image1

КЛИНИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований

Клинические рекомендации проведения клинических лабораторных исследований Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований. Москва 2014 г.

Тип клинических рекомендаций:

Правила проведения клинических лабораторных исследований

Москва, 2014

Разработчики:

В.В. Меньшиков1, Р.С. Козлов2, М.С. Поляк3, В.С. Михайлова1, Л.О. Иноземцева6, Б.Ф. Шуляк7, О.У. Стецюк2, О.И. Кречикова2, А.П. Шепелин5, С.М. Суханова4.

1 ГБОУ ВПО «Первый московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова» Минздрава Российской Федерации

2 НИИ антимикробной химиотерапии ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» Минздрава Российской Федерации

3 НИЦ фармакотерапии, Санкт-Петербург

4 ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава Российской Федерации;

5 ФБУН Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора Оболенск

6 ЗАО «Даниес»

7 ООО ГЕМ, Москва

Ключевые слова: стандартизация, стандартизированная технология, внутрилабораторный контроль качества, питательные среды, клиническая бактериология.

Настоящая стандартизированная технология устанавливает единые требования к выполнению внутрилабораторного контроля качества наиболее распространенных питательных сред с целью определения их пригодности для проведения бактериологических исследований в клинико-диагностических лабораториях (КДЛ), выполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений.

Одобрены на V научно-практической междисциплинарной конференции "Актуальные вопросы диагностики и лечения заболеваний микробной этиологии" в г. Железноводске 5-6 декабря 2013 года.

Утверждены Профильной комиссией Минздрава России по клинической лабораторной диагностике 25 декабря 2013 года. Представлены от Ассоциации специалистов и организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины».

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Введение

Питательные и транспортные среды являются важнейшим элементом медицинского микробиологического исследования. Они разнообразны по целевому назначению и компонентному составу. Их используют для транспортировки, выделения, культивирования, идентификации и дифференциации микроорганизмов. Микробиологические среды отвечают своему назначению только в случаях соответствия их стандартам качества.

Питательные среды производят специализированные отечественные и зарубежные предприятия. На рынок они поставляются в сухом виде или в форме готовых питательных сред, разлитых во флаконы, пробирки, чашки Петри.

Промышленное производство питательных сред осуществляется в соответствии с нормативно-правовыми актами, регулирующими производство, контроль качества, порядок государственной регистрации и лицензирования производства, а также порядок сертификации готовых питательных сред и их компонентов [1,2,6]. Медицинские учреждения должны использовать в работе для целей лабораторной диагностики питательные среды, имеющие сертификат и регистрационное удостоверение [8]. Однако это не исключает необходимость проведения в определённых случаях (см. ниже) внутрилабораторного контроля качества питательных сред.

В клинико-диагностических лабораториях (КДЛ), выполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений часть питательных сред может быть приготовлена непосредственно из коммерческих ингредиентов, качество которых зависит от качества основных компонентов, правильности состава, соблюдения технологии приготовления, условий упаковки и хранения [9]. Существуют определённые сложности обеспечения стандартизации приготовления питательных сред в лабораториях, которые могут влиять на воспроизводимость результатов микробиологических исследований. Такие среды требуют проведения внутрилабораторного контроля с целью оценки их соответствия требуемому качеству. Настоящая стандартизированная технология устанавливает единые условия выполнения соответствующих анализов.

1.2. Цель выполнения технологии

Стандартизированную технологию «Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для бактериологических исследований» выполняют для установления соответствия используемых в лабораториях питательных сред стандартам качества и определения их пригодности для проведения бактериологических исследований. Стандартизированная технология состоит из отдельных оперативных процедур, включающих приготовление контрольных штаммов микроорганизмов, методику контроля качества и анализа качества питательных сред, позволяющих сделать заключение о пригодности испытуемых сред для проведения бактериологических исследований.

1.3. Область применения

Настоящая технология распространяется на клинико-диагностические лаборатории (КДЛ), выполняющие бактериологические исследования, и на бактериологические лаборатории медицинских учреждений, выполняющие микробиологические исследования с использованием готовых (коммерческих) питательных сред, и лаборатории, использующие питательные среды собственного приготовления путём регидратации коммерческих стандартизованных основ с добавлением отдельных компонентов.

1.4. Показания для применения стандартизированной технологии

Внутрилабораторному контролю качества подлежат:

  • питательные среды, приготовленные в лаборатории путём регидратации и стерилизации стандартизированных основ с добавлением одного или нескольких комплексных стандартизованных компонентов или отдельных реагентов (крови, ростовых, селективных добавок и других составляющих);

  • среды, сконструированные в лаборатории из многочисленных ингредиентов (например: дифференциально-диагностические среды для выявления специфических ферментов или других признаков – например, токсигенности коринебактерий);

  • питательные среды, имеющие особое значение для микробиологической диагностики, внутренний контроль качества которых регламентирован соответствующими нормативными документами (например, для выделения и идентификации Corynebacterium diphtheriae, Neisseria meningitidis, Vibrio cholerae);

  • питательные среды для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам подлежат внутреннему контролю качества (вместе с дисками с антибиотиками) в соответствии с действующими нормативными документами по данному виду исследований [7];

  • сертифицированные питательные среды, в процессе применения которых отмечаются отклонения от заявленных свойств (недостаточный или атипичный рост микроорганизмов, изменение их свойств или другие особенности; отсутствие подавления роста сопутствующей микрофлоры и т.п.)

Внутрилабораторный контроль качества не проводится для:

  • питательных сред, условия транспортировки и состояние упаковки которых дают основание предположить возможность ухудшения их качества; изменение физико-химических показателей при визуальном осмотре – комкование, увлажнение, изменение цвета и проч. (такие среды законодательно подлежат рекламации по соответствующему регламенту без дополнительных испытаний);

  • новых серий коммерческих питательных сред, поступивших в лабораторию, если в процессе их применения не возникает сомнений в их качестве. В противном случае возможно проведение проверки по упрощённой схеме (например, проверка типичности морфологических признаков).

Примечание:

  • Для готовых питательных сред, требующих только регидратации и стерилизации, или сред, готовых к употреблению, а также питательных, селективных добавок или отдельных ингредиентов при отсутствии особых обстоятельств контроль качества ограничивается проверкой наличия сертификата качества, соответствия упаковки, а также внешних физико-химических признаков, заявленным в сертификате [8].

2. ТРЕБОВАНИЯ К ОБЕСПЕЧЕНИЮ ВЫПОЛНЕНИЯ ТЕХНОЛОГИИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу

Компетентность персонала, участвующего в выполнении технологии, должна соответствовать требованиям к образованию, знаниям, и умениям специалистов согласно ГОСТ Р ИСО 15189 [3]. В выполнении данной технологии принимают участие:

  • врач-бактериолог;

  • биолог (специальность по бактериологии);

  • специалист со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер – лаборант, лаборант)

2.2. Требования к образованию специалистов:

Знания и умения специалистов должны соответствовать образовательным стандартам.

Врач клинической лабораторной диагностики или биолог должен иметь диплом о высшем профессиональном образовании, диплом о последипломном образовании по специальности «бактериология», сертификат специалиста только для врача бактериолога. Врач обязан в установленном порядке повышать квалификацию в форме циклов тематического усовершенствования и сертификационных курсов.

Специалисты со средним образованием должны иметь соответствующую квалификацию по диплому, сертификат специалиста, а также проходить в установленном порядке повышение квалификации.

2.3. Требования к обеспечению безопасности труда медицинского персонала

Требования по безопасности труда при выполнении технологии соответствуют общим правилам безопасности при работе в клинико-диагностической лаборатории согласно ГОСТ Р 52905 – 2007. В лаборатории должны соблюдаться правила биологической безопасности, правила сбора и удаления отходов, правила работы с электроприборами и реактивами, пожарной безопасности.[4]

2.4. Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии

Материальные ресурсы, необходимые для выполнения внутрилабораторного контроля качества питательных сред, определяются номенклатурой исследований, включенных в лицензию на медицинскую деятельность (Приложение 1).

3. Технологический поток внутрилабораторного контроля качества питательных сред

Технология выполнения исследования включает следующие последовательные этапы:

  • первичный анализ информации о питательной среде и ее внешних характеристиках;

  • отбор образцов питательных сред для контроля;

  • визуальная инспекция питательной среды;

  • проверка питательной среды на стерильность;

  • процедуры обращения с контрольными штаммами микроорганизмов;

  • подготовка инокулюма и посев контрольных штаммов на питательную среду;

  • интерпретация результатов и заключение о качестве питательной среды.

3.1. Первичный анализ информации о питательной среде и ее характеристиках

При поступлении в лабораторию коммерческих питательных сред регистрируют: наименование и количество полученной среды; производителя и поставщика среды; серию, срок годности и состояние упаковки.

Изготовителем или поставщиком среды должны быть указаны следующие специфические микробиологические характеристики:

  • тип продукта (сухая среда, основа среды, готовая к употреблению среда);

  • критерии оценки функциональных характеристик питательной среды;

  • используемые контрольные штаммы;

  • ожидаемые результаты общего и микробиологического тестирования;

  • значение рН (если необходимо);

  • информация об условиях хранения и сроке годности.

3.2. Отбор образцов питательных сред для контроля

Если экономически нецелесообразно тратить время и средства на проверку маленьких партий питательных сред, их выбраковывают без проведения контрольных испытаний.

При объеме партии питательной среды менее 150 единиц (пробирок, чашек Петри или флаконов) пробы сред отбирают однократно в количестве не менее 2-5 единиц (в зависимости от величины партии). При получении на любом этапе испытаний неудовлетворительного результата проверки хотя бы одного отобранного образца, партию среды считают непригодной для работы.

При объеме партии питательной среды свыше 150 единиц рекомендуется отбирать для контроля от 8 до 50 пробирок/чашек Петри/флаконов (в зависимости от объема партии). Если от 2 до 5 или большее количество отобранных образцов (в зависимости от объема партии) не выдержат испытаний на любом из этапов контроля качества, то среду выбраковывают. При меньшем числе неудовлетворительных результатов проводят повторный отбор и контроль качества такого же количества образцов, как и в первый раз. Такую партию сред признают пригодной только тогда, когда суммарное количество образцов, выдержавших обе проверки, меньше уровня, допустимого для второго этапа контроля (Приложение 2).

3.3. Визуальная инспекция питательной среды

Визуальная инспекция сухих сред предусматривает проверку целостности и герметичности упаковки, гомогенности продукта по консистенции (отсутствие комков, инородных включений и пр.), соответствия цвета среды информации, содержащейся в паспорте, инструкции производителя.

Приготовленная в соответствии с инструкцией и разлитая по чашкам Петри питательная среда должна быть достаточно плотной, прозрачной или равномерно матовой, не иметь посторонних включений, комков и других визуальных недостатков. Цвет среды зависит от наличия в ней индикаторов или компонентов, придающих среде цвет или оттенок (например, кровь, яичный желток, сыворотка и т.п.).

Визуальная проверка самостоятельно приготовленных и готовых коммерческих сред позволяет выявить следующие дефекты:

  • нарушение упаковки готовых сред;

  • ошибки в маркировке питательных сред на пробирках, чашках Петри или флаконах и их упаковке;

  • истекший срок годности готовых сред;

  • трещины или другие повреждения чашек Петри, пробирок, флаконов со средой;

  • низкая плотность агаризованной среды;

  • высыхание среды;

  • отслоение плотной среды от поверхности чашек Петри или пробирок;

  • наличие кристаллов на поверхности или в глубине среды и другие признаки ее замораживания или расплавления;

  • неравномерная заливка плотной среды в чашке;

  • недостаточное количество среды в чашке Петри (толщина слоя < 3 мм) или пробирке (объем менее 3-5 мл);

  • гемолиз кровяных сред;

  • изменение цвета среды по сравнению с регламентированным (может быть вызвано отклонениями pH среды или ростом контаминантов);

  • отсутствие гладкой поверхности среды (за счет пузырей и пр.);

  • наличие обильного конденсата;

  • очевидную контаминацию микроорганизмами;

  • наличие в среде инородных включений или преципитатов.

3.4. Проверка питательной среды на стерильность

Самостоятельно приготовленные неселективные питательные среды проверяют на отсутствие контаминации микроорганизмами путем инкубирования в следующих условиях:

  • в аэробной атмосфере при 35 °C в течение 72 ч. (все среды);

  • в анаэробной атмосфере при 35 °C в течение 72 ч. (среды, предназначенные для работы с облигатно-анаэробными бактериями).

Проверку на стерильность коммерческих готовых сред в лабораториях ограничивают визуальной инспекцией отобранных из каждой партии чашек Петри, пробирок или флаконов на предмет отсутствия признаков роста микроорганизмов. В случае подозрения на контаминацию отобранные чашки Петри, пробирки или флаконы с готовыми питательными средами инкубируют в аэробной атмосфере при 35 °C в течение 72 ч. (см. раздел 3.2).

3.5. Процедуры обращения с контрольными штаммами микроорганизмов

3.5.1. Понятия и определения

Референтный штамм (референс-штамм, эталонный штамм): микроорганизм, определенный, по меньшей мере, до рода и вида, включенный в государственный каталог и описанный в соответствии с его характеристиками.

Референтный образец: партия емкостей, содержащих культуры, полученные путем одного посева из референтного штамма или множество емкостей из одной и той же партии референтного штамма от поставщика.

Субкультуры референтного образца: субкультуры референтного образца, хранящиеся в коллекции лаборатории в лиофилизированном состоянии или в условиях глубокой заморозки (в жидком азоте или при температуре -70 °C) или на среде хранения.

Рабочая культура: культуры, подготовленные для проведения внутрилабораторного контроля качества и подлежащие однократному использованию.

Контрольный штамм: микроорганизм, применяемый для оценки отдельных методик микробиологических исследований, микробиологических характеристик питательных сред и других видов работ, требующих стандартизации исследования. Контрольный штамм из референтного образца, полученного из национальной коллекции, либо из субкультуры референтного образца, хранящейся в рабочей коллекции с обязательным одним пассажем для восстановления типичных признаков.

3.5.2. Источники контрольных штаммов микроорганизмов

Эталонные (референтные) штаммы можно получить из следующих национальных и международных коллекций:

  • Национальный центр государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции III - IV групп патогенности (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича*)[5];

  • Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов ВКПМ;

  • Всероссийская коллекция непатогенных микроорганизмов ИБФМБ;

  • Американская коллекция типовых культур (АТСС), а также штаммы других национальных и международных коллекций  

* В настоящее время ФГБУ Научный центр экспертизы средств медицинского применения Минздрава РФ.

3.5.3. Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы хранят в лиофилизированном состоянии, в замороженном виде, в среде с криопротектором или на среде хранения в условиях и на протяжении сроков, приведенных в таблице 1.

3.5.4. Поддержание культур контрольных штаммов микроорганизмов

Для контрольных штаммов микроорганизмов, регулярно используемых для контроля качества, при наличии низкотемпературной морозильной камеры (до -70 oC) из референтного образца готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве (50 - 100 и более пробирок), которые затем хранят в коллекции лаборатории в условиях глубокой заморозки (при температуре -700С) и используют для приготовления рабочих культур контрольных штаммов.

Таблица 1. Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы

Условия хранения

Вид хранящейся культуры

Продолжительность хранения

Все микроорганизмы

Регламентируются производителем

Лиофилизированные культуры

До окончания срока годности

Быстро растущие нетребовательные бактерии

2 - 8 oC

Субкультуры референтного образца

Не более 6 мес.

≤ -20 oC

Суспензия с криопротектором

< 12 мес

≤ -50 oC

Суспензия с криопротектором

Неограниченно

Облигатно-анаэробные бактерии Нетребовательные бактерии

≤ -20 oC

Суспензия с криопротектором

< 12 мес

≤ -50 oC

Суспензия с криопротектором

Неограниченно

При отсутствии низкотемпературной морозильной камеры из референтного образца, получаемого из государственных или национальных коллекций, готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве. Приготовленные субкультуры хранят при температуре ≤ -20 oC не более 12 месяцев в бульоне с криопротектором или при температуре 2 - 8 oC не более 6 месяцев в полужидком агаре. Субкультуры референтного образца допустимо использовать многократно при отсутствии контаминации.

3.5.5. Восстановление контрольных штаммов микроорганизмов

Для получения рабочих культур делают высев из субкультуры референтного образца. Со среды хранения штамм рассевают на плотные неселективные питательные среды, обеспечивающие питательные потребности соответствующих микроорганизмов (1 пассаж). Посевы инкубируют в подходящих для роста условиях. При отсутствии роста на плотной среде культуру засевают на соответствующую жидкую питательную среду. После инкубирования делают высев на плотную питательную среду (1 пассаж). Так как микроорганизмы после 1 пассажа обладают пониженной жизнеспособностью, рекомендуется в качестве рабочих культур использовать культуры 2 или 3 пассажа. (Приложение 3).

3.5.6. Проверка культур контрольных штаммов

Выросшую на питательном агаре культуру контрольного штамма визуально проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации или просматривая под стереоскопическим микроскопом (лупой) в «проходящем свете». При выявлении контаминации или диссоциации следует уничтожить использованную пробирку с субкультурой референтного образца.

3.6. Технология оценки качества питательных сред с помощью контрольных штаммов

3.6.1. Методы оценки качества питательных сред

Оценку качества испытуемой среды по микробиологическим критериям проводят с помощью одного из методов:

  • качественного

  • полуколичественного

  • количественного

Выбор метода контроля определяется видами питательных сред и целями контроля (чувствительность, специфичность, селективность и т.д.). Перечень необходимых контрольных штаммов указывается в сертификате на данную коммерческую среду либо указан в приложении к настоящей стандартизованной технологии на основные питательные среды. (Приложение 4, 5, 6, 7, 8).

Качественный метод (посев штрихом) используют как ускоренный метод оценки морфологических характеристик роста микроорганизма на исследуемой питательной среде или дифференцирующих свойств питательной среды (для дифференциально-диагностических сред). Для контроля качества дифференциально-диагностических сред необходимо использовать как контрольные штаммы микроорганизмов, дающие положительный результат, так и штаммы, дающие отрицательный результат теста на данной среде. (Приложение 4, 5, 6).

Полуколичественный или количественный метод используют для оценки чувствительности или селективности питательных сред [10,11,12]. На испытуемую среду наносят инокулят контрольного штамма (или нескольких контрольных штаммов), указанного в приложении 6, в определенном количестве.

3.6.2. Микробиологические критерии качества питательной среды

При использовании контрольных штаммов по их росту на испытуемой питательной среде можно оценить следующие микробиологические критерии качества питательной среды:

  • типичность морфологических, культуральных характеристик микроорганизма;

  • скорость роста;

  • чувствительность (продуктивность) среды;

  • селективность (для селективных сред);

  • специфичность – выраженность отличительных признаков различных микроорганизмов для дифференциально-диагностических сред;

  • величина зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками для контроля сред и качества дисков с антибиотиками для диско-диффузионного метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Чувствительность среды – определяют по наибольшему разведению, обеспечивающему формирование колоний или визуально определяемый рост во всех засеянных пробирках.

Время появления роста (скорость роста в часах) – определяют по минимальному времени инкубации посевов, через который обнаруживается отчетливый, видимый невооруженным глазом рост культуры (помутнение, пленка, осадок – в бульоне, типичные колонии на чашках). Появление роста культуры регистрируют через 12, 18, 24, 48 ч. инкубации.

Культуральные свойства – характер роста на среде. На плотной среде – форма и размер колоний, края колоний, цвет, консистенция, наличие и тип гемолиза, склонность к роению и т.д.

Дифференцирующие свойства питательной среды – выраженность дифференцирующего признака оценивается по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний тестируемого штамма в сравнении со штаммом, не обладающим данными свойствами.

Показатель ингибиции – оценивается величиной отношения среднего количества колоний, выросших на селективной среде, к среднему количеству колоний на контрольной среде.

3.6.3. Процедура подготовки инокулюма контрольного штамма

При использовании качественного метода контроля процедура инокуляции питательной среды должна соответствовать таковой, используемой в рутинной лабораторной практике (одна колония, верхушки 3 - 5 колоний или петля культуры и т.д.).

При использовании полуколичественного или количественного метода готовят рабочие разведения контрольного штамма на 0,9% физиологическом растворе. Исходную взвесь готовят с концентрацией 108 – 109 КОЕ/мл, используя соответствующие стандарты мутности или нефелометры. Десятикратными разведениями доводят концентрацию микроорганизмов до необходимой для контроля. Последнее рабочее разведение должно содержать в 0,1 мл требуемое для контроля минимальное количество микроорганизмов (Приложение 8, 9).

Для количественных испытаний чашечных сред используют инокулят требуемых микроорганизмов с концентрацией 102 КОЕ. Для полуколичественных или качественных испытаний плотных питательных сред необходим инокулят, содержащий 103 – 104 КОЕ. Для контроля чувствительности (продуктивности) жидких сред используют инокулят, содержащий 10 - 100 КОЕ (Приложение 8, 9).

Для испытаний на селективность в чашку или пробирку со средой инокулируют суспензию нецелевых микроорганизмов (микроорганизмов, подавление или замедление роста которых требуется для обеспечения оптимального роста целевых микроорганизмов), содержащую от 104 до 106 КОЕ. Параллельно осуществляется контроль приготовленного инокулюма путем высева на соответствующую плотную неселективную питательную среду.

3.6.4. Интерпретация результатов оценки качества питательной среды

При использовании качественного метода контроля питательных сред оценивается скорость роста, величина колоний, морфология колоний и наличие других признаков, свойственных для контрольного штамма, например, гемолиз, пигмент и т.д. (см. Приложение 4, 5).

При оценке качества неселективных питательных сред полуколичественным или количественным методом чувствительность (продуктивность) питательной среды должна составлять не менее 70%. На селективных средах чувствительность среды для целевого микроорганизма должна быть не менее 50 - 70% (в зависимости от вида среды), а рост нецелевых микроорганизмов должен частично или полностью подавляться (Приложение 6).

3.7. Заключение о соответствии питательной среды заявленным характеристикам

Результаты испытаний считают удовлетворительными, если:

  • неселективные среды обеспечивают рост использованных контрольных штаммов, а те формируют в течение регламентированного срока колонии характерной морфологии и достаточного размера;

  • селективная среда частично или полностью ингибирует рост одних и поддерживает рост других контрольных штаммов в соответствии с ожидаемыми результатами, а растущие на ней микроорганизмы формируют колонии определенной величины с типичной морфологией в течение регламентированного срока;

  • дифференциально-диагностические среды обеспечивают дифференциацию использованных контрольных штаммов микроорганизмов (по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний или другим признакам).

Если результаты исследований с контрольными штаммами некорректны, питательная среда считается непригодной для проведения клинических исследований на практике.

4. Документация

Для регистрации исследований питательных сред в лаборатории вводится журнал “Внутрилабораторный контроль качества питательных сред”. При приготовлении любого вида питательных сред в журнале должна регистрироваться следующая информация:

  • Порядковый номер

  • Дата приготовления среды

  • Название среды

  • Номер серии, изготовитель

  • Количество емкостей (пробирок, чашек и т.п.)

  • Стерильность

  • Рост

  • Ростовые свойства

  • Ингибирующие свойства

  • Селективные свойства

  • Биохимические свойства

  • Заключение о пригодности

  • Подпись (ФИО сотрудника лаборатории).

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Материально-техническое оснащение, необходимое для выполнения стандартной технологии

Аппаратура

  • Микроскоп бинокулярный с иммерсионной системой и встроенным осветителем

  • Термостат (анаэростат)

  • Автоклав

  • Сухожаровой шкаф

  • Ламинарный бокс II класса биологической безопасности, оснащенный HEPA-фильтром

  • Дистиллятор

  • Аппарат для приготовления питательных сред (средоварка)

  • Ультрафиолетовая лампа

  • Стерильные пробирки пластиковые с пластиковыми, силиконовыми, целлюлозными пробками или стеклянные

  • Чашки Петри пластиковые

  • Калиброванные бактериальные петли и шпатели одноразовые

  • Штативы для лабораторных емкостей и предметных стекол, заливки агаризованных сред

  • Предметные стекла

  • Устройство для фиксации и окрашивания мазков

  • Стерильные серологические пипетки

  • Автоматические дозаторы с одноразовыми наконечниками;

  • Низкотемпературный холодильник

Реактивы

  • Питательные среды сухие и готовые и добавки к ним

  • Дистиллированная вода

  • Физиологический раствор

  • Набор красителей для окрашивания мазков: фуксин (сафранин), метиленовый синий, набор для окраски по Граму (генцианвиолет, фуксин (сафранин), обесцвечивающий раствор, раствор Люголя)

  • Иммерсионное масло

  • Контрольные штаммы микроорганизмов

  • Стандарты мутности (отраслевой производства ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевич и МакФарланда)/Денситометр

Другие расходные материалы

  • Маркеры по стеклу

  • Перчатки резиновые

  • Контейнеры для сброса отходов

  • Фильтровальная бумага

  • Емкости с дезинфицирующим раствором

  • Пакеты для автоклавирования

Контрольные штаммы микроорганизмов

Эталонные (референтные) штаммы национальных и международных коллекций.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Порядок отбора проб, подлежащих контролю питательных сред

Величина партии (ед.)

Кол-во отбираемых проб

Число проб, не выдержавших испытания

Результат контроля первично отобранных проб

Результат контроля повторно отобранных проб

первично

повторно

УР

НР

УР

НР

Однократный отбор проб

5-15

2

0

1

16-25

3

0

1

26-90

5

0

1

91-150

5

0

1

Двукратный отбор проб

151-280

8

8

0

2

1

2

281-500

13

13

0

2

1

2

501-1200

20

20

0

3

3

4

1201-3200

32

32

1

4

4

5

3201-10000

50

50

2

5

6

7

Обозначения. УР – удовлетворительный результат; НР – неудовлетворительный результат

ПРИЛОЖЕНИЕ 3. Подготовка тест-штамма для контроля.

3.1. Восстановление культур аэробов.

Восстановление культур из лиофилизированного или замороженного (на полистироловых или стеклянных бусах) состояния, а также из среды хранения проводят с использованием жидкой и плотной питательных сред. В первых посевах микробы обладают пониженной жизнеспособностью, в связи с чем рекомендуется использовать культуру после 2 - 3 пассажей через питательную среду.

1-ый пассаж:

  • Лиофилизированная культура. Ампулу с лиофилизированной культурой вскрывают согласно инструкции, вносят в нее 0,4 - 0,6 мл питательного бульона или физ. раствора, перемешивают до получения однородной микробной взвеси и высевают на жидкую и плотную питательную среду.

  • Культура со среды хранения. Культуру бактериологической петлей переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают до получения однородной микробной взвеси, встряхивают, а затем делают высев на питательный агар. Посевной материал распределяют шпателем по среде для получения отдельных колоний.

  • Замороженная культура. Стерильным пинцетом или иглой достают 1 бусину с культурой из пробирки CRYOBANK, извлеченной из морозильника. Бусину опускают в пробирку с питательным бульоном или на поверхность плотной питательной среды и инкубируют при соответствующих условиях. Бусину утилизируют в соответствии с общепринятыми правилами. Пробирку с оставшимися бусинами возвращают в морозильник.

Посевы инкубируют при 35 - 37 0С в течение 18-20 ч.

Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации. Далее проводят изучение культуральных, морфологических и биохимических свойств. При обнаружении более 25% полиморфных колоний, культура не может быть использована для контроля.

2-ой пассаж:

Отдельную типичную колонию культуры 1-го пассажа переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают и пересевают в 2 - 3 пробирки с бульоном и на питательный агар. Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на соответствие культуральных, морфологических и биохимических свойств.

Восстановленную таким образом культуру используют для проведения внутрилабораторного контроля питательных сред или для других нужд.

3.2. Восстановление культур анаэробов.

  • 1-ый пассаж:

Лиофилизированную или замороженную (на полистироловых или стеклянных бусах) культуру, а также из среды хранения переносят в пробирку с питательным бульоном для анаэробов и перемешивают до получения однородной микробной взвеси. Посевы инкубируют при 35 - 37 0С в течение 18 - 20 ч. в анаэробных условиях до отчетливого видимого роста культуры в виде диффузного помутнения.

  • 2-ой пассаж:

Отдельную типичную колонию культуры 1-го пассажа переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают и пересевают в 2-3 пробирки с бульоном и на питательный агар. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 35 - 37 0С в течение 18 - 20 ч. Выросшую на питательном агаре культуру проверяют на соответствие культуральных, морфологических и биохимических свойств.

Восстановленную таким образом культуру используют для проведения внутрилабораторного контроля питательных сред или для других нужд.

ПРИЛОЖЕНИЕ 4. Минимальные требования к проверке качества отечественных питательных сред с помощью контрольных тест-штаммов микроорганизмов.

N п/п

Питательные среды (регистрационны й номер)

Атмосфера, время и температура культивирования

Контрольные тест-штаммы*

Наблюдаемый эффект

1

2

3

4

5

1.

Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ- бульон)ФСР 2007/00002.

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С

Shigella flexneri 1a 8516

Образование индола (розовое окрашивание индикаторной бумаги)

Salmonella typhi H901 ГДР/ГИСК

Образование сероводорода (почернение индикаторной бумаги)

Corynebacterium xerosis 1911

Диффузное помутнение среды

Staphylococcus aureus Wood-46

Диффузное помутнение среды

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Диффузное помутнение среды

Escherichia coli 3912/41(055:K59)

Диффузное помутнение среды

2.

Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ФСР 2007/00001

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С (для S. marcescens 1 при (22 ± 2) °С)

Shigella flexneri 1a 8516

Бесцветные прозрачные круглые колонии диаметром 1,5 ± 0,5 мм в S форме

Shigella sonnei «S form»

Бесцветные прозрачные круглые колонии диаметром 1,5 ± 0,5 мм в S форме

Pseudomonas aeruginosa 27/29

Сплошной рост с образованием сине-зеленого пигмента

Serratia marcescens 1

Сплошной рост с образованием красного пигмента

3.

Питательная среда для выделения сальмонелл и шигелл сухая (SS-агар) ФСР 2007/00838

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С

Salmonella typhi H901 ГДР/ГИСК

Рост бесцветных колоний в S-форме диаметром 1,0 - 2,0 мм

Salmonella paratyphi A-225

Рост бесцветных колоний в S-форме диаметром 1,0 - 2,0 мм

Shigella flexneri 1a 8516

Рост бесцветных или слегка розовых колоний в S-форме диаметром 1,0 - 2,0 мм

Shigella sonnei «S form»

Рост бесцветных или слегка розовых колоний в S-форме диаметром 1,0 - 2,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Колонии окрашены в малиновый цвет. Диаметр колоний не менее 1,5 - 2,5 мм

Proteus vulgaris HX 19 222

Рост бесцветных колоний диаметром 2,0 - 4,0 мм. Роение частично подавлено

Proteus mirabilis 3177

Рост бурых колоний диаметром 2,0 - 4,0 мм с темным центром. Роение подавлено полностью

Staphylococcus aureus Wood-46

Рост подавлен полностью

4.

Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (АГАР ПЛОСКИРЕВА-ГРМ) ФСР 2008/03938

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С

Shigella flexneri 1a 8516

Колонии бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0 - 2,0 мм

Salmonella typhi H-901 ГДР/ГИСК

Колонии бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0 - 2,0 мм

Salmonella paratyphi A-225

Колонии бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0 - 2,0 мм

Shigella sonnei «S form»

Колонии бесцветные или слегка розового цвета, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0 - 2,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (О55:К59)

Колонии малинового цвета, круглые, выпуклые, гладкие диаметром 1,5 - 2,5 мм

5.

Питательная среда для выделения и идентификации патогенных энтеробактерий (XLD-агар) ФСР 2010/09165

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С

Shigella flexneri 1a 8516

Колонии круглые, блестящие, бледно-розовые или цвета среды, диаметром 1,0 - 1,5 мм

Salmonella typhimurium 79

Колонии круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0 - 3,0 мм

Salmonella enteritidis 11272

Колонии круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0 - 3,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (O55:K59)

Колонии круглые, непрозрачные, желтые, с желтой зоной вокруг, диаметром 1,5 - 3,0 мм

Proteus mirabilis 3177

Колонии круглые, прозрачные, желтого цвета с темным центром, диаметром 1,0 - 2,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46

Отсутствие роста

6.

Питательный бульон для накопления сальмонелл по Раппапорту-Вассилиадису сухой (RVS-Бульон) ФСР 2010/09163

Аэробные (24 ± 3) ч. (41,5 ± 1) °С

Salmonella enteritidis 11272

Диффузное помутнение

Salmonella typhimurium 79

Диффузное помутнение

Escherichia coli ATCC 25922

Отсутствие роста

7.

Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (СРЕДА ЛЕВИНА-ГРМ) ФСР 2008/03063

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1)°С

Shigella flexneri 1a 8516

Наличие бесцветных или слабо-розовых, прозрачных, круглых колоний диаметром 1,0 - 1,5 мм

Escherichia coli 168/59 (0111:K58)

Наличие круглых темно-фиолетовых колоний с зеленым металлическим блеском (или без него) диаметром 1,5 - 2,0 мм

Staphylococcus aureus 209-P (ATCC 6538-P)

Наличие бесцветных или светло-фиолетовых круглых колоний с темным центром до 1 мм

8.

Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (АГАР ЭНДО-ГРМ) ФСР 2007/00375

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Shigella sonnei «S form»

Рост бесцветных или слегка розовых колоний со слабо выраженным центром, круглые, прозрачные, диаметром 1,5 - 2,5 мм

Shigella dysentheriae I 1362

Рост бесцветных, круглых, прозрачных колоний диаметром 1,0 - 1,5 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Рост круглых колоний малинового цвета с металлическим блеском диаметром 2,0 - 3,0 мм

Escherichia coli 168/59 (O111:K58)

Рост круглых колоний малинового цвета диаметром 1,5 - 2,5 мм с нечетким металлическим блеском

Staphylococcus aureus Wood-46

Полное отсутствие роста

9.

Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (ВИСМУТ-СУЛЬФИТ-ГРМ агар) ФСР 2008/03237

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1)°С

Salmonella typhi H 901 ГДР/ГИСК

Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0 - 3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella typhimurium 79

Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0 - 3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella london 3496

Наличие круглых, черных колоний, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0 - 3,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Salmonella paratyphi A 225

Наличие круглых, зеленых, с темным центром колоний диаметром 1,0 - 2,5 мм

Salmonella gallinarum 665

Наличие круглых, темно-зеленых колоний диаметром 0,8 - 1,2 мм

Salmonella typhi «bismut»

Наличие полиморфных, черных с металлическим блеском колоний или без него, диаметром 1,0 - 2,0 мм; среда под колониями окрашивается в черный цвет

Escherichia coli 3941/12 (055:K59)

Наличие круглых, зеленовато-коричневых колоний, диаметром 0,5 - 1,5 мм

Proteus vulgaris HX 19 222

Наличие круглых, светло-зеленого цвета колоний диаметром 1,0 - 2,0 мм

Staphylococcus aureus Wood 46

Рост подавлен полностью

Klebsiella rhinoscleromatis K3 NCTC 5046

Рост подавлен полностью

10.

Питательная среда для обнаружения бактерий группы кишечной палочки сухая (СРЕДА КЕССЛЕРА-ГРМ) ФСР 2007/00971

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1)°С (для E.coli дополнительно 43 ± 1ºС)

Escherichia coli 675

Помутнение среды с образованием газа в поплавке

Klebsiella pneumoniae 418

Помутнение среды с образованием газа в поплавке

Citrobacter freundii 101/57

Помутнение среды с образованием газа в поплавке

Enterobacter aerogenes 10006

Помутнение среды и слабое газообразование в поплавке

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Слабое помутнение среды без газообразования

Proteus vulgaris HX 19 222

Отсутствие роста

Staphylococcus aureus Wood-46

Отсутствие роста

11.

Питательная среда для выделения и дифференциации E. coli 157:Н7 сухая (СОРБИТОЛ E. COLI O157:H7 агар) ФСР 2007/00970

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Escherichia coli 4 (О157:Н7)

Круглые, полупрозрачные, бесцветные или светло-розовые, диаметром 1,5 - 2,5 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:К59)

Круглые, малинового цвета со слабо выраженным металлическим блеском или без него, диаметром 1,5 - 2,5 мм

Salmonella typhimurium 79

Круглые, малинового цвета, с металлическим блеском, диаметром 1,0 - 2,0 мм

Shigella flexneri 1 a 8516

Круглые, полупрозрачные, бесцветные или светло-розовые, диаметром 1,0 - 1,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46

Полное отсутствие роста

12.

Питательная среда для обнаружения и выделения Е. coli, колиформных бактерий и кишечных патогенов сухая (АГАР МАККОНКИ-ГРМ) ФСР 2009/05628.

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Escherichia coli АТСС 25922

Колонии круглые, гладкие от розового до красного цвета, диаметром 1,5 - 3,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Колонии круглые, гладкие от розового до красного цвета, диаметром 1,5 - 3,0 мм

Shigella flexneri 1a 8516

Колонии бесцветные или бледно-розовые, круглые, гладкие, диаметром 1,0 - 2,0 мм

Salmonella typhimurium 79

Колонии бесцветные, круглые, гладкие, диаметром 1,5 - 3,0 мм

Proteus mirabilis 3177

Колонии бесцветные, круглые, гладкие, диаметром 2,0 - 4,0 мм

Enterococc faecalis 775

Колонии мелкие, розово-красные, диаметром до 1,0 мм

Staphylococcus aureus 209 Р

Рост подавлен

13.

Питательная среда для предварительного теста на присутствие E. coli и колиформных бактерий сухая (БУЛЬОН МАККОНКИ-ГРМ) ФСР 2009/05627

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Salmonella typhimurium 79

Без изменения цвета среды

Escherichia coli ATCC 25922

Изменение цвета среды в желтый, газ

Escherichia coli 3912/41 (О55:К59)

Изменение цвета среды в желтый, газ

Klebsiella pneumoniae 418

Изменение цвета среды в желтый, газ

Enterobacter aerogenes 10006

Изменение цвета среды в сиренево-желтый, газ

Shigella flexneri 1 a 8516

Без изменения цвета среды

Staphylococcus aureus 209 Р

Рост подавлен

14.

Питательная среда для выделения и идентификации энтеробактерий сухая (SDS-БУЛЬОН) ФСР 2007/00969

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1)°С

Escherichia coli 675

Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006

Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Klebsiella pneumoniae 3534/51

Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Serratia marcescens 1

Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Citrobacter freundii 101/57

Помутнение и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227

Помутнение без изменения цвета среды

Shigella flexneri 1a 8516

Помутнение без изменения цвета среды

Staphylococcus aureus Wood-46

Полное отсутствие роста

Proteus vulgaris HX 19 222

Полное отсутствие роста

15.

Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Агар КЛИГЛЕРА-ГРМ) ФСР 2007/00968

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1)°С

Salmonella typhi «bismuth»

Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета. Слабое почернение по уколу.

Salmonella paratyphi B 8006

Скошенная часть малинового цвета, столбик чёрного цвета. Газообразование.

Shigella sonnei «S form»

Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета.

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Скошенная часть и столбик жёлтого цвета. Газообразование.

Providencia alcalifaciens 1068-50

Скошенная часть малинового цвета, столбик желтого цвета. Слабое газообразование.

Proteus mirabilis Сиднеев

Скошенная часть малинового цвета, столбик чёрного цвета. Газообразование.

Pseudomonas aeruginosa 613-60

Скошенная часть и столбик малинового цвета.

16.

Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (СРЕДЫ ГИССА-ГРМ) (с лактозой, глюкозой, сахарозой, мальтозой или маннитом). ФСР 2008/03494

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Shigella flexneri 1a 8516

Каждая среда Гисса-ГРМ позволяет идентифицировать штаммы энтеробактерий по тесту ферментации одного из углеводов или маннита, содержащегося в этой среде. В случае положительной реакции происходит образование кислоты с изменением цвета среды с сине-зеленого на желто-зеленый или желтый, образование газа сопровождается появлением «пузырьков» в глубине среды или на ее поверхности. Отрицательная реакция характеризуется отсутствием изменений цвета среды.

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Shigella dysenteriae I 1362

Proteus vulgaris HX 19 222

Klebsiella pneumoniae 3534/51

Salmonella typhi 65

Staphylococcus aureus «Виотко»

17.

Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий сухая (СРЕДА РЕССЕЛЯ-ГРМ) ФСР 2008/02818

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Shigella flexneri I a 8516

Изменение цвета столбика среды в желтый и посинение ее скошенной части

Salmonella paratyphi A-225

Изменение цвета столбика среды в желтый с образованием газа и посинением скошенной части среды

Alcaligenes faecalis 415

Изменение цвета всей среды в синий или посинение ее скошенной части

Escherichia coli 055 К 59 № 339

Изменение цвета всей среды в желтый с образование газа в столбике

18.

Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной) ФСР 2011/10006

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1)°С

Yersinia enterocolitica 287 II

Столбик среды и скошенная часть ярко-малинового цвета

Yersinia pseudotuberculosis III

Столбик среды и скошенная часть ярко-малинового цвета

Shigella sonnei «S form»

Столбик среды желтого цвета, скошенная часть красно-малинового цвета

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Столбик и скошенная часть среды желтого цвета, наличие в столбике пузырьков газа

Citrobacter freundii 101/57

Столбик и скошенная часть среды желтого цвета, почернение среды в столбике, наличие в столбике пузырьков газа

Proteus vulgaris HX 19 222

Почернение среды в столбике, скошенная часть ярко-малинового цвета

19.

Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации лактозы сухая (СРЕДА ЭЙКМАНА с лактозой) ФСР 2008/03666

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С и 18 - 24 ч. (43 ± 1) °С (для эшерихий).

Escherichia coli 3912/41 (О55:K59)

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227

Помутнение без изменения цвета среды

Escherichia coli ATCC 25922

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli 4 (О157:Н7)

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006

Помутнение, слабое газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в сине-зеленый

Proteus vulgaris HX 19 222

Помутнение без изменения цвета среды

20.

Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации глюкозы сухая (СРЕДА ЭЙКМАНА с глюкозой) ФСР 2008/03665

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С и 18 - 24 ч. (43 ± 1) °С (для эшерихий)

Escherichia coli 3912/41 (О55:K59)

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli ATCC 25922

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Escherichia coli 4 (О157:Н7)

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Enterobacter aerogenes 10006

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Помутнение, изменение цвета среды из зеленого в сине-зеленый

Proteus vulgaris HX 19 222

Помутнение, газообразование и изменение цвета среды из зеленого в желтый

21.

Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулез а сухая (ИЕРСИНИЯ-АГАР) ФСР 2007/00900

Аэробные 24 - 48 ч. (28 ± 1) °С

Yersinia enterocolitica 287-II

Рост круглых, гладких, блестящих, сине-зеленых колоний диаметром не менее 1,5 мм

Yersinia pseudotuberculosis III

Рост матовых, шероховатых, зеленовато-синих колоний с фестончатыми краями и темным выпуклым центром диаметром не менее 1,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (055:K59)

Рост ярко-желтых сочных выпуклых колоний диаметром не менее 2,0 мм

Shigella flexneri 1a 8516

Рост желтых плоских колоний диаметром не менее 1,0 мм

Staphilococcus aureus Wood-46

Роста нет

22.

Питательная среда для выделения коринебактерий (КОРИНЕБАКАГ АР) ФСР 2007/00003

Аэробные 48 ч. (37 ± 1) °С

Corynebacterium diphtheriae gravis 665

Темно-серые, шероховатые, со складчатой поверхностью и неровными (изрезанными) краями - тип «маргаритки» диаметром 2,0 - 3,5 мм

Corynebacterium diphtheriae mitis 6765

Темно-серые, круглые, гладкие, блестящие, с ровными краями диаметром 1,5 - 3,0 мм

Corynebacterium xerosis 1911

Серовато-черные, круглые, выпуклые, блестящие диаметром 1,2 - 2,0 мм

Corynebacterium ulcerans 675

Серовато-черные, круглые, выпуклые, блестящие диаметром 0,5 - 1,5 мм

Staphylococcus aureus Wood-46

Отсутствие роста

Streptococcus pyogenes Dick I

Отсутствие роста

23.

Питательная среда для определения токсигенности дифтерийных микробов сухая (КОРИНЕТОКСА ГАР) ФСР 2007/00370

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С

Corynebacterium diphtheriae gravis 665

  1. Через 22 - 24 ч. при просмотре посева под лупой в проходящем свете на темном фоне наблюдаются линии преципитации

  2. Через 44 - 48 ч. линии преципитации становятся компактнее и видны невооруженным глазом

Corynebacterium diphtheriae mitis 6765

Corynebacterium diphtheriae intermedius 619

Corynebacterium diphtheriae gravis nontoxigenic 4895

Линии преципитации после инкубации не наблюдаются

Corynebacterium diphtheriae mitis nontoxigenic 3689

Corynebacterium diphtheriae intermedius nontoxigenic 7227

24.

Питательная среда для идентификации коринебактерий по тесту расщепления цистина сухая (СРЕДА ПИЗУ) ФСР 2008/03064

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С

Corynebacterium diphtheriae mitis nontoxigenic 203 АГ

Почернение среды по ходу укола и образование «облачка» черно-коричневого цвета в глубине столбика

Corynebacterium diphtheriae gravis 75

Сorynebacterium xerosis 1911

Без изменения цвета среды (возможно появление темного пятна на поверхности среды) Без изменения цвета среды

Сorynebacterium pseudodiphtheriticumn «Соколов»

25.

Питательная среда для выделения стафилококков сухая (СТАФИЛОКОК К-АГАР) ФСР 2011/10007

Аэробные 48 ч. (37 ± 1) °С

Staphylococcus aureus «Виотко»

Светло-желтые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями блестящие диаметром 2,0 - 4,0 мм

Staphylococcus epidermidis ATCC 14990

Белые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями, диаметром 1,5 - 3,5 мм

Staphylococcus saprophyticus CCM 883

Белые, непрозрачные, выпуклые, круглые с ровными краями, диаметром 1,5 - 3,5 мм

Escherichia coli 168/59(O111:K58)

Отсутствие роста

Pseudomonas aeruginosa 273

Отсутствие роста

Proteus vulgaris HX 19 222

В случае роста - отсутствие «роения»

26.

ПЕПТОН основной сухой ФСР 2009/05472

Аэробные 6 ч. (37 ± 1) °С

Vibrio cholerae не О1 Р-9741

Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

Vibrio cholerae О1 Р-1 (145)

Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

Vibrio cholerae О1 М-878 (890)

Формирование типичных колоний на щелочном агаре после высева из основного пептона

27.

Питательная среда для выделения и культивирования холерного вибриона сухая (ЩЕЛОЧНОЙ АГАР) ФСР 2009/05473

Аэробные 12 ч. (37 ± 1) °С

Vibrio cholerae не О1 Р-9741

Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae О1 Р-1 (145)

Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae О1 М-878 (890)

Гладкие, полупрозрачные с голубоватым оттенком в проходящем свете колонии диаметром не менее 1,0 мм

28.

Питательная среда для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов сухая (TCBS-агар) ФСР

Аэробные 18 ч. (37 ± 1) °С

Vibrio cholerae не 01 P-9741

Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae cholerae 01 группы Р-1 (145)

Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

Vibrio cholerae eltor 01 группы М 878 (890)

Наличие роста в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм

Escherichia coli 3912/41 (О55:К59)

Рост подавлен

Proteus vulgaris HX 19 222

Рост подавлен

29.

Питательная среда для контроля стерильности сухая (ТИОГЛИКОЛЕВ АЯ СРЕДА) ФСР 2008/03235

Анаэробные 48 ч. 34 - 35 °С

Alcaligenes faecalis 415

Помутнение верхней части столбика среды

Clostridium novyi 198

Шарообразные колонии или диффузное помутнение среды с выраженной прозрачной зоной в верхней части столбика среды

30.

Питательная среда для количественного определения микробной загрязненности (Среда № 1 ГРМ) ФСР 2011/11415

Аэробные (21 ± 3) ч (33 ± 2)°С.

Bacillus cereus NCTC 8035

Плоские, мелкобугристые, слегка вогнутые, матовые колонии, с волнистыми краями, диаметром 2,0 - 5,0 мм

Staphylococcus aureus FDA 209-P

Круглые, слегка выпуклые колонии, с ровными краями, диаметром 1,5 - 2,0 мм

Enterobacter cloacae ГИСК A-186

Круглые колонии в S-форме, диаметром 1,5 - 2,0 мм

31.

Питательная среда для идентификации стафилококков (СРЕДА № 10 ГРМ) ФСР 2007/00374

Аэробные (45 ± 3) ч. (33 ± 2)°С

Staphylococcus aureus FDA 209-Р (АТСС 6538-Р)

Золотисто-желтые колонии, окруженные желтыми зонами

Escherichia coli ATCC 25922

Отсутствие роста

Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453

Отсутствие роста

32.

Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий сухая (БИФИДУМ-СРЕДА) ФСР 2008/03236

Анаэробные 24 - 72 ч. (37 ± 1) °С

Bifidobacterium bifidum 1

Колонии типа «комет», «гвоздиков», «тяжей», «шариков» различной степени четкости, с расположенные по всему объему столбику среды и прозрачной зоной в верхней его части

Bifidobacterium adolescentis ATCC 15705

Bifidobacterium breve ATCC 15701

Bifidobacterium infantis ATCC 15702

Bifidobacterium longum ATCC 15708

Escherichia coli 3912/41(055:K59)

Диффузное помутнение столбика среды с газообразованием в виде пены на поверхности

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Диффузное помутнение верхней части столбика среды с последующим распространением мутности вниз по среде

33.

Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальны м препаратам сухая (СРЕДА ТИПА АГВ) ФСР 2012/13687

Аэробные 18 - 20 ч. (36 ± 1) °С

Escherichia coli АТСС 25922

Четкие зоны ингибиции

Staphylococcus aureus АТСС 25923

Четкие зоны ингибиции

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853

Четкие зоны ингибиции

34.

Питательная среда для выявления клостридий по сульфитредуциру ющему признаку сухая (СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) ФСР 2009/05626

Анаэробные 24 ч. (37 ± 1) °C

Модификации 1,2

Модификация 3

Clostridium perfringens 13124

Колонии черного цвета по всему объему столбика среды

Колонии R-формы черного или белого цвета с черным центром и частичное почернение среды

Escherichia coli 25922

Колонии белого цвета на поверхности и в столбике среды

Колонии S-формы, белого цвета

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Колонии белого цвета на поверхности среды

Колонии R-формы, белого цвета

35.

Питательный бульон для выделения листерий (ПБЛ) ФСР 2010/09161.

Аэробные 48 ч. 30°C

Listeria monocytogenes 766

Помутнение среды, при встряхивании наблюдаются муаровые волны

Listeria ivanovi

Помутнение среды, при встряхивании наблюдаются муаровые волны

Escherichia coli АТСС 25922

Рост подавлен

Proteus vulgaris HX 19 222

Рост подавлен

Staphylococcus aureus Wood-46

Рост подавлен

36.

Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ) ФСР 2010/09162

Аэробные 48 ч. 37 °C

Listeria monocytogenes 76

Наличие мелких, круглых, серо-желтого цвета колоний, диаметром 0,4 - 1,2 мм с образованием вокруг колоний черной зоны

Listeria ivanovi

Наличие мелких, круглых, серо-желтого цвета колоний, диаметром 0,2 - 1,0 мм с образованием вокруг колоний черной зоны

Esherichia coli АТСС 25922

Рост подавлен

Proteus vulgaris HX 19 222

Рост подавлен

Staphylococcus aureus Wood-46»

Рост подавлен

37.

Питательная среда для выделения и культивирования дрожжеподобных и плесневых грибов (САБУРО МАЛЬТОЗА АГАР) ТУ ФСР 2009/05625

Аэробные 44 - 48 ч. 25 - 30 °С.

Candida albicans NCTC 885-653

Гладкие, выпуклые колонии белого цвета в виде полусферы с ровным краем, диаметром 2,0 - 3,0 мм

Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р (FDA 209-P)

Отсутствие роста в присутствии теллурита калия

Enterobacter cloacae ГИСК A-186

Отсутствие роста в присутствии теллурита калия

38.

Набор питательных сред для ускоренного определения лекарственной чувствительности и первичной идентификации микобактерий туберкулеза (ТБ тест-набор) ФСР 2007/01366

Аэробные 8 - 12 суток (37 ± 1) °С

Mycobacterium tuberculosis H37Ra

Появление красной или интенсивной розовой, или фиолетовой окраски во флаконах № 1 без препаратов и во флаконе № 3 с ТКГ

39.

Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности микобактерий туберкулеза к пиразинамиду (PZA-тест) ФСР 2011/10830

Аэробные 8-21 суток (37 ± 1) °С

Mycobacterium tuberculosis H37Ra

Появление красной или интенсивной розовой, или фиолетовой окраски во флаконах № 1 без PZA

40.

Питательная среда для выделения энтерококков сухая (ЭНТЕРОКОККА ГАР) ФСР 2011/10008

Аэробные 24 - 48 ч. (37 ± 1) °С

Enterococcus faecalis ATCC 19433

Колонии круглые гладкие бордового цвета с металлическим блеском

Enterococcus faecium ATCC 19434

Колонии гладкие круглые светло-розового цвета или с темным центром и светлым ободком

Escherichia coli ATCC 25922

Отсутствие роста

Staphylococcus aureus АТСС 25923

Отсутствие роста

41.

Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл сухая (ЛАКТОБАКАГА Р) ФСР 2010/09164

Анаэробные 44 - 48 ч. (37 ± 1) °С

Lactobacillus plantarum 8Р-А3

Белые, блестящие колонии с ровными краями

Lactobacillus brevis ATCC 367

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842

Pseudomonas aeruginosa 27/99

Отсутствие роста

Escherichia coli 0551 3912/41 (055:K59)

42.

Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению (Гемофилус агар) ФСР 2011/11118

Анаэробные 24 - 48 ч. 37 °С.

Haemophilus influenzae 423

Рост в виде слизистых круглых полупрозрачных сероватого цвета колоний диаметром до 2 мм

Haemophilus influenzae АТСС 9006

Рост в виде слизистых круглых полупрозрачных сероватого цвета колоний диаметром до 2 мм

Streptococcus pyogenes Dick-1

Нет роста

Neisseria meningitidis A 208

Нет роста

43.

Хромогенная питательная среда для обнаружения колиформных бактерий и E.coli, сухая (ХРОМАГАР) РЗН 2013/709

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С

Escherichia coli Ewing (O124K72) 227

Колонии круглые, гладкие, блестящие, синего цвета с фиолетовым ореолом или без него, диаметром от 1,0 до 2,5 мм

Escherichia coli АТСС 25922

Колонии круглые, гладкие, блестящие, синего цвета с фиолетовым ореолом или без него, диаметром от 1,0 до 2,5 мм

Citrobacter freundii 101/57

Колонии круглые, гладкие, блестящие, розового цвета, диаметром от 1,5 до 2,5 мм;

Salmonella enteritidis 11272

Колонии круглые, гладкие, блестящие, бесцветные, диаметром от 1,0 до 2,0 мм.

Enterococcus faecalis 775

Рост подавлен

44.

Питательный агар для обнаружения и учёта E.coli и колиформных бактерий , сухой (ЛАКТОЗНЫЙ ТТХ АГАР С ТЕРГИТОЛОМ) РЗН 2013/710

Аэробные 18 - 20 ч. (37 ± 1) °С

Escherichia coli 3912/41(055:К59)

Колонии круглые, слизистые, желто-оранжевого цвета с желтой зоной, диаметром 2,0 - 3,0 мм

Escherichia coli АТСС 25922

Колонии круглые, слизистые, желто-оранжевого цвета с желтой зоной, диаметром 2,0 - 3,0 мм

* Примечание. Используются контрольные тест-штаммы из Национального центра государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции 3 - 4 групп патогенности Государственное НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А Тарасевича (см. сноску на странице 7).

ПРИЛОЖЕНИЕ 5. Минимальные требования к проверке качества питательных сред с помощью контрольных штаммов микроорганизмов

Питательные среды Атмосфера, время и t (oC) инкубации посевов Контрольные штаммы (ATCC №) Ожидаемый результат

Агар для облигатно-анаэробных с дефибринированной или лизированной кровью барана

Анаэробная, 24 - 48 ч., 35 °C

B. fragilis (25285)

C. perfringens (13124)

F. nucleatum (25586)

P. anaerobius (27337)

P. melaninogenica (25845)

Рост

Рост, бета-гемолиз

Рост

Рост

Рост

Кровяной агар

Аэробная или CO2, 18 - 24 ч., 35 °C

S. pyogenes (19615)

S. pneumoniae (6305)

S. aureus (25923)

E. coli (25922)

Рост, бета-гемолиз

Рост, альфа-гемолиз

Рост

Рост

Триптиказо-соевый агар с кровью барана (для CAMP-теста)

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

S. aureus (33862/25923)

S. agalactiae (12386)

S. pyogenes (19615)

Рост

Положительная реакция теста

Отрицательная реакция теста

Колумбийский CNA агар с кровью барана

Аэробная или CO2, 24 - 48 ч., 35 °C

S. pyogenes (19615)

S. pneumoniae (6305)

S. aureus (25923)

P. mirabilis (12453)

Рост, бета-гемолиз

Рост, альфа-гемолиз

Рост

Ингибирование (частичное)

Кровяные среды на основе сердечно-мозговой вытяжки, триптиказо-соевого бульона и сред с тиолом.

Аэробная, 5 дней, 35 °C Аэробная, 5 дней, 35 °C

B. fragilis (25285)

S. pneumoniae (6305)

Рост

Рост

Кампилобактериозный агар

Пониженное содержание O2, с CO2, 48 ч., 42 °C

C. jejuni (33291)

E. coli (25922)

Рост

Ингибирование роста (частичное)

Шоколадный агар

CO2, 24 и 48 ч., 35 °C

N. gonorrhoeae (43069)

H. influenzae (10211)

Рост

Рост

Агар с цефсулодином, иргазаном и новобиоцином (CIN)

Аэробная, 24 - 48 ч., 25 °C

Y. enterocolitica (9610)

E. coli (25922)

P. aeruginosa (27853)

E. faecalis (29212)

Рост; красный центр прозрачные края («бычий глаз»)

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Бролацин агар (CLED)

Аэробная, 24 - 48 ч., 35 °C

E. coli (25922)

P. vulgaris (8427)

S. aureus (25923)

Рост, колонии с желтым центром

Рост, голубоватые распространяющиеся колонии

Ингибирование (частичное), однотипные, темно-желтые

Забуференный угольный агар с дрожжевым экстрактом (BCYE) (CYE/BCYE)

Аэробная, 48 - 72 ч., 35 °C

L. pneumophila (33152)

L. bozemanii (33217)

L. micdadei (33204)

Рост: желто-зеленые флуоресцирующие в УФ-свете

Рост: бледно-голубые, флюорецирующие в УФ-свете

Рост

Накопительный бульон для энтеробактерий [GN], селенитовый бульон

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

S. typhimurium (14028)

S. sonnei (9290)

E. coli (25922)

Рост пересевов

Рост пересевов (может ингибироваться в селенитовой среде)

Ингибирование пересевов с селенитового бульона (от частичного до полного)

Рост в пересеве с GN бульона

Среда с эозином и метиленовым синим (агар Левина, агар EMB)

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

S. typhimurium (14028)

E. coli (25922)

E. faecalis (29212)

Рост, колонии от бесцветных до янтарного цвета

Рост, голубовато-черные колонии с зеленоватым металлическим блеском

Ингибирование (частичное)

Гектоен энтерик агар

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

S. typhimurium (14028)

S. flexneri (12022)

E. faecalis (29212)

E. coli (25922)

Рост: зеленовато-голубые колонии с черным центром

Рост, колоний зелено-синие колонии

Ингибирование (частичное); желтые колонии

Ингибирование роста (от частичного до полного); колонии желтые – оранжевые

Агар МакКонки

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

E. coli (25922)

P. mirabilis (12453)

S. typhimurium (14028)

E. faecalis (29212)

Рост, розовые колонии

Рост, бесцветные, частичное ингибирование роения протея

Рост, бесцветные колонии

Ингибирование (частичное)

Манитол солевой агар

Аэробная, 24 и 48 ч., 35 °C

S. aureus (25923)

S. epidermidis (12228)

P. mirabilis (12453)

Рост, 2-суточные колонии с желтыми зонами

Рост, 2-суточные колонии с красными зонами.

Ингибирование (частичное)

Агар PC (Burkholderia cepacia)

Аэробная, 48 - 72 ч., 30 °C

B. cepacia (25416)

E. coli (25922)

P. aeruginosa (27853)

S. aureus (25923)

Рост: колонии с красной зоной

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Агар для сальмонелл и шигелл (SS)

Аэробная, 24 ч., 35 °C

S. typhimurium (14028)

S. flexneri (12022)

E. faecalis (29212)

E. coli (25922)

Рост, колонии бесцветные или без черного центра

Рост, бесцветные колонии

Полное ингибирование роста

Ингибирование роста (от частичного до полного), колонии от розовых до розово-красных с преципитатом

Селективные среды для патогенных Нейссерий

CO2, 24 - 48 ч., 37 °C

N. gonorrhoeae (43069)

N. meningitidis (13090)

P. mirabilis (43071)

E. coli (25922)

N. sicca (9913)

C. albicans (60193)

S. epidermidis (12228)

Рост

Рост

Частичное ингибирование роста на средах с триметопримом

Частичное ингибирование

Частичное ингибирование

Частичное ингибирование

Частичное ингибирование

Селективная среда для энтерококков, с азидом натрия

Аэробная, 24 - 48 ч., 35 °C

E. faecalis (29212)

S. pyogenes (19615)

E. coli (25922)

Рост, почернение вокруг колоний

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Частичное ингибирование, бесцветные колонии на желчно-эскулиновом агаре

Селективная среда для энтерококков, без азида натрия

Аэробная, 24 - 48 ч., 35 °C

E. faecalis (29212)

S. pyogenes (19615)

Рост, почернение вокруг колоний

Ингибирование роста (от частичного до полного)

Тиогликолевая среда с индикатором или без индикатора

Аэробная, 48 ч. (герметичная пробка/крышка), 35 °C

B. fragilis (25285)

S. aureus (25923)

Рост

Рост

Тиогликолевый бульон, обогащен витамином K и гемином

Аэробная, 48 ч. (при закрытой крышке), 35 °C

P. anaerobius (27337)

B. vulgatus (8482)

C. perfringens (13124)

Рост

Рост

Рост

Бульон с сердечно мозговой вытяжкой

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

E. coli (25922)

S. aureus (25923)

Рост

Триптозо-соевый бульон

Аэробная, 18 - 24 ч., 35 °C

E. coli (25922)

S. aureus (25923)

Рост

Ксилозо-лизин дезоксихолатный (XLD) агар

Аэробная, 24 ч., 35 °C

S. typhimurium (14028)

S. flexneri (12022)

E. faecalis (29212)

E. coli (25922)

Рост – красные колонии с черным центром

Рост: красные колонии

Частичное ингибирование роста

Ингибирование роста (от частичного до полного); колонии желто-красные

Шоколадный агар

CO2, 24 - 48 ч., 35 °C

N. gonorrhoeae (43069)

H. influenzae (10211)

Рост

Рост

Агар для кампилобактерий

Микроаэрофильная, капнофильная атмосфера, 24 - 48 ч., 42 °C

C. jejuni (33291)

E. coli (25922)

Рост

Ингибирование (частичное)

Селективные среды для N. gonorrhoeaeb

CO2, 24 - 48 ч., 35 °C

N. gonorrhoeae (43069 или 43070)

P. mirabilis (43071)

S. epidermidis (12228)

C. albicans (10231)

Рост

Частичное ингибирование на среде с триметопримом

Частичное ингибирование

Частичное ингибирование

Специальные среды для изоляции B. cepacia

Аэробная, 48 - 72 ч., 35 °C

B. cepacia (25416)

P. aeruginosa (27853)

Рост: колонии с красной зоной

Рост

Специальные среды для выделении B.pertussis

CO2, 48 - 72 ч., 35 °C

B. pertussis(12742) ,

Рост

ПРИЛОЖЕНИЕ 6. Расширенные требования к качеству основных питательных сред

Питательная среда Контрольные штаммы Время и температу ра инкубации Инокулюм Рост Примечание

Агар Байрда-Паркера

Bacillus subtilis ATCC 6633

48 ч., 35 ± 2 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность*)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC 8739 !

Подавляется

Селективность

S.aureus ATCC 25923

Продуктивность > 50%

Черные колонии, лецитиназа (+)

S.aureus ATCC 6538

Продуктивность > 50%

Черные колонии, лецитиназа (+)

S.epidermidis ATCC 12228

Продуктивность > 50%

Черные колонии, лецитиназа (+)

Кровяной агар

S.aureus ATCC 25923

24 - 48 ч., 35 ± 2 °С

10-100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность > 70%

β-гемолиз

S.aureus ATCC 6538

Продуктивность > 70%

β-гемолиз

E.faecalis ATCC 19433

Продуктивность > 70%

γ-гемолиз

E.coli ATCC 8739

Продуктивность > 70%

γ-гемолиз

S.pyogenes ATCC 19615 !

Продуктивность > 70%

β-гемолиз

S.pneumoniae ATCC 49619

Продуктивность > 70%

α-гемолиз

Основа бульона Болтона

Campylobacter jejuni ATCC 29428 !

44 - 48 ч. 41,5 ± 0,5 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Выраженный

–

E.coli ATCC 25922

Подавляется

Селективность

S.aureus ATCC 25923

Подавляется

Селективность

Агар с бриллиантовы м зеленым

E.faecalis ATCC 29212

24 - 48 ч. 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC ATCC 25922

Подавляется частично

Желто-зеленые колонии, на фоне желтой среды

S.typhimurium ATCC 14028 !

Продуктивность > 70%

Розовые (красные) колонии

Сердечно-мозговой агар

S.aureus ATCC 25923

24 - 48 ч. 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность > 70%

–

E.faecalis ATCC29212

Продуктивность > 70%

–

E.coli ATCC 8739

Продуктивность > 70%

–

S.pneumoniae ATCC 49619

Продуктивность > 70%

–

Цетримидный агар

E.coli ATCC 8739

24 ч. 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

S.aureus ATCC 6538

Подавляется

Селективность

P.aeruginosa ATCC 9027

Продуктивность > 50%

Желто-зеленые или зеленые колонии

Бролацин агар (СLED)

E.coli ATCC 25922

24 часа, 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность > 70%

Желтые матовые колонии

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 70%

Голубые колонии

S.aureus ATCC 25923

Продуктивность > 70%

Желтые матовые колонии

Proteus vulgaris ATCC 6380

Продуктивность > 70%

Голубые колонии без роения

Селективный агар для C.perfringens

Clostridiun perfringens ATCC 13124

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ в анаэробных условиях

Рост

Черные колонии. Н2S(+)

Основа колумбийского агара

S.aureus ATCC 6538

24 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ

Продуктивность > 70%

–

E.coli ATCC 8739

Продуктивность > 70%

–

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 70%

–

Агар Эндо

E.faecalis ATCC 29212

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC 8739

Продуктивность > 50%

Розово-красные колонии с зеленоватым металлическим блеском

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии без характерного блеска

Гектоен Энтерит агар

E.faecalis ATCC 29212

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Светло-розовые мелкие колонии

E.coli ATCC 25922

Подавляется

Селективность

P.mirabilis ATCC 43071

Продуктивность > 50%

Черные колонии, зелено-голубая среда

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 50%

Черные колонии, зелено-голубая среда

S.sonnei ATCC 25923

Продуктивность > 50%

Зеленые (голубые) колонии

Железо-сульфитный агар

E.coli ATCC 25922

24 - 48 ч., 55 ± 1,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность* < 50%

Отсутствие почернения

C.perfringens ATCC 13124

Продуктивность > 50%

Почернение среды

Агар Клиглера

S.sonnei ATCC 25931

18 - 24 ч., 35 ± 2,0 °С

Посев на скошенный агар и укол в столбик среды

Рост

Скос: N; Столбик: Кислота (+), Газ (–), Н2S (–), среда желтая

E.coli ATCC 25922

Рост

Скос: Кислота (); Столбик: Кислота (), Газ (+), Н2S (–), среда желтая

S.typhimurium ATCC 14028

Рост

Скос: N, почернение; Столбик: Кислота (), Газ (), Н2S (+)

Агар BCYE для легионелл

L.pneumophila ATCC 33152

3 - 10 дн., 35 ± 2,0 °С

150 - 300 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Рост

Серо-зеленые колонии

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228

Подавляется

Селективность

Лецитиновый бульон

S.aureus ATCC 6538

24 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ

Рост

–

S.typhimurium ATCC 14028

Рост

–

E.coli ATCC 25922

Рост

–

E.faecalis ATCC 29212

Рост

–

Бульон обогащения для листерий

E.coli ATCC 25922

48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

S.aureus ATCC 6538

Подавляется

Селективность

Listeria monocytogenes ATCC 19112

Рост

–

МакКонки агар (MacConkey Agar)

S.aureus ATCC 6538

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.faecalis ATCC 29212

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC 25922

Продуктивность > 50%

Темно-фиолетовые колонии с зоной преципитации

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии без зоны преципитации

Маннитол-солевой агар

E.coli ATCC 25922

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

S.aureus ATCC 6538

Продуктивность > 50%

Колонии белые, вокруг колоний среда желтая (маннит +)

S.epidermidis ATCC 12228

Продуктивность > 50%

Колонии бледно-розовые, вокруг колоний среда красная (маннит –)

Агар MRS (MRS Agar)

E.coli ATCC 25922

48 ч. – 3 дня, 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000-10000 КОЕ (селективность)

Частичное подавление

Инкубирование при 5% CO2

Lactobacillus acidophilus ATCC 4536

Продуктивность > 50%

Инкубирование при 5% CO2

Агар / бульон Мюллера-Хинтона

S.aureus ATCC 6538

18 - 24 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Рост

–

E.coli ATCC 25922

Рост

–

P.aeruginosa ATCC 27853

Рост

–

E.faecalis ATCC 29212

Рост

–

Питательный агар/бульон

P.aeruginosa ATCC 27853

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность > 70%

–

E.faecalis ATCC 29212

Продуктивность > 70%

–

E.coli ATCC 25922

Продуктивность > 70%

–

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 70%

–

Y.enterocolitica ATCC 9610

Продуктивность > 70%

–

Основа агара Oxford для листерий

S.aureus ATCC 25923

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КО (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC 25922

Подавляется

Селективность

L.monocytogenes ATCC 19115

Продуктивность > 50%

Эскулин (+), почернение среды

Палкам агар для листерий

S.aureus ATCC 25923

24 - 48 ч., 35 + 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавляется

Селективность

E.coli ATCC 25922

Подавляется

Селективность

L.monocytogenes ATCC 19115 !

Продуктивность > 50%

Эскулин (+), почернение среды

Агар/бульон Престона для кампилобактерий

Campylobacter jejuni ATCC 29428

18 - 24 ч., 42 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Рост

В микроаэрофильн ых условиях

Escherichia coli ATCC 25922

Подавляется

В микроаэрофильн ых условиях

Бульон Раппопорта-Вассилиадиса

E.faecalis ATCC 29212

24 часа, 41 ± 0,5 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Полное подавление

Восстановление на TSA

E.coli ATCC 25922

Частичное подавление

Восстановление на TSA

S.typhimurium ATCC 14028

Рост

Восстановление на XLD

Агар для сальмонелл и шигелл (SS агар)

E.faecalis 29212 ATCC

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Частичное подавление

48 ч (скудный рост)

E.coli ATCC 25922

Полное подавление

Селективность

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии с черным центром Н2S (+)

S.flexneri ATCC 12022

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии с прозрачным центром Н2S ( -)

Селенитовый бульон

E.faecalis ATCC 29212

24 ч., 35 ± 2,0 °С

Инокуляция из смешанной культуры

Полное подавление

Восстановление на TSA

E.coli ATCC 8739 !

Полное подавление

Восстановление на TSA

S.typhimurium ATCC 14028

Хороший рост

Восстановление на XLD

P.aeruginosa ATCC 27853

Подавление или скудный рост

Восстановление на XLD

Цитратный агар Симмонса

P.aeruginosa ATCC 27853

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

Инокуляция чистой культуры на поверхность агара

Рост

Синяя среда

E.aerogenes ATCC 13048

Рост

Синяя среда

E.coli ATCC 25922 !

Подавление роста

Зеленая среда

S.flexneri ATCC 12022

Подавление роста

Зеленая среда

S.typhimurium ATCC 14028

Рост

Синяя среда

Тиогликолевы й бульон

S.aureus ATCC 6538

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Рост

–

B.subtilis ATCC 6633

Рост

–

P.aeruginosa ATCC 9027

Рост

–

E.coli ATCC 8739

Рост

–

C.sporogenes ATCC 19404

Рост

Анаэробные условия

C.albicans ATCC 10231

Рост

48 ч.

Триптон-соевый агар/бульон

S.aureus ATCC 6538

24 - 48 ч., до 6 дней, 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)

Продуктивность > 70%

–

E.coli ATCC 8739

Продуктивность > 70%

–

Ксилоза-лизин-дезоксихолат агар (XLD)

E.faecalis ATCC 29212

24 - 48 ч., 35 ± 2,0 °С

10 - 100 КОЕ (продуктивность)/1000 - 10000 КОЕ (селективность)

Подавление

Селективность

E.coli ATCC 8739

Частичное подавление

Селективность

P.mirabilis ATCC 43071

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии с черный центром Н2S (+)

S.typhimurium ATCC 14028

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии с черным центром Н2S (+)

S.flexneri ATCC 12022

Продуктивность > 50%

Бесцветные колонии с прозрачным центром Н2S (-)

* Примечание. Продуктивность - количество клеток, давших видимый рост, выраженный в %.

ПРИЛОЖЕНИЕ 7. Освобождённые и неосвобождённые питательные среды.

Стабильность качественных характеристик разных питательных сред неодинакова. Данные американских лабораторий по этому вопросу, обобщенные в Национальном стандарте NCCLS по контролю качества коммерческих готовых питательных сред M22-A3 [13], стали основой для деления питательных сред на 2 категории — освобожденные и неосвобожденные. Процедура их контроля различается:

  • Освобожденные питательные среды - коммерческие среды, предназначенные для поддержания соответствующих ростовых свойств с минимальными отклонениями и требующие минимального контроля качества (проверки сертификата качества, соответствия упаковки, а также заявленных в сертификате характеристик, определяемых визуально). Отнесение сред к освобожденным не исключает возможности проведения дополнительных тестов контроля качества (вплоть до осуществления всего комплекса проверок, предназначенного для неосвобожденных сред). Особенно тщательно следует проверять среды для привередливых микроорганизмов (анаэробов, бордетелл, буркхолдерий, кампилобактерий, легионелл, геликобактерий, нейссерий).

  • Неосвобожденные питательные среды – коммерческие среды, часто дающие отклонения свойств от регламентированных, а также все среды, приготовленные самим потребителем. Неосвобожденные среды требуют проведения лабораториями наиболее полного контроля качества, включающего в зависимости от их назначения подтверждение удовлетворительных ростовых, селективных и/или дифференциальных свойств с помощью контрольных штаммов микроорганизмов.

Основной перечень освобожденных и неосвобожденных питательных сред

Питательные среды Освобожденная Неосвобожденная*

Среды общего назначения

Кровяной агар

Шоколадный агар

Тиогликолевый бульон

Уреазный агар

Питательный бульон

Кровяные среды

Бульон на сердечно-мозговой вытяжке

Двухфазная среда для гемокультур

Бульона с тиолом

Триптиказо-соевый бульон

Пептонный бульон

Среды для грамположительных бактерий

Колумбийский CNA агар

Селективный агар для энтерококков с азидом натрия и без него

LIM бульон

Маннитол-солевой агар

Фенил-этилспиртовой агар

Селективный агар для стрептококков группы А

Кровяной агар с сульфаметоксазолом/триметопримом

Бульон для фекальных энтерококков (стрептококков)

Бульон Тода-Хевитта

Дезоксихолятный бульон

Бульон транс-вагинальный

Шоколадный агар с перидоксалем

Среды для грамотрицательных бактерий

Агар с цефсулодином, иргазаном, новобиоцином

Цитратный агар

Бролацин агар (CLED)

Агар Левина

Бульоны для грамотрицательных бактерий

Гектоен агар

Агар МакКонки

Агар для сальмонелл и шигелл

Селенитовый бульон

Тиосульфат - цитратный желчно-солевой сахарный агар

Трехсахарный агар с железом

Триптиказо-соевый кровяной агар с ампициллином

Агар Макконки с сорбитолом

Шоколадный агар с бацитрацином

Среды для Neisseria gonorrhoeae

Ксилозо-лизин-декарбокосилазный агар

Агар Тейера-Мартина

модифицированный

Гонококковый агар

Агар Мартина-Левиса модифицированный

Шоколадный агар с IsoVitaleX®

Агар Нью Йорк ситиc

Среды для Bordetella pertussis

Агар Реган-Лов

Агар Борде-Жангу

Среды для легионелл

Селективный агар для легионелл

Селективный агар для легионелл с глицином, полимиксином В, ванкомицином и красителями

Среды для буркхолдерий

Агар для В.cepacia

Оксидативно-ферментативный лактозный агар с полимиксином В и бацитрацином

Среды для кампилобактерий

Угольный селективный агар с цефаперазоном, ванкомицином и циклогексимидом

Кампилобактериозный агар с кровью, цефаперазоном, ванкомицином и амфотерицином В (среда Блазера)

Среды для облигатно-анаэробных бактерий

Кровяной агар для анаэробов

Агар для анаэробов с фенилэтилалкоголем

Агар с желчью и эскулином для бактероидов

Агар для бруцелл

Агар для бруцелл с гемином и витамином K

Агар для бруцелл с кровью, канамицином и ванкомицином

Агар для гемолитических анаэробов с кровью, канамицином и ванкомицином

Агар для анаэробов с 5% лизированной бараньей крови, канамицином и ванкомицином

Желточный агар модифицированный

Агар с лизированной кровью и канамицином

Агар CDC для анаэробов с 5% бараньей крови и фенилэтилалкоголем

Среды для микобактерий

Двухфазная среда во флаконах для быстрого теста на кислотоустойчивость

Бульон Миддлбрука 7Н9

Среда Ловенштейна-Йенсена

Агар Миддлбрука

Бульон во флаконах для автоматического теста на кислотоустойчивость

Агар Миддлбрука 7H10

Агар Миддлбрука 7H11

Агар Митчинсона

Среда Петраньяни

Среды для грибов

Агар из кукурузного крахмала

Ингибирующий агар для грибов

Ингибирующий агар для грибов с гентамицином

Агар из соевого пептона с циклогексимидом и хлорамфениколом без индикатора

Картофельно-декстрозный агар

Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей крови/хлорамфениколом и гентамицином

Агар Сабуро с глюкозой

Агар Сабуро с глюкозой, хлорамфениколом и гентамицином

Агар из кукурузного крахмала с твином

Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей кровью, хлорамфениколом и хлоргексидином

Висмут-сульфитный агар с глюкозой, глицином и дрожжевым экстрактом

Агар на сердечно-мозговой вытяжке с 5% бараньей крови, пенициллином и стрептомицином

Среда для дерматофитов

* Примечание. К числу неосвобожденных сред также относятся хромогенные и флюорогенные питательные среды.

ПРИЛОЖЕНИЕ 8. Выполнение стандартной технологии с помощью калиброванной бактериологической петли.

При проверке ростовых качеств плотных неселективных сред из стандартизированной взвеси контрольного штамма готовят рабочее разведение (1:100) на стерильном физиологическом растворе. Высевают одноразовой бактериологической петлей штриховым способом 10 мкл разведения на проверяемую среду в чашке Петри (посевная доза - 103-104 КОЕ/чашку).

Для контроля ростовых качеств плотных скошенных сред в пробирках высевают 10 мкл/пробирку стандартизированного разведения контрольного штамма.

При тестировании ростовых качеств жидких сред в пробирках разводят стандартизированное разведение контрольного штамма 1:10000 и вносят 10 мкл полученной взвеси в пробирку со средой (посевная доза 100 КОЕ/пробирку).

Для контроля ингибирующих свойств селективных сред чашки Петри с последними засевают штриховым способом калиброванными одноразовыми бактериологическими петлями 1 мкл стандартизированных разведений каждого контрольного штамма (посевная доза каждого - 104 – 105 КОЕ/чашку).

Контроль качества питательных сред контрольными штаммами дрожжей принципиально не отличается от аналогичных процедур, проводимых с контрольными штаммами бактерий. Колонии плесеней частично переносят на проверяемые питательные среды. При работе с культурами дерматофитов рекомендуется пользоваться следующей методикой. Переносят бактериологической петлей несколько колоний во флакон со стерильным физиологическим раствором, содержащим 0,2% бычьего сывороточного альбумина, 0,002% твина-80 и 8 - 12 стерильных стеклянных бус. После 10-минутного энергичного встряхивания и 3-часового отстаивания надосадочную жидкость переносят в стерильный флакон и доводят титр бактерий в нем до стандартизированного (соответствует 0,5 ед. по стандарту МакФарланда).

Оценку дифференцирующих свойств идентификационных питательных сред проводят описанным выше для селективных сред методом. При отсутствии формирования колоний хотя бы одним из контрольных штаммов процедуру повторяют, высевая стандартизированные взвеси таких штаммов в дозе, превышающую в 10 раз первоначальную.

Результаты испытаний считают удовлетворительными, если:

  • неселективные среды обеспечивают рост использованных контрольных штаммов, а те формируют в течение регламентированного срока (быстро растущие бактерии - за 24 - 48 ч., дрожжи – за 72 ч., плесени – за 3 - 5 дн., медленно растущие – за 1 - 3 нед. и более) колонии характерной морфологии и достаточного размера;

  • селективная среда частично или полностью ингибируют рост одних и поддерживает рост других контрольных штаммов в соответствии с ожидаемыми результатами, а растущие на ней микроорганизмы формируют колонии определенной величины с типичной морфологией в течение регламентированного выше срока (см. предыдущий пункт) колонии характерной морфологии и достаточного размера;

  • идентификационные среды обеспечивают дифференциацию использованных контрольных штаммов микроорганизмов (по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний или другим признакам).

ПРИЛОЖЕНИЕ 9. Приготовление инокулюма для контроля качества питательных сред.

Из рабочей культуры, подготовленной из субкультуры референтного образца микроорганизма, хранящегося в коллекции лаборатории, готовят рабочие разведения путём десятикратных разведений исходного инокулюма.

Исходный инокулюм готовят по имеющемуся в лаборатории стандарту мутности или по спектрофотометру (нефелометру) с концентрацией 108 или 109 КОЕ/мл

Характеристика стандартов мутности.

  1. Отраслевой стандарт мутности согласно ОСО-42-28-85П производства ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича.
    Мутность стандарта, равная 10 единицам, эквивалентна концентрации клеток в 1 мл: 0,93х109 КОЕ/мл микробов кишечной палочки (микроорганизмов по размерам, соответствующим размерам кишечной палочки), 1,7 х 109 КОЕ/мл для Brucella spp., 5 х 109 КОЕ/мл для Franciella spp.

  2. Стандарт МакФарланда (McFarland).
    Коммерческие стандарты МакФарланда содержат латексные частицы, суспендированные в специальном буферном растворе в количестве, обеспечивающем прохождение волны света длиной 600 - 650 nm

Стандарт МакФарланда Количество микробных клеток при плотности инокулюма (х 108клеток)

0,5

1,5

1,0

3,0

2,0

6,0

3,0

9,0

4.0

12,0

Приготовление соответствующего разведения.

По имеющемуся в лаборатории стандарту мутности готовят исходное разведение контрольного штамма и далее десятикратными разведениями готовят соответствующий инокулюм по схеме таблицы 1.

№ пробирки Кол-во физ. р-ра Объем вносимой суспензии Кол-во микробных клеток в 1 мл взвеси Кол-во микробных леток в 0,1 мл взвеси

1

4,5 мл

0,5 мл из исходной взвеси 108 КОЕ/мл

107

1000000

2

4,5 мл

0,5 мл из пробирки 1

106

100000

3

4,5 мл

0,5 мл из пробирки 2

105

10000

4

4,5 мл

0,5 мл из пробирки 3

104

1000

5

4,5 мл

0,5 мл из пробирки 4

103

100

6

4,5 мл

0,5 мл из пробирки 5

102

10

Примечание:

  1. Исходная взвесь микроорганизмов приготовлена по стандарту МакФарланд 0,5.

  2. В случае использования стандарта по ОСО-42-28-85П исходная взвесь готовится с концентрацией микроорганизмов 109 КОЕ/мл и в схему разведений вводится дополнительное разведение до концентрации 108 КОЕ/мл. Затем микробная взвесь титруется по изложенной схеме.

  3. В лаборатории могут использоваться другие объемы для титрования. Например, 0,9 мл физ. р-ра и 0,1 мл вносимой суспензии. Титрование в таких объемах требует работы с дозирующими пипетками соответствующих объёмов.

  4. Точность приготовленного инокулюма зависит от точности титрования. На каждое разведение следует менять наконечник пипетки или пипетку.

БИБЛИОГРАФИЯ

  1. ГОСТ Р ЕН 12322-2010 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Питательные среды для микробиологии. Критерии функциональных характеристик питательных сред.

  2. ISO/TS 11133-2:2003. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство по подготовке и приготовлению культуральных сред. Часть 2. Практическое руководство по тестированию эффективности культуральных сред.

  3. ГОСТ Р ИСО 15189-2009 Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности.

  4. ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003). Лаборатории медицинские. Требования безопасности.

  5. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и защиты человека от 17.03.2008 № 88. Приложение №4.

  6. МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред: Методические указания. -М: ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора, 2008, 67 с.

  7. МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, 2004.

  8. Шепелин А.П., Дятлов И.А. Современное состояние и тенденции в нормативно-правовом регулировании производства, реализации и применения питательных сред. Аналитические материалы. – Протвино: А-ПРИНТ ЗАО, 2012, 48 с.

  9. Поляк М.С. Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии С-Пб, 2008. С.351.

  10. Михайлова В.С., Гавристова И.А., Блинкова А.П. Правила внутрилабораторного контроля качества питательных сред. Клиническая лабораторная аналитика том IV. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории клинической микробиологии. Москва, Агат Мед 2003, 232-254 с.

  11. Михайлова В.С., Поляк М.С., Суханова С.М. О роли внутрилабораторного контроля качества в стандартизации питательных сред для микробиологических исследований в клинико-диагностических лабораториях. Проблемы стандартизации в здравоохранении, 5-6, стр. 8-15, 2009.

  12. Михайлова В.С., Зубков М.Н. Культивирование бактерий. Методики клинических лабораторных исследований. Том III. Клиническая микробиология. –М.:Лабора, 2009.

  13. NCCLS National consensus standard. Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard M22-A3, v., 24, 3d Ed. (Replaces M22-A2), 2004.