ГОСТ ISO 6222-2018. Межгосударственный стандарт. Качество воды. Подсчет культивируемых микроорганизмов. Подсчет колоний при посеве в питательную агаризованную среду (введен в действие Приказом Росстандарта от 23.09.2020 N 672-ст)

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

За принятие проголосовали:

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 "Микробиология" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных и европейских стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета культивируемых микроорганизмов в воде путем подсчета колоний, сформированных в питательной агаризованной среде после аэробной инкубации при температурах 36 °C и 22 °C.

Настоящий стандарт применяется при оценке эффективности водоочистных процессов и для контроля воды всех типов. Он, в частности, применяется при исследовании воды, предназначенной для потребления человеком, в том числе упакованной, и природных минеральных вод.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

EN ISO 5667-3, Water quality - Sampling - Part 3: Preservation and handling of water samples (ISO 5667-3:1994) (Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Консервация и обработка проб воды)

EN 25667-2 <1>, Water quality - Sampling - Part 2: Guidance on sampling techniques (ISO 5667-2:1991) (Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по составлению методик выборочного контроля)

<1> Заменен на EN ISO 5667-1:2006.

ISO 6887 <2>, Microbiology - General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examinations (Микробиология. Общее руководство по приготовлению разбавлений для микробиологического исследования)

<2> Действует ISO 6887-1:2017.

ISO 8199, Water quality - General guide to the enumeration of micro-organisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 культивируемые микроорганизмы (culturable micro-organisms): Все аэробные бактерии, дрожжи и плесневые грибы, способные формировать колонии в среде, указанной в условиях испытания, описанных в настоящем стандарте.

Проведение глубинного посева определенного количества образца или его разведения в указанную питательную среду на чашках Петри. Инкубация одного комплекта чашек при температуре 36 °C в течение 44 ч и другого комплекта при температуре 22 °C в течение 68 ч.

Подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ) на миллилитр (мл) образца, исходя из числа колоний, сформированных в питательной среде.

Применяют стандартное лабораторное оборудование для микробиологических исследований, а также следующее:

5.1 Оборудование для стерилизации паром (автоклав).

5.2 Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (36 +/- 2) °C.

5.3 Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (22 +/- 2) °C.

5.4 Стеклянные или пластмассовые чашки Петри с диаметром 90 или 100 мм.

5.5 Водяная баня, обеспечивающая поддержание температуры (45 +/- 1) °C.

5.6 Оборудование для подсчета колоний методом подсвечивания на темном фоне.

Отбор пробы воды проводят в соответствии с требованиями к отбору проб, обработке и сохранению, установленными в EN 25667-2 и EN ISO 5667-3. Исследуемую воду, включая природную минеральную воду, доставленную в закрытой упаковке, допустимо хранить не более 12 ч после розлива при температуре хранения (5 +/- 3) °C в течение всего периода.

7.1. Основные материалы

Для подготовки сред используют ингредиенты стабильного качества, в том числе химические реактивы аналитической степени чистоты. Допустимо использовать эквивалентную готовую сухую среду в соответствии с инструкциями изготовителя. При приготовлении сред используют дистиллированную в стеклянном сосуде или деионизированную воду степени чистоты 3, подготовленную в соответствии с EN ISO 3696, не содержащую веществ, которые могут ингибировать рост микроорганизмов в условиях испытания.

Примечание - Использование химических реактивов других степеней чистоты допустимо при условии получения таких же результатов испытания.

7.2 Разбавитель

Для разбавлений применяют пептонный разбавитель, соответствующий требованиям, установленным в ISO 8199.

7.3 Агар с дрожжевым экстрактом

Ингредиенты или готовую сухую среду растворяют в воде при нагревании. При необходимости pH корректируют таким образом, чтобы он был равен после стерилизации (7,2 +/- 0,2) pH при температуре 25 °C.

Разливают полученную среду в пробирки объемом от 15 до 20 мл, бутылки или другие емкости. Для хранения больших объемов применяют емкости объемом до 500 мл. Стерилизуют в автоклаве (см. 5.1) при температуре (121 +/- 3) °C в течение (15 +/- 1) мин.

Перед применением среду расплавляют, охлаждают до температуры (45 +/- 1) °C и поддерживают ее посредством водяной бани (см. 5.5). Среду рекомендуется хранить не более 4 ч при температуре 45 °C, после чего ее утилизируют.

8.1 Подготовка и посев

Пробу готовят, разводят и инокулируют в соответствии с требованиями ISO 8199, EN ISO 5667-3 и ISO 6887.

Применяют метод глубинного посева (см. ISO 8199). Из каждой пробы (или ее разведения) делают посев не более 2 мл в чашку Петри, добавляют 15 - 20 мл расплавленной среды (см. 7.3) и тщательно перемешивают путем плавного вращения. Дают среде застыть. Промежуток времени между внесением испытуемой пробы (или ее разведением) и моментом добавления расплавленной среды не должен превышать 15 мин. Посев проводят по меньшей мере в одну чашку для инкубации при каждом температурном режиме.

8.2 Инкубация и исследование

Переворачивают чашки и инкубируют один комплект при температуре (36 +/- 2) °C в течение (44 +/- 4) ч, другой комплект - при температуре (22 +/- 2) °C в течение (68 +/- 4) ч. Исследуют чашки, как только они будут извлечены из инкубаторов. Если это невозможно, их хранят при температуре (5 +/- 3) °C и проводят исследование в течение 48 ч. В чашках со сплошным ростом микроорганизмов подсчет не производят.

8.3 Подсчет колоний

Для каждого температурного режима инкубации и в соответствии с процедурами, описанными в ISO 8199, подсчитывают колонии, присутствующие на каждой чашке, и вычисляют предполагаемое количество колониеобразующих единиц, присутствующих в 1 мл образца.

Результаты испытаний выражаются в виде количества колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) в миллилитре образца для каждого температурного режима инкубации. Если в чашках, инокулированных испытательными объемами неразбавленного образца, колонии отсутствуют, то записывают результат как "не обнаружено в одном миллилитре". Если в чашках, инокулированных самым большим разведением, насчитывают более 300 колоний, результат записывают как "более 300" или как приближенное количество.

Протокол должен содержать ссылку на настоящий стандарт и предоставлять всю соответствующую информацию, включая:

СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ И ЕВРОПЕЙСКИХ СТАНДАРТОВ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫМ СТАНДАРТАМ

Таблица ДА.1

<1> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия", идентичный ISO 3696:1987.