

_Переходы сканирования масс и энергии столкновений_

[cols="^25%,^29%,^26%,^20%",]
|===
|*Наименование примеси* |*Относительное время удерживания* |*Переходы
сканирования масс* |*Энергия столкновений, эВ* |НДМА |около 0,8 

|74 → 44 +
74 → 42
|4 +
15
|НДМА-d~6~ |около 0,8 |80 → 50 |5

|НДЭА |около 0,9 |102 → 85,1 +
102 → 56,1

|6 +
15

|НЭИПА |около 0,96 |116 → 99,1 +
99 → 44,1
|6 +
9

|НДИПА |1 (около 14 мин) |130 → 42 +
130 → 43,1
|10 +
18

|===

Хроматографируют контрольный раствор, стандартный раствор В, раствор для
проверки чувствительности хроматографической системы Б и испытуемый
раствор.

Пригодность ГХ-МС системы

На хроматограмме стандартного раствора В _относительное стандартное
отклонение_ отношения площади каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА НЭИПА
и НДИПА к площади пика НДМА-d~6~ должно быть не более 20 % (6 введений).

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности _отношение
сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА НЭИПА и НДИПА
должно быть не менее 10.

Содержание каждой из примесей _N_-нитрозаминов в субстанции в процентах
(_Х_) вычисляют по формуле:

[cols="^a",grid=none,frame=none]
|===

|image:im_ofs_1.2.2.2.0031_12.png[]
|===

====== Методика 3

Методика распространяется на определение пяти примесей +
_N_-нитрозаминов в валсартане, ирбесартане и лозартане калия,
кандесартане цилексетиле и олмесартане медоксомиле:
_N_-нитрозо-диметиламина (НДМА), _N_-нитрозо-диэтиламина (НДЭА),
_N_-нитрозо-этил-изопропиламина (НЭИПА), _N_-нитрозо-диизопропиламина
(НДИПА) и _N_-нитро-_N_-метил-4-аминобутановой кислоты (НМАК).

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная
хроматография») с использованием масс-спектрометрии (ОФС
«Масс-спектрометрия»)

_Подвижная фаза А (ПФА)._ Муравьиной кислоты раствор 0,1 %.

_Подвижная фаза Б (ПФБ)._ Метанол.

_Раствор внутреннего стандарта._ Готовят раствор НДЭА-d~10~ в метаноле с
концентрацией 9,0 нг/мл.

_Испытуемый раствор._ Суспендируют 0,150 г (точная навеска) субстанции в
0,5 мл метанола, прибавляют 0,5 мл раствора внутреннего стандарта,
тщательно перемешивают, выдерживают на ультразвуковой бане в течение
15 мин, охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 4,0 мл воды,
тщательно перемешивают, выдерживают на ультразвуковой бане в течение
15 мин, центрифугируют в течение 5 мин при 3000 g и фильтруют через
мембранный фильтр с размером пор 0,2 мкм.

_Стандартный раствор примесей N-нитрозаминов._ Готовят раствор
фармакопейных стандартных образцов НДМА, НДЭА, НМАК, НДИПА и НЭИПА в
метаноле с концентрацией по 500 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью
50 мл помещают 0,3 мл полученного раствора и доводят объём раствора
метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,3 мл
полученного раствора и доводят объём раствора метанолом до метки.

_Стандартный раствор А._ Суспендируют около 0,15 г (точная навеска)
субстанции в 0,5 мл стандартного раствора примесей _N_-нитрозаминов,
прибавляют 0,5 мл раствора внутреннего стандарта и тщательно
перемешивают в течение 5 мин, выдерживают на ультразвуковой бане в
течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 4,0 мл
воды, тщательно перемешивают в течение 5 мин, выдерживают на
ультразвуковой бане в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры
и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 g и фильтруют через мембранный
фильтр с размером пор 0,2 мкм.

_Стандартный раствор Б._ Смешивают 0,5 мл стандартного раствора примесей
_N_-нитрозаминов и 0,5 мл раствора внутреннего стандарта, тщательно
перемешивают в течение 5 мин, выдерживают на ультразвуковой бане в
течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры прибавляют 4,0 мл
воды, тщательно перемешивают в течение 5 мин, выдерживают на
ультразвуковой бане в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры
и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 g, фильтруют через мембранный
фильтр с размером пор 0,2 мкм.

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка  |150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный
для хроматографии, 3,0 мкм; | | 
|Температура колонки  |40 °С; | | 

|Температура образца  |5 °С; | | 

|Скорость потока  |0,5 мл/мин; | | 

|Объём пробы  |20 мкл. | | 
|===

_Режим хроматографирования_

[cols="^34%,^34%,^32%",options="header"]
|===
|*Время, мин* |*ПФА, %* |*ПФБ, %*
|0–1,0 |80 |20
|1,0–6,0 |80 → 55 |20 → 45
|6,0–14,0 |55 |45
|14,0–16,0 |55 → 5 |45 → 95
|16,0–35,0 |5 |95
|===

Детектирование: трёхквадрупольный масс-спектрометр в режиме мониторинга
множественных реакций (MRM). Следующие настройки были признаны
подходящими и приведены в качестве примера; настройки могут быть
скорректированы таким образом, чтобы выполнялись требования пригодности
системы.

_Условия МС/МС_

[cols="80%,^20%",options="header",] 
|===
^|Режим ионизации  |APCI-положительный;
|Температура нагревателя  |350 °C;
|Давление в распылителе  |310 кПа;
|Температура газа:  |300 °C;
|Расход осушающего газа  |5 л/мин;
|Ток в короне  |6 мкА;
|Время выдержки  |200 мс;
|Напряжение в капилляре (V~кап~):  |1,5 кВ;
|Напряжение ускорения ячейки:  |3 В.
|===

_Параметры режима MRM_

[cols="^22%,^23%,^16%,^20%,^19%",options="header",]
|===
|*Наименование примеси* |*Относительное время удерживания* |*Переходы
MRM (m/z)* |*Энергия столкновений, В* |*Напряжение фрагментора, В*

|НДМА |около 0,6 |74 → 58 +
(75 → 43)

|11 +
15

|20 +
15

|НМАК |около 0,7 |147 → 117 +
(147 → 87)
|2 +
6
|41 +
46

|НДЭА |около 1 |103 → 75 +
(103 → 47)
|9 +
17
|25 +
20

|НЭИПА |около 1,3 |117 → 75 +
(117 → 47)
|7 +
15
|54 +
59

|НДИПА |около 1,6 |131 → 89 +
(131 → 47)
|2 +
10
|20 +
25

|НДЭА-d~10~ |1 +
(около 8,6 мин)
|113 → 81 +
(117 → 75)
|6 +
14
|76 +
81

|===

Хроматографируют стандартный раствор Б, стандартный раствор А,
испытуемый раствор.

_Пригодность хроматографический системы_

На хроматограмме стандартного раствора Б _относительное стандартное
отклонение_ отношения площади каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА,
НМАК, НДИПА и НЭИПА к площади пика НДЭА-d~10~ должно быть не более 20 %
(6 введений).

На хроматограмме стандартного раствора А:

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика НДМА, соответствующего основному
переходу, должно быть не менее 5;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей НДЭА, НМАК,
НДИПА, НЭИПА, соответствующего основному переходу, должно быть не менее
10;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА,
НМАК, НДИПА, НЭИПА, соответствующего переходу классификатора, должно
быть не менее 3.

Рассчитывают отношения площади пика каждой примеси +
_N_-нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме
испытуемого раствора (B~1~).

Рассчитывают отношения площади пика каждой примеси +
_N_-нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме
стандартного раствора А (B~0~).

Для каждой обнаруженной примеси _N_-нитрозамина отношение В~1~/В~0~
должно быть менее 0,50.

Испытание действительно, если соотношение между площадью пика,
соответствующего основному переходу, и площадью пика, соответствующего
переходу квалификатора, для испытуемого раствора отличается не более чем
на 20 % от того же соотношения, рассчитанного для стандартного раствора
А.

====== Методика 4

Методика распространяется на определение шести примесей +
_N_-нитрозаминов: _N_-нитрозодиметиламина (НДМА), _N_-нитрозодиэтиламина
(НДЭА), _N_-нитрозо-этил-изопропиламина (НЭИПА),
_N_-нитрозо-диизопропиламина (НДИПА), _N_-нитрозо-дибутиламина (НДБА) и
_N_-нитрозо-дипропиламина (НДПА).

Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»). С
использование масс-спектрометрии (ОФС «Масс-спектрометрия»)

_Раствор внутреннего стандарта._ В мерную колбу вместимостью 10 мл
помещают 5 мг (точная навеска) НЭМА (_N_-нитрозо-этилметиламина,
10595-95-6), растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же
растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают
0,5 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

_Раствор для экстракции._ В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают
40,0 мг натрия гидроксида, растворяют в 500 мл воды, прибавляют 100 мкл
раствора внутреннего стандарта и 50 мл ацетонитрила и доводят объём
раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор._ В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,25 г
(точная навеска) субстанции, суспендируют в растворе для экстракции и
доводят объём раствора тем же растворителем до метки, встряхивают в
течение 5 мин, экстрагируют 2 мл метиленхлорида, встряхивая в течение
5 мин и центрифугируя в течение 5 мин при10 000 g. Для анализа
используют нижний слой (органический).

_Стандартный раствор примесей N-нитрозаминов._ Готовят раствор
фармакопейных стандартных образцов НДМА, НДЭА, НДБА, НДПА, НДИПА и НЭИПА
в метаноле с концентрацией по 500 мкг/мл. В мерную колбу 10 мл помещают
100 мкл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки. В
мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,3 мл полученного раствора и
доводят объём раствора водой до метки.

_Испытуемый раствор с добавками._ Суспендируют 0,25 г субстанции в 10 мл
раствора для экстракции, прибавляют 0,1 мл стандартного раствора
примесей _N_-нитрозаминов, интенсивно перемешивают в течение 5 мин,
экстрагируют с помощью 2 мл метиленхлорида и встряхивают в течение
5 мин, центрифугируют в течение 5 мин при 10 000 g. Для анализа
используют нижний слой (органический).

_Стандартный раствор А._ К 10 мл раствора для экстракции прибавляют
50 мкл стандартного раствора примесей _N_-нитрозаминов, интенсивно
перемешивают в течение 5 мин, экстрагируют 2,0 мл метиленхлорида и
встряхивают в течение 5 мин, центрифугируют в течение 5 мин при
10 000 g. Для анализа используют нижний слой (органический).

_Стандартный раствор Б._ К 10 мл раствора для экстракции прибавляют
100 мкл стандартный раствор примесей _N_-нитрозаминов, интенсивно
перемешивают в течение 5 мин, экстрагируют 2,0 мл метиленхлорида и
встряхивают в течение 5 мин, центрифугируют в течение 5 мин при
10 000 g. Для анализа используют нижний слой (органический).

_Стандартный раствор В._ К 10 мл раствора для экстракции прибавляют
200 мкл стандартного раствора примесей _N_-нитрозаминов, интенсивно
перемешивают в течение 5 мин, экстрагируют 2,0 мл метиленхлорида и
встряхивают в течение 5 мин, центрифугируют в течение 5 мин при
10 000 g. Для анализа используют нижний слой (органический).

_Хроматографические условия_

[cols=",,,",grid=none,frame=none]
|===

|Колонка 3+|кварцевая капиллярная 30 м × 0,25 мм, покрытая слоем
поли(цианопропилфенил)(6)(метил)(94)силоксана, 1,4 мкм; 

|Детектор 3+|масс-спектрометрический; 

|Газ-носитель 3+|гелий для хроматографии; 

|Скорость потока 3+|1,3 мл/мин; 

|Объём пробы 3+|3 мкл;  

|Температура |колонка |0–0,5 мин |40 °С

| | |0,5–2,2 мин |40 → 140 °С

| | |2,2–4,2 мин |140 °С

| | |4,2–6,2 мин |140 → 180 °С

| | |6,2–6,7 мин |180 °С

| | |6,7–8,7 мин |180 → 240 °С

| | |8,7–10,5 |240 °С

| | |10,5–11,5 |240 → 280 °С

| | |11,5–14,0 |280 °С

| |Инжектор | |250 °С

| |Линия переноса | |240
|===

_Условия детектирования_

[cols="70%,^30%",options="header"]
|===
^|Источник ионизации  |электронная ионизация;
|Режим детектирования  |мониторинг реакций заданных ионов (MRM);
|Температура источников ионов  |230 °С;
|Температура квадруполя  |150 °С;
|Энергия электронов  |40 эВ;
|Задержка растворителя  |4,5 мин;
|Коэффициент усиления  |15
|Газ для соударений  |азот;
|Скорость потока газа для соударений  |1,5 мл/мин;
|Газ для охлаждения  |гелий.
|===

_Переходы сканирования масс и энергии столкновений_

[width="100%",cols="^19%,^31%,^28%,^22%",options="header"]
|===
|*Компонент* |*Относительное время удерживания* |*Переходы сканирования
масс* |*Энергия столкновений, эВ*

|НДМА |около 0,9 |74 → 44 +
(74 → 42)
|5 +
22
|НЭМА |1 +
(около 5,50 мин)

|88 → 71 |5

|НДЭА |около 1,1 |102 → 85 +
(102 → 56)
|3 +
19

|НЭИПА |около 1,3 |116 → 99 +
(116 → 44)
|5 +
14

|НДИПА |около 1,4 |130 → 88 +
(130 → 71)
|5 +
14

|НДПА |около 1,5 |130 → 113 +
130 → 88
|1 +
1

|НДБА |около 1,8 |158 → 141 +
158 → 99
|1 +
7

|===


Хроматографируют стандартный раствор А, стандартный раствор Б,
стандартный раствор В и испытуемый раствор.

Пригодность ГХ-МС системы


_Пригодность хроматографический системы_

На хроматограмме стандартного раствора Б _относительное стандартное
отклонение_ отношения площади каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА,
НДБА, НДПА, НДИПА и НЭИПА к площади пика внутреннего стандарта должно
быть не более 20 % (6 введений).

На хроматограмме испытуемого раствора с добавками:

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА,
НДБА, НДПА, НДИПА и НЭИПА, соответствующего основному переходу, должно
быть не менее 10;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для каждого из пиков примесей НДМА, НДЭА,
НДБА, НДПА, НДИПА и НЭИПА, соответствующего переходу квалификатора,
должно быть не менее 3.

Для расчёта содержания используют основные MRM-переходы.

Рассчитывают отношения площади пика каждой примеси +
_N_-нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме
испытуемого раствора (B~1~).

Рассчитывают отношения площади пика каждой примеси +
_N_-нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта на
хроматограммеиспытуемого раствора с добавками (B~0~).

Для каждой обнаруженной примеси _N_-нитрозамина отношение В~1~/В~0~
должно быть менее 0,50.

Испытание действительно, если соотношение между площадью пика,
соответствующего основному переходу, и площадью пика, соответствующего
квалификационному переходу, для испытуемого раствора отличается не более
чем на 20 % от того же соотношения, рассчитанного для раствора с
добавками.

Для расчёта содержания используют основные MRM-переходы.

_Количественное определение примесей_

Хроматографируют по 3 мкл раствора с добавками, испытуемого раствора и
стандартных растворов А, Б и В.

_Пригодность хроматографической системы_

Для каждого _N_-нитрозамина:

- _относительное стандартное отклонение_ отношения площади пика каждого
нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме
стандартного раствора Б не должно превышать 20 % +
(6 введений);

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика, соответствующего основному
переходу, должно быть не менее 10;

- _отношение сигнал/шум (S/N)_ для пика, соответствующего переходу
квалификатора, должно быть не менее 3.

Расчёт: используют основные MRM-переходы.

Строят калибровочную кривую зависимости отношения площади пика каждого
_N_-нитрозамина к площади пика внутреннего стандарта в зависимости от
концентрации _N_-нитрозамина на хроматограммах стандартных растворов А,
Б и В. По полученной калибровочной кривой определяют концентрацию
_N_-нитрозамина в испытуемом растворе.

_Пригодность системы:_

- отношение площади пика, соответствующего основному переходу, к площади
пика, соответствующего переходу квалификатора, для испытуемого раствора
не должно отличаться от того же отношения для раствора с добавками более
чем на 20 %;

- рассчитанное извлечение для всех растворов с добавками должно
составлять от 70 до 130 %.


[cols="^",grid=none,frame=none]
|===

|+________________________________________________________________________________________________________________+
|===


