Контроль качества и стандартизация лекарственных средств: учебно-методическое пособие по производственной практике

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки контроля качества ЛС по разделам «Описание», «Растворимость», «Прозрачность» и «Цветность» раствора, руководствуясь соответствующими статьями ГФ.

Задачи. Необходимо освоить следующие производственные навыки.

1. Описание. Фармакопейный анализ начинается с органолептической оценки образца. Анализ по разделу «Описание» проводят, руководствуясь ГФ XII ОФС.42-0031-07 «Правила пользования фармакопейными статьями», ГФ PK ОФС.1 «Общие замечания».

Общие положения - приводятся методики и определения терминов, используемых в разделе «Описание» ФС.

Задание 1. Изучите ФС ГФ на глюкозу и ГФ XIII ОФС.1.1.0001.15 «Правила пользования фармакопейными статьями», ГФ PK ОФС.1 «Общие замечания».

Проведите анализ образца субстанции глюкозы по разделу «Описание». Письменно сделайте вывод о соответствии полученных данных анализируемого образца требованиям ФС «Глюкоза» по разделу «Описание».

2. Растворимость. Растворимость субстанций в ФС обычно выражается в условных терминах («очень легко растворим», «растворим»), принятых по ГФ XIII ГФ РК и обозначающих, в каком объеме указанного в ФС растворителя растворяется одна весовая часть испытуемого вещества. Для характеристики растворимости вещества в некоторых случаях указано конкретное соотношение вещества и растворителя. Методика определения растворимости приведена в ГФ XIII ОФС.1.2.1.0005.15 «Растворимость» и в ГФ PK ОФС.1.3 «Растворимость».

Задание 2. Проведите анализ образца субстанции глюкозы по разделу «Растворимость», руководствуясь требованиями ФС на глюкозу и ГФ XIII ОФС.1.2.1.0005.15 «Растворимость»; ГФ PK ОФС.1.3 «Растворимость». Письменно сделайте вывод о соответствии полученных данных анализируемого образца требованиям ФС «Глюкоза» по разделу «Растворимость».

3. Прозрачность растворов. Прозрачность определяется эталонным методом по методике, описанной в ГФ ХШ ОФС.1.2.1.0007.15 «Прозрачность и степень мутности жидкостей»; ГФ PK ОФС.2.2.1 «Определение прозрачности и степени опалесценции жидкостей».

Задание 3. Проанализируйте требования ФС на глюкозу по разделу «Прозрачность». Укажите, что следует использовать в качестве эталона сравнения в данном случае. Проведите испытание и запишите вывод о соответствии полученных данных анализируемого образца субстанции требованиям ГФ разделу «Прозрачность».

4. Цветность, или степень окраски растворов. Так же как и прозрачность, цветность растворов определяют эталонным методом. Состав эталонных растворов и методики определения цветности представлены в ГФ XIII ОФС.1.2.1.0006.15 «Степень окраски жидкостей»; ГФ PK ОФС.2.2.2 «Определение степени окраски жидкостей».

Задание 4. Проанализируйте требования ФС на глюкозу по показателю «Цветность». Укажите, что нужно использовать в качестве эталона сравнения в данном случае.

Проведите испытание и запишите вывод о соответствии полученных данных анализируемого образца субстанции требованиям ГФ по разделу «Цветность».

Задание 5. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Формула: C₆H₁₂О₆ ? H₂О. M.м. 198,17.

Описание. Бесцветные кристаллы или белый мелкокристаллический порошок без запаха, сладкого вкуса.

Растворимость. Растворим в 1,5 частях воды, трудно растворим в 95% этаноле, практически нерастворим в эфире диэтиловом.

Подлинность. К раствору 0,2 г препарата в 5 мл воды прибавляют 10 мл реактива Фелинга и нагревают до кипения; выпадает кирпично-красный осадок.

Удельное вращение. От +51,5 до +53° (10% водный раствор). Препарат предварительно сушат при 100-105 °С до постоянной массы. Измерение угла вращения проводят после прибавления к раствору препарата 2 капель раствора аммиака.

Прозрачность и цветность раствора. В 25 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды растворяют 5 г препарата. Полученный раствор должен быть прозрачным и бесцветным.

Кислотность. Полученный раствор разводят свежепрокипяченной и охлажденной водой до объема 100 мл. При прибавлении к 10 мл этого раствора нескольких капель раствора фенолфталеина и 0,2 мл 0,01 н раствора натрия гидроксида^[1] должно появиться розовое окрашивание.

Хлориды. Тот же раствор объемом 2 мл, разбавленный водой до 10 мл, должен выдерживать испытание на хлориды (не более 0,02% в препарате).

Сульфаты. Тот же раствор объемом 10 мл должен выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,02% в препарате).

Кальций. Тот же раствор объемом 10 мл не должен давать реакцию на кальций.

Барий. К тому же раствору объемом 10 мл прибавляют 0,5 мл разведенной кислоты хлористоводородной^[2] и 0,5 мл разведенной серной кислоты; раствор не должен изменяться в течение 15 мин.

Декстрин. В 3 мл воды растворяют при нагревании 2 г препарата. После прибавления к 1 мл этого раствора 3 мл этанола раствор должен оставаться прозрачным.

Потеря массы при высушивании. Точную навеску 0,5 г препарата сушат при 100-105 °C до постоянной массы. Потеря массы не должна превышать 10%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г препарата не может превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,0005% в препарате).

Мышьяк. Препарат в количестве 0,5 г не должен давать реакции на мышьяк.

Хранение. В хорошо укупоренной таре.

Формула: С₆Н₁₂О₆ ? Н₂О. М.м. 198,2.

Глюкозы моногидрат содержит (+)-0-глюкопиранозы моногидрат.

Описание. Кристаллический порошок белого цвета, сладкого вкуса.

Растворимость. Легкорастворим в воде, умеренно растворим в 96% этаноле.

Испытуемый раствор. 10 мг субстанции растворяют в смеси вода Р - метанол Р (2:3) и доводят той же смесью растворителей до объемa 20 мл.

Раствор сравнения (а). 10 мг СО ГФ PK глюкозы растворяют в смеси вода Р - метонол Р (2:3) и доводят той же смесью растворителей до объема 20 мл.

Раствор сравнения (b). 10 мг СО ГФ PK фруктозы, 10 мг СО ГФ PK глюкозы, 10 мг СО ГФ PK лaктозы и 10 мг СО ГФ PK сахарозы растворяют в смеси вода Р - метанол Р (2:3) и доводят той же смесью растворителей до объема 20 мл.

На линию старта хроматографической пластинки наносят 2 мкл испытуемого раствора, 2 мкл раствора сравнения (а), 2 мкл раствора сравнения (b) и тщательно сушат. Пластинку помещают в хроматографическую камеру с системой растворителей вода Р - метанол Р - кислота уксусная^[3] безводная Р- этиленхлорид Р (10:15:25:50). Растворители должны быть измерены точно, так как небольшой избыток воды вызывает помутнение. Когда фронт растворителей пройдет 15 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры и сушат в потоке теплого воздуха. Немедленно повторяют хроматографирование после обновления системы растворителей. Пластинку вынимают, сушат в потоке теплого воздуха, равномерно опрыскивают раствором 0,5 г тимола Р в смеси 5 мл кислоты серной Р и 95 мл 96% спирта этилового Р, нагревают при температуре 130 °С в течение 10 мин. На хроматограмме испытуемого раствора должно обнаруживаться основное пятно на уровне основного пятна на хроматограмме раствора сравнения (а), соответствующее ему по цвету и размеру. Результаты анализа считаются достоверными, если на хроматограмме раствора сравнения (b) получают 4 четко разделенных пятна.

С. 0,1 г субстанции растворяют в 10 мл воды Р, добавляют 3 мл раствора меди тартрaта Р и нагревают; образуется осадок красного цвета.

Раствор S 100 г субстанции растворяют в воде дистиллированной Р и доводят тем же растворителем до объема 100 мл.

Прозрачность раствора (2.2.1). 100 г субстанции растворяют в 15 мл воды Р. Раствор должен быть прозрачным.

Цветность раствора (2.2.2, метод II). Окраска раствора, приготовленного для испытания «Прозрачность растворов», должна быть не интенсивнее окраски раствора сравнения BY₇.

Запах раствора (2.3.4). Раствор, приготовленный для испытания «Прозрачность раствора», должен быть без запаха.

Кислотность или щелочность. 6,0 г субстанции растворяют в 25 мл воды, свободной от углерода диоксида Р, и прибавляют 0,3 мл раствора фенолфталеина Р; раствор должен быть бесцветным.

Окраска раствора должна измениться до розового цвета при добавлении не более 0,15 мл 0,1 M раствора натрия гидроксида.

Удельное оптическое вращение (2.2.7). От +52,5 до +5,.3°. Навеску 10,0 г субстанции растворяют в 80 мл воды Р, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака разбавленного P1, оставляют на 30 мин и доводят водой Р до объема 100,0 мл. Удельное оптическое вращение определяют в пересчете на безводное вещество.

Посторонние сахара, растворимый крахмал, декстрины. 1,0 г субстанции растворяют при кипячении в 30 мл спирта Р (90% об/об) и охлаждают; раствор не должен изменяться.

Сульфиты. Не более 15 ? 10^-4 % (15 млн^-1 SO₂).

Испытуемый раствор. 5,0 г субстанции растворяют в 40 мл воды Р, прибавляют 2,0 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводят водой Р до объема 50,0 мл. К 10,0 мл полученного раствора прибавляют 1 мл раствора (310 г/л) кислоты хлористоводородной Р, 2,0 мл раствора фуксина обесцвеченного P1 и 2,0 мл 0,5% (об/об) раствора формальдегида Р. Оставляют на 30 мин и измеряют оптическую плотность (2.2.25) в максимуме при длине волны 583 нм.

Раствор сравнения. 76 мг натрия метабисульфита Р растворяют в воде Р, доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл. Затем 5 мл полученного раствора доводят водой Р до объема 100,0 мл. К 3,0 мл полученного раствора прибавляют 4,0 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводят водой Р до объема 100,0 мл. К 10,0 мл полученного раствора немедленно добавляют 1 мл раствора (310 г/л) кислоты хлористоводородной Р, 2,0 мл раствора фуксина обесцвеченного P1 и 2,0 мл 0,5% (об/об) раствора формальдегида Р. Оставляют на 30 мин и измеряют оптическую плотность (2.2.25) в максимуме при длине волны 583 нм. В качестве компенсационного раствора для обоих измерений используют раствор, приготовленный аналогично раствору сравнения с 10 мл воды Р. Оставляют его на 30 мин и измеряют оптическую плотность (2.2.25) в максимуме при длине волны 583 нм.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать оптическую плотность раствора сравнения.

Хлориды (2.4.4). Не более 125 ? 10^-4 % (125 млн^-1). 4 мл раствора S доводят водой Р до объема 15 мл. Раствор должен выдерживать испытание на хлориды.

Сульфаты (2.4.13). Не более 0,02% (200 млн^-1). 7,5 мл раствора S доводят водой дистиллированной Р до объема 15 мл. Раствор должен выдерживать испытание на сульфаты.

Мышьяк (2.4.2, метод А). Не более 10^-4 % (1 млн^-1). 1,0 г субстанции должен выдерживать испытание на мышьяк.

Барий К 10 мл раствора S прибавляют 1 мл кислоты серной разбавленной Р. При немедленном рассматривании и рассматривании через 1 ч любая опалесценция полученного раствора должна быть не интенсивнее опалесценции смеси 1 мл воды дистиллированной Р и 10 мл раствора S.

Кальций (2.4.3). Не более 0,02% (200 млн^-1). 5 мл раствора S доводят водой дистиллированной Р до объема 15 мл. Раствор должен выдерживать испытание на кальций.

Свинец в сахарах (2.4.10). Не более 5 ? 10^-5 % (0,5 млн^-1). Субстанция должна выдерживать требования испытания «Свинец в сахарах».

Вода (2.5.12). От 7 до 9,5%. Определение проводят из 0,50 г субстанции полумикрометодом.

Сульфатная зола (2.4.14). Не более 0,1%. 5,0 г субстанции растворяют в 5 мл воды Р, прибавляют 2 мл кислоты серной Р, упаривают досуха на водяной бане и прокаливают до постоянной массы. При необходимости повторяют нагревание с кислотой серной Р.

Пирогены (2.6.8). Если субстанция предназначена для производства препаратов парентерального применения в больших объемах, уполномоченные компетентные органы могут требовать, чтобы субстанция выдерживала испытание на пирогены. Вводят на 1 кг массы кролика 10 мл раствора, содержащего 55 мг субстанции, в 1 мл воды для инъекций Р.

Маркировка. При необходимости указывают, что субстанция апирогенна.

Настоящая общая фармакопейная статья (ОФС) определяет правила применения терминов, понятий и методов, используемых в ФС.

Описание. Указывают характеристики физического состояния и цвет ЛС; если необходимо, приводят информацию о запахе и гигроскопичности.

Твердые субстанции могут быть крупнокристаллическими, кристаллическими, мелкокристаллическими и аморфными.

Крупнокристаллический порошок. Не более 40% частиц порошка должно быть размером менее 0,4 мм.

Кристаллический порошок. Не менее 95% частиц порошка должно быть размером менее 0,4 мм и не более 40% - размером менее 0,2 мм.

Мелкокристаллический порошок. Не менее 95% частиц порошка должно быть размером менее 0,2 мм.

Аморфный порошок - не имеющий признаков кристаллического строения.

Характеристики кристалличности и гигроскопичности в описании приводятся для информации и испытанию не подлежат. При необходимости нормирования величины частиц в нормативной документации приводят специальный раздел.

Субстанции жидкой консистенции могут быть охарактеризованы такими терминами, как вязкие, подвижные, легколетучие и т.д.

Газообразные субстанции характеризуют по цвету и запаху.

Цвет ЛС следует характеризовать названиями: белый, синий, зеленый, желтый, оранжевый, красный и т.д. При оттеночных цветах на первом месте указывают тот цвет, который содержится в меньшей доле, а затем через дефис - преобладающий цвет (например, красно-коричневый).

Слабоокрашенные образцы имеют оттенок цвета, название которого характеризуют суффиксом «-оват» (например, «желтоватый») или добавляют приставку «светло-» (например, «светло-желтый»).

Цвет твердых веществ следует определять на матово-белом фоне (белая плотная или фильтровальная бумага) при рассеянном дневном свете в условиях минимального проявления тени. Небольшое количество вещества (0,5-2,0 г) помещают на белую бумагу и без нажима равномерно распределяют по поверхности бумаги (осторожно разравнивают шпателем или другим приспособлением) так, чтобы поверхность оставалась плоской.

Запах. Запах следует характеризовать терминами: «без запаха», «с характерным запахом», «со слабым характерным запахом». Если запах не охарактеризован, то подразумевается его отсутствие у анализируемого ЛС.

Испытание проводят сразу после вскрытия упаковки. 0,5-2,0 г ЛС равномерно распределяют на часовом стекле диаметром 6-8 см; через 15 мин определяют запах на расстоянии 4-6 см или делают вывод о его отсутствии. В случае легколетучих жидких ЛС наносят 0,5 мл испытуемого образца на фильтровальную бумагу и запах определяют сразу же после нанесения, если нет других указаний.

Масса. «Взвешивание по разности» (например, до и после высушивания/прокаливания при определении потери в массе при высушивании; золы общей; золы, не растворимой в кислоте хлористоводородной и др.) проводят при одинаковых условиях (температура, давление, влажность), используя одни и те же средства измерения и лабораторную посуду. Интервал времени между двумя взвешиваниями определяется свойствами и количеством высушиваемого/прокаливаемого остатка.

После прокаливания/высушивания тигель или бюкс следует охлаждать в эксикаторе до температуры окружающей среды. Промежутки времени с момента извлечения тигля или стаканчика для взвешивания из эксикатора до момента взвешивания должны быть одинаковыми.

Массу следует считать постоянной, если разность результатов двух последующих взвешиваний не превышает 0,0005 г для 1,0 г взятого вещества.

Термин «невесомый» означает, что масса не превышает 0,0005 г.

Объем. Для обеспечения требуемой точности измерений стеклянная мерная посуда должна соответствовать требованиям класса А Международного стандарта (ISO). Допускается использование стеклянной мерной посуды по ГОСТам (не ниже 1-го класса точности).

Понятие «капля» означает объем от 0,02 до 0,05 мл в зависимости от растворителя; для водных растворов объем капли, отмериваемый стандартным каплемером, равен 0,05 мл (в 1 мл содержится 20 капель).

Температура. Помимо конкретного указания температуры, используют также следующие термины (табл. 1).

Таблица 1. Термины, употребляемые в фармакопейных статьях, при указании температурных условий

Под «водяной баней» понимают кипящую водяную баню, если в ФС не указана температура нагревания.

Испытания следует проводить при комнатной температуре, если нет других указаний.

Если при проведении испытания, где имеет значение температура, она не указана, то подразумевают температуру 20 °С.

Если в тесте «Потеря в массе при высушивании» температурный интервал не указан, то подразумевают, что он равен ±2 °С указанного значения.

Точность измерения. При описании количественного определения или испытания с численно заданными пределами количества вещества необходимое количество указывают приблизительно; в действительности оно может отклоняться в пределах ±10% указанного. Необходимо взять точную навеску анализируемого вещества (или отмерить его каким-либо другим способом) и все вычисления проводить для этого точного количества. Если пределы испытания заданы не численно, а определяются путем сравнения со стандартом при тех же условиях, для испытания берут строго указанное количество вещества. Реактивы всегда берут в строго указанных количествах.

Если значения массы навесок или объемов не используют для дальнейших расчетов, то точность их взятия (отмеривания, отвешивания) следует согласовывать с указанной точностью.

Точность измерений необходимо обозначать числом десятичных знаков после запятой данного числового значения. Точность взвешивания должна быть ±5 единиц после последней указанной цифры; например, навеску 0,25 г следует понимать как лежащую в интервале от 0,245 до 0,255 г. Объемы отмеряют следующим образом. Если после запятой стоит «0» или число, заканчивающееся нулем (например, 10,0 мл или 0,50 мл), требуемый объем отмеряют с помощью пипетки, мерной колбы или бюретки. В остальных случаях можно использовать градуированный мерный цилиндр или градуированную пипетку. Микролитры отмеряют с помощью микропипетки или микрошприца.

Точная навеска. «Точная навеска» означает взвешивание на аналитических весах с погрешностью ±0,0002 г. Если не указано «точная навеска» и точность взвешивания не задана числом десятичных знаков, то навеску следует брать с погрешностью ±0,01 г.

При определении массы в граммах с точностью более 4 десятичных знаков следует пользоваться весами с метрологическими или техническими характеристиками, обеспечивающими требуемую точность взвешивания.

Время. Понятие «сразу» означает отрезок времени не более 30 с.

Понятие «свежеприготовленный раствор» означает раствор, приготовленный не более чем за 8 ч до его применения, если нет других указаний.

Растворители. Если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные растворы.

Под названием «вода» как растворитель, если нет особых указаний, следует понимать воду, соответствующую требованиям ФС «Вода очищенная». Термин «вода дистиллированная» распространяется на «воду очищенную», полученную путем дистилляции.

Под показателем качества ЛС «Вода» следует понимать определение содержания в ЛС воды с использованием метода Фишера (полумикрометода и микрометода) или метода дистилляции в соответствии с ОФС «Определение воды».

Под названием «спирт», если нет особых указаний, следует понимать спирт этиловый, «этанол» - спирт этиловый абсолютированный; под названием «эфир» - эфир диэтиловый.

При определении спирта в лекарственных препаратах под процентом подразумевают объемный процент.

Если для проведения испытания требуется использовать растворитель с растворенным в нем индикатором и контрольный опыт не предусмотрен, то растворитель предварительно нейтрализуют по этому индикатору.

Если указано, что при приготовлении смеси растворителей их берут в соотношении (а:в), то имеется в виду соотношение объемов. Например, соотношение гексан-бензол (1:3) означает, что смешивают 1 объем гексана с 3 объемами бензола.

Реактивы. Для испытаний применяют реактивы квалификации «чистый для анализа». В этом случае квалификация реактива не указывается. При применении реактивов другой квалификации следует приводить соответствующее указание.

Индикаторы. При титриметрических определениях раствор индикатора, если нет других указаний, добавляют в количестве 0,2 мл или 1-5 капель.

Растворы. Под принятым способом обозначения концентрации растворов твердых веществ в различных растворителях (1:10, 1:2) следует подразумевать содержание массовой доли вещества в указанном объеме раствора, то есть при приготовлении раствора 1:10 следует брать 1 г вещества и растворителя до получения 10 мл раствора; при приготовлении раствора 1:2 следует брать 1 г вещества и растворителя до получения 2 мл раствора и т.д.

Под обозначением «ч» подразумевают массовые части.

Обозначение «ppm» (частей на миллион) подразумевает массовое соотношение.

Процентная концентрация раствора может иметь одно из трех значений:

Если «%» используется без обозначения (м/м, м/о или о/о), то подразумевается массовый процент для смесей твердых веществ, массо-объемный процент для растворов или суспензий твердых веществ в жидкостях, объемный процент для растворов жидкостей в жидкостях и массо-объемный процент для растворов газов в жидкостях. Например, 1% раствор приготавливают растворением 1 г твердого вещества или 1 мл жидкости в растворителе с получением в последующем 100 мл раствора.

Пределы содержания. Указываемые пределы основываются на результатах, полученных в рамках аналитической практики; в них уже учтены обычные аналитические погрешности, допустимый разброс при производстве и приготовлении, а также ухудшение качества в процессе хранения в пределах, которые считаются приемлемыми.

Если в разделе «Количественное определение» для индивидуальных веществ не указан верхний предел содержания, следует считать, что последний составляет 100,5% определяемого вещества.

В тех случаях, когда содержание вещества в препарате выражается в пересчете на сухое или безводное вещество, следует понимать, что потеря в массе при высушивании или содержание воды определены тем методом, который описан в соответствующей ФС или НД.

Контрольный опыт. Под контрольным опытом подразумевают определение, проводимое с теми же количествами реактивов и в тех же условиях, но без испытуемого ЛС, если нет других указаний в ФС.

Вычисление результатов испытания. При всех количественных определениях результат вычисляют с точностью, на два десятичных знака большей, чем число десятичных знаков, указанное в ФС или НД, если это допустимо с точки зрения точности метода. Затем цифры округляют до указанного в пределе количества значащих цифр (если нет других указаний). При этом последнюю цифру увеличивают на единицу, если цифра, отбрасываемая при округлении, больше или равна 5. Если цифра, отбрасываемая при округлении, меньше 5, последнюю цифру оставляют неизменной.

В фармакопейном анализе понятие растворимости приводится в качестве характеристики приблизительной растворимости фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ (далее - веществ) при фиксированной температуре. Испытание, если нет других указаний в ФС, следует проводить при температуре (20 ± 2) °C.

Если растворимость служит показателем чистоты вещества, то в ФС должны быть представлены конкретные количественные соотношения вещества и растворителей.

Рекомендуется использовать растворители разной полярности (обычно три); не рекомендуется использовать легкокипящие и легковоспламеняющиеся (например, диэтиловый эфир) или очень токсичные (например, бензол, метиленхлорид) растворители.

Растворимость вещества (в пересчете на 1 г вещества) выражают в терминах, приведенных в табл. 2.

Таблица 2. Обозначения растворимости фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ

Вещество считают растворившимся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества. В растворе могут присутствовать следовые количества физических примесей, например волокна фильтровальной бумаги. Для веществ, образующих при растворении опалесцирующие растворы, соответствующее указание должно быть приведено в ФС.

Термин «смешивается с…​» используется для характеристики жидкостей, смешивающихся с указанным растворителем во всех соотношениях.

Если указано, что вещество растворимо в жирных маслах, то имеется в виду, что оно растворимо в любом масле, относящемся к классу жирных масел.

Методика определения растворимости. К навеске растертого в тонкий порошок вещества прибавляют отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при 20 ± 2 °C.

Для медленно растворимых веществ, требующих для своего растворения более 10 мин, допускается нагревание на водяной бане до 30 °C.

Наблюдение проводят после охлаждения раствора до комнатной температуры и энергичного встряхивания в течение 1-2 мин.

Условия растворения медленно растворимых веществ указывают в фармакопейных статьях.

Для веществ с неизвестной растворимостью испытание проводят по следующей методике.

К 1,0 г растертого вещества прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если вещество полностью растворилось, оно очень легкорастворимо.

Если вещество растворилось не полностью, то к 100 мг растертого вещества прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если вещество полностью растворилось, оно легкорастворимо.

Если вещество растворилось не полностью, то добавляют 2,0 мл растворителя и продолжают растворение. Если вещество полностью растворилось, оно растворимо.

Если вещество растворилось не полностью, то добавляют 7,0 мл растворителя и продолжают растворение. Если вещество полностью растворилось, оно умеренно растворимо.

Если вещество растворилось не полностью, то к 10 мг растертого вещества прибавляют 10,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если вещество полностью растворилось, оно малорастворимо.

Если вещество растворилось не полностью, то к 10 мг растертого вещества прибавляют 100 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если вещество полностью растворилось, оно очень малорастворимо.

Если вещество не растворилось, оно практически нерастворимо в данном растворителе.

Для веществ с известной растворимостью испытание проводят по описанной выше методике, но только для крайних значений, относящихся к указанному термину. Например, если вещество растворимо, то 100 мг растертого вещества не должны растворяться в 1,0 мл растворителя, но должны раствориться полностью в 3,0 мл растворителя.

Общие статьи по методам анализа, лекарственным формам и фармакотехнологическим испытаниям (ОФС), а также частные статьи по ЛС (монографии), входящие в ГФ PK , делят на две части. Первая часть гармонизирована с Европейской Фармакопеей (ЕФ); вторая - национальная - часть гармонизирована с ГФ РФ и законодательством РК. Часть статьи, гармонизированная с ЕФ, представляет собой адаптированный перевод соответствующего материала ЕФ. Национальная часть статьи включает особенности испытаний, детализацию их условий, имеющую важное значение, дополнительные испытания, информационные и иные материалы. В некоторых случаях национальная часть содержит требования к качеству ЛС, производство которых не осуществляется в соответствии с требованиями надлежащей производственной практики (GMP), установленными в Европейском Союзе. Национальная часть следует после герба РК. В ряде статей национальная часть может отсутствовать. Нумерация ОФС ГФ PK совпадает с нумерацией соответствующих статей ЕФ. ОФС, не описанные в ЕФ, вынесены в конец соответствующего раздела. ОФС на субстанции и лекарственные формы расположены в алфавитном порядке.

В ГФ PK растворимость выражают в описательных терминах (табл. 3).

Субстанцию считают растворившейся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества. В растворе могут содержаться следовые количества физических примесей, таких как волокна фильтровальной бумаги и др. Для субстанций, образующих при растворении мутные растворы, соответствующее указание должно быть приведено в частной ФС.

Таблица 3. Растворимость

Методика определения растворимости. К навеске, растертой в тонкий порошок субстанции, прибавляют отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при 20 ± 2 °C.

Для медленно растворимых препаратов, требующих для своего растворения более 10 мин, допускается нагревание на водяной бане до 30 °C. Наблюдение проводят после охлаждения раствора до комнатной температуры и энергичного встряхивания в течение 1-2 мин.

Условия растворения медленно растворимых препаратов указывают в частных фармакопейных статьях.

Для субстанций с неизвестной растворимостью испытание проводят по следующей методике.

К 1,00 г растертой субстанции прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если субстанция полностью растворилась, она очень легкорастворима.

Если субстанция растворилась не полностью, к 100 мг растертой субстанции прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если субстанция полностью растворилась, она легкорастворима.

Если субстанция растворилась не полностью, добавляют 2,0 мл растворителя и продолжают растворение. Если субстанция полностью растворилась, она растворима.

Если субстанция растворилась не полностью, добавляют 7,0 мл растворителя и продолжают растворение. Если субстанция полностью растворилась, она умеренно растворима.

Если субстанция растворилась не полностью, к 10 мг растертой субстанции прибавляют 10,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если субстанция полностью растворилась, она малорастворима.

Если субстанция растворилась не полностью, к 10 мг растертой субстанции прибавляют 100 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше. Если субстанция полностью растворилась, она очень малорастворима.

Если субстанция не растворилась, она практически нерастворима в данном растворителе.

Для субстанций с известной растворимостью испытание проводят по описанной выше методике, но только для крайних значений, относящихся к указанному термину. Например, если субстанция растворима, то 100 мг растертой субстанции не должны растворяться в 1,0 мл растворителя, но должны растворяться полностью в 3,0 мл растворителя.

Прозрачность и степень мутности жидкостей определяют путем сравнения испытуемой жидкости с растворителем или эталонами визуально либо инструментальным методом.

Визуальный метод. Визуальное испытание проводят в одинаковых пробирках с притертой пробкой из прозрачного бесцветного и нейтрального стекла с внутренним диаметром около 15 мм. Для сравнения берут равные объемы эталона и испытуемой жидкости (5 или 10 мл). Испытание проводят при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40 Вт, расположенной над образцом, просматривая растворы перпендикулярно вертикальной оси пробирок на черном фоне через 5 мин после приготовления эталона.

Испытуемую жидкость считают прозрачной, если она по прозрачности не отличается от воды или растворителя, используемого при приготовлении испытуемой жидкости, либо ее опалесценция (мутность) не превышает опалесценцию (мутность) эталона I при просмотре в описанных выше условиях.

Эталонами служат взвеси из гидразина сульфата и гексаметилентетрамина.

Приготовление раствора гидразина сульфата. 0,50 г гидразина сульфата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор выдерживают в течение 4-6 ч.

Приготовление раствора гексаметилентетрамина. 3,0 г гексаметилентетрамина растворяют в 30,0 мл воды.

Приготовление исходного эталона. К 25,0 мл раствора гидразина сульфата прибавляют 25,0 мл раствора гексаметилентетрамина, перемешивают и оставляют на 24 ч.

Исходный эталон стабилен в течение 2 мес при хранении в стеклянной посуде, не имеющей дефектов поверхности (взвесь не должна прилипать к стеклу), с притертой пробкой.

Приготовление основного эталона. 15,0 мл исходного эталона помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, доводят объем жидкости водой до метки и перемешивают.

Срок годности основного эталона 24 ч.

Приготовление эталонов сравнения. Отмеренное количество основного эталона, указанное в приведенной ниже таблице, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем жидкости водой до метки и перемешивают (табл. 4).

Таблица 4. Состав эталонов сравнения

Примечание. Перед применением исходный, основной и эталоны сравнения перемешивают и встряхивают в течение 3 мин.

Эталоны сравнения I, II, III и IV должны быть свежеприготовленными.

Для оценки прозрачности и степени мутности жидкостей допускается использование спектрофотометров или специальных приборов типа турбидиметров, нефелометров или эквивалентных, если это предусмотрено ФС. В таком случае в ФС должны быть указаны необходимые условия проведения испытания.

Визуальный метод. Для определения прозрачности и степени опалесценции жидкостей используют одинаковые пробирки из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с плоским дном, имеющие внутренний диаметр от 15 до 25 мм. Сопоставляют испытуемую жидкость с толщиной слоя 40 мм со свежеприготовленной суспензией сравнения с той же толщиной слоя. Сравнение жидкостей проводят в рассеянном дневном свете через 5 мин после приготовления суспензии сравнения, просматривая образцы вдоль вертикальной оси пробирок на черном фоне. Рассеяние света должно быть таким, чтобы суспензия сравнения I легко отличалась от воды Р, а суспензия сравнения II легко отличалась от суспензии сравнения I. Испытуемую жидкость считают прозрачной, если она выдерживает сравнение с водой P или растворителем, используемым для приготовления испытуемой жидкости, при просмотре в описанных выше условиях либо ее опалесценция не превышает опалесценцию суспензии сравнения I.

Реактивы. Раствор гидразина сульфата. 1,0 г гидразина сульфата P растворяют в воде Р и доводят объем раствора водой Р до 100,0 мл. Раствор выдерживают в течение 4-6 ч.

Раствор гексаметилентетрамина. 2,5 г гексаметилентетрамина растворяют в 25,0 мл воды Р в колбе вместимостью 100 мл со стеклянной притертой пробкой.

Первичная опалесцирующая суспензия (суспензия формазина). 25,0 мл раствора гидразина сульфата прибавляют к приготовленному раствору гексаметилентетрамина, перемешивают и оставляют на 24 ч. Суспензия стабильна в течение 2 мес при хранении в стеклянной посуде, не имеющей дефектов поверхности. Суспензия не должна прилипать к стеклу, перед использованием ее необходимо тщательно взбалтывать.

Стандарт опалесценции. 15,0 мл первичной опалесцирующей суспензии доводят водой Р до объема 1000,0 мл. Срок хранения стандарта опалесценции 24 ч.

Суспензии сравн ения готовят в соответствии с табл. 5.

Таблица 5. Приготовление суспензий сравнения

Стандарт опалесценции и воду Р смешивают и непосредственно перед использованием встряхивают.

Стандарт мутности. Суспензия формазина, приготовленная путем смешивания равных объемов растворов гидразина сульфата и гексаметилентетрамина, применяется в качестве первичного стандарта с характеристическим значением мутности 4000 НЕМ (нефелометрических единиц мутности). Суспензии сравнения I, II, III и IV должны иметь характеристические значения мутности 3, 6, 18 и 30 НЕМ соответственно. Допускается применение имеющихся в продаже стабильных суспензий формазина для приготовления устойчивых разбавленных стандартов мутности после их приведения к стандарту в соответствии с указаниями в частной ФС.

По физическим свойствам формазин служит идеальным стандартом мутности, который легко приготовить из контролируемых исходных веществ. Формазин представляет собой полимер, состоящий из цепей различной длины, которые вследствие гибкости принимают различные конформации и образуют частицы различных форм и размеров. Ввиду многообразия частиц суспензия формазина аналитически сопоставима с возможными формами и размерами частиц в испытуемых образцах. Благодаря воспроизводимости, характеристикам рассеяния и чувствительности суспензию формазина используют в качестве светорассеивающего стандарта для калибровки прибора.

Окраску жидкостей определяют визуально одним из методов, приведенных ниже, путем сравнения с соответствующими эталонами. В статью включены методы контроля качества ЛС по показателям «цветность» и «цветность раствора». Цветность служит условно принятой количественной характеристикой для жидкостей, имеющих незначительную окраску.

Цвет - это восприятие или субъективная реакция наблюдателя на объективный раздражитель в виде энергии, излучаемой в видимой части спектра и охватывающей диапазон длин волн от 400 до 700 нм. Окраска двух растворов совпадает (при определенном источнике света), если их спектры поглощения и отражения идентичны и наблюдатель не замечает разницы между ними.

Ахроматизм, или отсутствие окраски, означает отсутствие у испытуемого раствора абсорбции в видимой области спектра.

Для визуальной оценки окраски жидкостей в зависимости от интенсивности в области коричневых, желтых и красных цветов используют один из двух методов, описанных в статье. Бесцветными считаются жидкости, если их окраска не отличается от воды (в случае растворов - от соответствующего растворителя) или сравнима с эталоном В₉, то есть они должны быть окрашены не более интенсивно, чем эталон В₉.

Метод 1. Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром около 12 мм, используя равные объемы - 2,0 мл испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску в дневном отраженном свете, горизонтально (перпендикулярно оси пробирок) на матово-белом фоне (эталоны 1-3).

Метод 2. Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром от 15 до 25 мм, используя равные слои высотой 40 мм испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску в дневном отраженном свете сверху (вдоль вертикальной оси пробирок) на матово-белом фоне (эталоны 4-9).

Приготовление исходных растворов. Желтый раствор. 46 г (точная навеска) железа (III) хлорида (FeC1₃ ? 6Н₂О; М.м. 270,30) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из 25 мл концентрированной кислоты хлористоводородной и 975 мл воды, в мерной колбе вместимостью 1000 мл, перемешивают и доводят объем раствора в колбе этой же смесью до метки. Определяют количественное содержание железа хлорида в 1 мл раствора. Объем раствора железа хлорида разбавляют этой же смесью таким образом, чтобы содержание железа хлорида в 1 мл составляло 45,0 мг.

Раствор хранят в защищенном от света месте.

Красный раствор. 60 г (точная навеска) растертого кобальта (II) хлорида (СоС1₂) (СоС1₂ ? 6Н₂О; М.м. 237,93) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из 25 мл концентрированной кислоты хлористоводородной и 975 мл воды, в мерной колбе вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора в колбе этой же смесью до метки. Определяют количественное содержание кобальта хлорида в 1 мл раствора. Объем раствора кобальта хлорида разбавляют этой же смесью таким образом, чтобы содержание кобальта хлорида в 1 мл раствора составляло 59,5 мг.

Голубой раствор. 63 г (точная навеска) меди (II) сульфата (CuSO₄ ?5Н₂О; М.м. 249,68) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из 25 мл концентрированной кислоты хлористоводородной и 975 мл воды, в мерной колбе вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора в колбе этой же смесью до метки. Определяют количественное содержание меди сульфата в 1 мл раствора. Объем раствора меди сульфата разбавляют этой же смесью таким образом, чтобы содержание меди сульфата в 1 мл раствора составляло 62,4 мг.

Приготовление стандартных растворов. Стандартные растворы, получаемые при смешивании исходных растворов железа хлорида, кобальта хлорида и меди сульфата с 1% раствором кислоты хлористоводородной, представлены в табл. 6.

Приготовленные исходные и стандартные растворы помещают в сухие склянки с притертыми пробками и хранят при температуре 20 ± 3 °С в защищенном от попадания прямых солнечных лучей месте.

Срок годности исходных и стандартных растворов - 1 год.

При хранении исходных и стандартных растворов следует перед употреблением убедиться в отсутствии в них мути, осадка и хлопьев. При наличии таковых растворы заменяют свежеприготовленными.

Приготовление эталонов. Эталоны готовят из пяти стандартных растворов путем разбавления их 1% раствором кислоты хлористоводородной.

Отмеривание исходных и стандартных растворов для приготовления шкал производят при помощи калиброванной пипетки или бюретки с точностью до 0,02 мл.

Эталоны для определения степени окраски жидкостей по методу 1 хранят в ампулах из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с наружным диаметром 12 мм в защищенном от света месте в течение 1 года.

Таблица 6. Стандартные растворы

Эталоны, используемые для определения степени окраски жидкостей по методу 2, готовят из соответствующих стандартных растворов непосредственно перед использованием.

Количества компонентов для приготовления эталонов цветности приведены в табл. 7-11.

Таблица 7. Эталоны коричневых оттенков (шкала В)

Таблица 8. Эталоны коричневато-желтых оттенков (шкала BY)

Таблица 9. Эталоны желтых оттенков (шкала Y)

Таблица 10. Эталоны зеленовато-желтых оттенков (шкала GY)

Таблица 11. Эталоны красных оттенков (шкала R)

Сравнение степени окраски жидкости с эталонами (В, BY, Y, GY, R)_1-3 обычно проводят по методу 1; в случае использования эталонов В_4-9, (BY, Y, GY, R)_4-7 применяют метод 2.

Степень окраски испытуемого раствора не должна превышать степень окраски соответствующего эталона. Цвет испытуемого образца должен быть максимально приближен к цвету соответствующего эталона.

При сравнении окраски испытуемого раствора с эталонами указывают, кроме номера эталона, букву шкалы. Например, окраска раствора не должна превышать эталон В₇.

При необходимости могут быть использованы другие эталоны, приготовленные путем смешивания стандартных растворов разных цветовых шкал с точным указанием их объемов для достижения нужной окраски, приближенной к окраске испытуемого раствора, если это предусмотрено частной статьей.

Для оценки окраски жидкостей возможно использование спектрофотометрического метода, при этом должны быть указаны: длина волны, при которой наблюдается максимум поглощения в видимой области спектра, толщина кюветы и значение оптической плотности с допустимыми отклонениями, если это предусмотрено частной ФС.

Определение степени окраски жидкостей в ряду коричневый - желтый - красный проводят визуально путем сравнения с соответствующими растворами сравнения одним из двух описанных ниже методов, указанным в частной статье. Раствор считают бесцветным, если он выдерживает сравнение с водой Р или растворителем либо он окрашен не более интенсивно, чем раствор сравнения B₉.

Метод 1. 2,0 мл испытуемой жидкости сравнивают с 2,0 мл воды Р или растворителя, или раствора сравнения (см. таблицы растворов сравнения), указанного в частной статье, используя одинаковые пробирки из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с наружным диаметром 12 мм. Сравнение окраски проводят в рассеянном дневном свете, просматривая образцы горизонтально (перпендикулярно оси пробирок) на белом фоне.

Метод 2. Слой 40 мм испытуемой жидкости сравнивают с слоем 40 мм воды Р или растворителя, или раствора сравнения (см. табл. 7-11), указанного в частной статье, используя одинаковые пробирки из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с плоским дном, имеющие внутренний диаметр от 15 до 25 мм. Сравнение окраски проводят в рассеянном дневном свете, просматривая образцы вдоль вертикальной оси пробирок на белом фоне.

Исходные растворы. Желтый раствор. 46 г железа (III) хлорида Р помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 900 мл смеси: кислота хлористоводородная P - вода P (25:975), доводят объем раствора этой же смесью до метки и перемешивают. Определяют концентрацию полученного раствора и разбавляют раствор этой же смесью таким образом, чтобы содержание FeCl₃ ? 6H₂O в 1 мл составляло 45,0 мг. Раствор хранят в защищенном от света месте.

Определение концентрации. 10,0 мл полученного раствора помещают в коническую колбу с притертой стеклянной пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют 15 мл воды Р, 5 мл кислоты хлористоводородной Р и 4 г калия йодида Pi, колбу закрывают и оставляют на 15 мин в темном месте. Прибавляют 100 мл воды Р, и выделившийся йод титруют 0,1 M раствором натрия тиосульфата, прибавляя в конце титрования в качестве индикатора 0,5 мл раствора крахмала Р. 1 мл 0,1 M раствора натрия тиосульфата соответствует 27,03 мг FeCl₃ ? 6H₂O.

Красный раствор. 60 г кобальта хлорида Р помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 900 мл смеси: кислота хлористоводородная P - вода P (25:975), доводят объем раствора этой же смесью до метки и перемешивают. Определяют концентрацию полученного раствора и разбавляют раствор этой же смесью таким образом, чтобы содержание СоС1₂ ? 6Н₂О в 1 мл составляло 59,5 мг.

Определение концентрации. 5,0 мл полученного раствора помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл с притертой стеклянной пробкой, прибавляют 5 мл раствора пероксида водорода разбавленного Р и 10 мл раствора (300 г/л) натрия гидроксида Р, осторожно кипятят 10 мин, охлаждают и прибавляют 60 мл кислоты серной разбавленной Р и 2 г калия йодида Р. Колбу закрывают и осторожно встряхивают до полного растворения осадка. Выделившийся йод титруют 0,1 M раствором натрия тиосульфата, прибавляют в конце титрования в качестве индикатора 0,5 мл раствора крахмала Р и титруют до бледно-розового окрашивания.

1 мл 0,1 M раствора натрия тиосульфата соответствует 23,79 мг СоС1₂ ? 6Н₂О.

Голубой раствор. 63 г меди сульфата Р помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 900 мл смеси: кислота хлористоводородная P - вода Р (25:975), доводят объем раствора этой же смесью до метки и перемешивают. Определяют концентрацию полученного раствора и разбавляют раствор этой же смесью таким образом, чтобы содержание CuSO₄ ? 5H₂O в 1 мл составляло 62,4 мг.

Определение концентрации. 10,0 мл полученного раствора помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл с притертой стеклянной пробкой, прибавляют 50 мл воды P, 12 мл кислоты уксусной разбавленной Р и 3 г калия йодида Р. Выделившийся йод титруют 0,1 M раствором натрия тиосульфата, прибавляют в конце титрования в качестве индикатора 0,5 мл раствора крахмала Р и титруют до бледно-коричневого окрашивания.

1 мл 0,1 M раствора натрия тиосульфата соответствует 24,97 мг CuSO₄ ? 5H₂O.

Растворы сравнения для методов 1 и 2. Растворы сравнения готовят из пяти стандартных растворов. Растворы сравнения шкал B, ВY, Y, GY, R идентичны таковым ГФ XII ОФС.42-0050-07 (см. табл. 6-10).

Сравнение степени окраски жидкости с растворами сравнения (В, BY, Y, GY, R)_1-3 обычно проводят по методу 1; в случае использования растворов сравнения (В, BY, Y, GY, R)_4-9 применяют метод 2.

Степень окраски испытуемого образца не должна превышать степень окраски соответствующего раствора сравнения. Цвет испытуемого образца должен быть максимально приближен к цвету соответствующего раствора сравнения.

Стандартные растворы. Пять стандартных растворов готовят с использованием трех исходных растворов в соответствии с указаниями в табл. 12.

Таблица 12. Стандартные растворы

Хранение. Срок хранения исходных и стандартных растворов 1 год.

Цель: сформировать теоретические знания и закрепить практические навыки контроля качества ЛС по разделам «Подлинность», «Испытание на чистоту и допустимые пределы примесей», «рН, кислотность и щелочность», руководствуясь соответствующими статьями ГФ.

Задачи. Необходимо освоить следующие производственные навыки.

Анализ подлинности субстанции проводят по ФС. В некоторых случаях при соответствующем указании в статье проводят общие реакции подлинности. При проведении испытаний на подлинность используют растворы и реактивы, приготовленные по методикам общих фармакопейных статей.

Задание 1.1. Изучите раздел «Подлинность» ФС на глюкозу по ГФ и раздел «Идентификация» по ГФ РК.

Задание 1.2. Проведите реакцию подлинности на глюкозу. Запишите уравнение протекающей реакции. Для приготовления реактива Фелинга используйте указания ГФ XIII и ГФ PK (Медно-тартратный раствор. 1023300. - Т. 1. - С. 383).

Медно-тартратный реактив (реактив Фелинга). Служит фармакопейной реакцией подлинности на глюкозу.

Раствор I. Навеску 34,6 г меди (II) сульфата растворяют в воде, доводят объем раствора тем же растворителем до 500 мл.

Раствор II. Навески 173 г калия-натрия тартрата и 50 г натрия гидроксида растворяют в 400 мл воды. Нагревают до кипения, охлаждают, доводят объем полученного раствора водой, свободной от углерода диоксида, до 500 мл.

Непосредственно перед использованием смешивают равные объемы растворов I и II.

5 мл реактива Фелинга разбавляют 5 мл воды и нагревают до кипения. Раствор должен оставаться прозрачным и не выделять даже следов осадка.

Задание 1.3. Проведите определение удельного оптического вращения раствора глюкозы по методике ОФС ГФ PK 2.2.7 «Оптическое вращение».

Задание 1.4. Проведите идентификацию субстанции глюкозы методом ТСХ согласно ОФС ГФ PK 2.2.27 «Тонкослойная хроматография».

Определение примесей проводят либо по методике, описанной в ФС, либо по ОФС на примеси, если в ФС указано только требование и не приведена иная методика.

Задание 2.1. Проведите испытание субстанции глюкозы на примесь бария по методике ФС на глюкозу по ГФ и ГФ РК.

Задание 2.2. Проведите испытание субстанции на примесь кальция, используя рекомендации и методики ОФС ГФ XIII и ГФ РК.

Задание 2.3. Изучите ОФС ГФ XIII и ГФ PK на определение примесей сульфатов, сульфитов, хлоридов, кальция и бария. Приготовьте эталонные растворы соответствующих примесей. Проведите испытание образца субстанции глюкозы на содержание хлоридов, сульфатов, сульфитов, кальция и бария.

Такие показатели, как рН, кислотность и щелочность растворов лекарственных веществ, нормируют несколькими способами. В ФС могут быть приведены методика нейтрализации исследуемого раствора стандартным раствором кислоты или щелочи и предельная норма щелочности или кислотности соответственно. В иных случаях нормируют рН раствора, который определяют по методике ОФС. По ГФ XI ОФС «Определение рН» использовались потенциометрический и колориметрический методы. По ГФ XIII для определения рН используется только потенциометрический метод, описанный в ОФС «Ионометрия». ГФ PK рекомендует ОФС «Потенциометрическое определение рН».

Задание 3.1. Изучите ГФ XI ОФС «Определение рН» и ГФ XIII ОФС «Ионометрия», ГФ PK ОФС «Потенциометрическое определение рН».

Задание 3.2. Проведите испытание образца глюкозы по показателю «Кислотность» по ГФ XII и по ГФ PK «Кислотность или щелочность».

Задание 4. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Приведите состав реактива Фелинга и его структурную формулу.

Назовите допустимые примеси в глюкозе и напишите схемы реакций их определения.

Какой реактив требуется для приготовления эталонного раствора для определения примеси сульфат-иона?

Какие способы определения рН вы знаете? Каким способом определяют рН раствора натрия тиосульфата для инъекций?

На титрование 10 мл раствора формальдегида ушло 3,2 мл 0,1 н NaOH (по фенолфталеину). Сделайте вывод о соответствии содержания муравьиной^[4] кислоты в растворе формалина требованиям ФС.

Какие свойства проявляет глюкоза в реакции с реактивом Фелинга?

Назовите недопустимые примеси в глюкозе и напишите схемы реакций их обнаружения в случае их присутствия.

Какой реактив требуется для приготовления эталонного раствора для определения примеси кальций-иона?

Какой буферный раствор следует выбрать для определения рН раствора натрия тиосульфата для инъекций?

При определении показателя «Щелочность» в растворе натрия тиосульфата для инъекций на нейтрализацию 10 мл раствора пошло 6,75 мл 0,5 н НС1 (по метиловому оранжевому). Сделайте вывод о соответствии раствора натрия тиосульфата для инъекций по данному показателю требованию ФС.

Какие функциональные группы содержит молекула глюкозы? Какие химические свойства характерны для глюкозы?

Укажите методику определения примеси декстрина в субстанции глюкозы.

Какой реактив требуется для приготовления эталонного раствора для определения примеси хлорид-иона?

Какой индикатор используют для предварительного определения рН колориметрическим методом?

На титрование 10 мл раствора формальдегида ушло 5,2 мл 0,1 н NaOH (по фенолфталеину). Сделайте вывод о соответствии содержания муравьиной кислоты в растворе формалина требованиям ФС.

Напишите циклическую и ациклическую формы глюкозы. Укажите и обоснуйте состав раствора глюкозы для инъекций. На каком фоне необходимо регистрировать наличие мути или белого осадка?

Какие электроды рекомендуются в качестве индикаторных для определения рН растворов потенциометрическим способом?

При определении показателя «Щелочность» в растворе натрия тиосульфата для инъекций на нейтрализацию 10 мл раствора пошло 4,75 мл 0,5 н НС1 (по метиловому оранжевому). Сделайте вывод о соответствии раствора натрия тиосульфата для инъекций по данному показателю требованию ФС.

За счет каких свойств глюкоза реагирует с реактивом Фелинга?

Обоснуйте, для каких целей добавляется раствор аммиака при определении удельного вращения раствора глюкозы.

Как определяют недопустимую примесь бария в субстанции глюкозы?

Приведите и обоснуйте с написанием химической реакции состав раствора натрия тиосульфата для инъекций, объясните, почему необходимо определять рН и щелочность.

На титрование 10 мл раствора формальдегида ушло 7,4 мл 0,1 н NaOH (по фенолфталеину). Сделайте вывод о соответствии содержания муравьиной кислоты в растворе формалина требованиям ФС.

Определение примесей в ЛС и оценку их содержания проводят путем сравнения с эталонными растворами, устанавливающими предел содержания данной примеси, после проведения реакции. Окраска или опалесценция/муть испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски или опалесценции/мути эталонного раствора.

Растворы солей кальция в зависимости от их концентрации дают с раствором аммония оксалата помутнение раствора или белый мелкокристаллический осадок, не исчезающие при прибавлении уксусной кислоты, но легкорастворимые при прибавлении хлористоводородной или азотной кислоты. Предельная чувствительность реакции 3,5 мкг/мл кальций-иона. При концентрации кальций-иона 30 мкг/мл наблюдается помутнение раствора.

Испытуемый раствор. 10 мл раствора, приготовленного, как указано в ФС.

Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора кальций-иона (30 мкг/мл).

К испытуемому и эталонному растворам прибавляют по 1 мл 10% раствора аммония хлорида, 1 мл 10% раствора аммиака и 1 мл 4% раствора аммония оксалата, перемешивают.

Через 10 мин сравнивают мутность растворов. Мутность, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать мутность эталонного раствора.

При приготовлении всех растворов, применяемых в данном испытании, должна использоваться вода очищенная, полученная методом дистилляции.

В каждую из двух пробирок помещают по 0,2 мл стандартного раствора кальций-иона спиртового (100 мкг/мл) и 1 мл 4% раствора аммония оксалата.

Испытуемый раствор. Через 1 мин в одну из пробирок прибавляют смесь 1 мл 12% раствора уксусной кислоты и 15 мл раствора, содержащего указанное в ФС количество испытуемого вещества, и встряхивают.

Эталонный раствор. Во вторую пробирку также через 1 мин прибавляют смесь 10 мл стандартного раствора кальций-иона (10 мкг/мл), 1 мл 12% раствора уксусной кислоты и 5 мл воды.

Через 15 мин сравнивают мутность растворов. Мутность, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать мутность эталонного раствора.

Стандартные растворы кальций-иона. Стандартный раствор 3000 мкг/мл кальций-иона. Около 0,749 г (точная навеска) кальция карбоната, высушенного при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл воды, взбалтывают, прибавляют постепенно 8,3% раствор кислоты хлористоводородной до растворения; после удаления пузырьков углерода диоксида доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Стандартный раствор 100 мкг/мл кальций-иона спиртовой. Около 2,50 г (точная навеска) кальция карбоната, высушенного при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 12 мл 30% раствора уксусной кислоты, дегазируют, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор разводят 96% спиртом в 10 раз непосредственно перед использованием.

Стандартный раствор 30 мкг/мл кальций-иона. 1 мл стандартного раствора (3000 мкг/мл кальций-иона) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Стандартный раствор 10 мкг/мл кальций-иона. Около 0,624 г (точная навеска) кальция карбоната, высушенного при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 3 мл 30% раствора уксусной кислоты, доводят объем раствора водой до метки, дегазируют и перемешивают. Раствор разводят водой в 100 раз непосредственно перед использованием.

Определение содержания сульфат-ионов основано на их способности образовывать с растворами солей бария помутнение раствора или белый осадок, не растворимый в кислотах. Предельная чувствительность реакции 3 мкг/мл сульфат-иона. При концентрации 10 мкг/мл сульфат-иона через 10 мин наблюдают помутнение раствора.

Испытуемый раствор. 10 мл раствора, приготовленного в соответствии с ФС.

Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора сульфат-иона (10 мкг/мл).

К испытуемому и эталонному растворам прибавляют по 0,5 мл 8,3% раствора кислоты хлористоводородной и 1 мл 5% раствора бария хлорида, перемешивают.

Через 10 мин сравнивают мутность испытуемого и эталонного растворов. Мутность, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать мутность эталонного раствора.

К 4,5 мл стандартного раствора сульфат-иона спиртового (10 мкг/мл) прибавляют 3 мл 25% раствора бария хлорида, встряхивают и выдерживают в течение 1 мин.

Испытуемый раствор. К 2,5 мл описанного выше раствора прибавляют 15 мл раствора испытуемого образца, приготовленного в соответствии с ФС, и 0,5 мл 30% раствора уксусной кислоты.

Эталонный раствор. Готовят с теми же количествами реактивов и в тех же условиях, используя вместо раствора испытуемого образца 15 мл стандартного раствора сульфат-иона (10 мкг/мл).

Через 5 мин сравнивают мутность испытуемого и эталонного растворов. Мутность, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать мутность эталонного раствора.

Стандартные растворы сульфат-иона. Стандартный раствор 1000 мкг/мл сульфат-иона спиртовой. Около 0,1814 г (точная навеска) калия сульфата, высушенного при температуре от 100 до 150 °С до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30% спирте, доводят объем раствора 30% спиртом до метки и перемешивают.

Стандартный раствор 10 мкг/мл сульфат-иона спиртовой. 1 мл стандартного раствора (1000 мкг/мл сульфат-иона) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 30% спиртом до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Стандартный раствор 1000 мкг/мл сульфат-иона. Около 0,1814 г (точная навеска) калия сульфата, высушенного при температуре от 100 до 150 °С до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Стандартный раствор 10 мкг/мл сульфат-иона. 1 мл стандартного раствора (1000 мкг/мл сульфат-иона) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Растворы хлоридов в зависимости от их концентрации взаимодействуют с раствором серебра нитрата с образованием белого творожистого осадка, с появлением белого помутнения или опалесценции, не исчезающих при прибавлении азотной кислоты и легко исчезающих при прибавлении раствора аммиака. Предел чувствительности реакции 0,1 мкг/мл хлорид-иона. При концентрации хлорид-иона 2 мкг/мл получают хорошо заметную опалесценцию.

Испытуемый раствор. 10 мл раствора, приготовленного, как указано в ФС.

Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора хлорид-иона (2 мкг/мл).

К испытуемому и эталонному растворам прибавляют по 0,5 мл азотной кислоты и 0,5 мл 2% раствора серебра нитрата. Перемешивают и помещают пробирки в темное место. Через 5 мин сравнивают опалесценцию растворов.

Опалесценция, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать опалесценцию эталонного раствора.

Стандартные растворы хлорид-иона. Стандартный раствор 400 мкг/мл хлорид-иона. Около 0,659 г (точная навеска) натрия хлорида, доведенного до постоянной массы путем прокаливания при 500-600 °С, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Стандартный раствор 2 мкг/мл хлорид-иона. 5 мл стандартного раствора (400 мкг/мл хлорид-иона) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор используют свежеприготовленным.

При приготовлении всех растворов, применяемых в данном испытании, следует использовать воду дистиллированную Р. К 0,2 мл стандартного раствора кальция спиртового (100 млн^-1 Ca⁺²) P прибавляют 1 мл раствора аммония оксалата Р. Через 1 мин прибавляют смесь 1 мл кислоты уксусной разбавленной P и 15 мл раствора, содержащего указанное в частной статье количество испытуемого вещества, и встряхивают.

Параллельно в этих же условиях готовят раствор сравнения, используя смесь 1 мл уксусной кислоты разбавленной Р, 10 мл стандартного раствора кальция водного (10 млн^-1 Ca⁺² P и 5 мл воды дистиллированной Р).

Через 15 мин опалесценция испытуемого раствора не должна превышать опалесценцию раствора сравнения.

Стандартные растворы иона кальция. Кальция стандартный раствор (10 млн^-1 Са⁺²). 5000803. 0,624 г кальция карбоната Р в пересчете на СаСО₃ растворяют в 3 мл кислоты уксусной Р и доводят объем раствора водой дистиллированной Р до 250,0 мл. Раствор разводят водой дистиллированной Р в 100 раз непосредственно перед использованием.

Кальция стандартный раствор спиртовой (100 млн^-1 Са⁺²). 5000802. 2,50 г кальция карбоната P в пересчете на CaCO₃ растворяют в 12 мл кислоты уксусной P и доводят объем раствора водой дистиллированной P до 1000,0 мл. Раствор разводят 96% спиртом P в 10 раз непосредственно перед использованием.

К 15 мл раствора, указанного в ФС, прибавляют 1 мл кислоты азотной разбавленной Р и выливают смесь в один прием в пробирку, содержащую 1 мл раствора серебра нитрата Р2.

Параллельно в этих же условиях готовят раствор сравнения, используя 10 мл стандартного раствора хлорида (5 млн^-1 Cl^-1) P и 5 мл воды Р. Пробирки помещают в защищенное от света место.

Через 5 мин пробирки просматривают на черном фоне горизонтально (перпендикулярно оси пробирок). Опалесценция испытуемого раствора не должна превышать опалесценцию суспензии сравнения.

Хлорида стандартный раствор (5 млн^-1 C1^-1 ). 5000901. 0,824 г натрия хлорида P в пересчете на NaCl растворяют в воде Р и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл. Раствор разводят водой Р в 100 раз непосредственно перед использованием.

К 4,5 мл стандартного раствора сульфата (10 млн^-1 SO^-2) P1 прибавляют 3 мл раствора (250 г/л) бария хлорида Р. Встряхивают и оставляют на 1 мин. К 2,5 мл полученного раствора прибавляют 15 мл испытуемого раствора, приготовленного в соответствии с указаниями в ФС, и 0,5 мл кислоты уксусной Р.

Параллельно в этих же условиях готовят раствор сравнения, используя вместо испытуемого раствора 15 мл стандартного раствора сульфата (10 млн^-1 SO^-2) P. Через 5 мин опалесценция испытуемого раствора не должна превышать опалесценцию раствора сравнения.

Стандартный раствор сульфат-иона (10 млн^-1 SO₂). 5002800. 0,181 г калия сульфата P в пересчете на K₂SO₄ растворяют в воде дистиллированной P и доводят объем раствора тем же растворителем до 100,0 мл.

Раствор разводят водой дистиллированной P в 100 раз непосредственно перед использованием.

Водородным показателем рН, характеризующим концентрацию ионов водорода в водных растворах, называется отрицательный десятичный логарифм активности ионов водорода:

Потенциометрическое определение рН заключается в измерении электродвижущей силы электродной системы, где в качестве ионоселективного электрода используют чувствительный к ионам водорода электрод (обычно стеклянный), в качестве электрода сравнения - стандартный электрод с известной величиной потенциала (насыщенный каломельный или хлорсеребряный электрод). На практике для измерения рН применяют метод градуировочного графика. рН испытуемого раствора связан с рН стандартного раствора следующим уравнением:

где Е - потенциал электрода в испытуемом растворе, мВ; E_S - потенциал того же электрода в растворе с известным значением рН (стандартном растворе), мВ; k - коэффициент, который означает изменение электродвижущей силы на единицу изменения рН, мВ; pHs - pH стандартного раствора.

Прибор. В качестве прибора для потенциометрического определения рН используют иономеры или рН-метры с чувствительностью не менее 0,05 единицы рН или 3 мВ. Калибровку приборов производят по стандартным буферным растворам, приведенным в ОФС «Буферные растворы».

Методика. Все измерения проводят при одной и той же температуре в интервале от 20 до 25 °С, если нет других указаний в ФС. В табл. 13 приведена зависимость значений рН от температуры для различных стандартных буферных растворов, используемых для калибровки прибора. Для приготовления указанных растворов могут быть использованы стандарттитры для приготовления буферных растворов - рабочих эталонов рН (фиксаналы) промышленного производства.

Таблица 13. Значения pH стандартных буферных растворов при различных температурах

- изменение pH на градус Цельсия.

Если необходимо, учитывают температурные поправки в соответствии с инструкцией предприятия-производителя. Прибор калибруют при помощи буферного раствора калия гидрофталата (первичный стандарт) и одного из буферных растворов с другим значением рН (предпочтительно одного из приведенных в табл. 13). Показания прибора для третьего буферного раствора с промежуточным значением рН не должны отличаться больше, чем на 0,05 единицы рН от табличного значения рН этого раствора. Электроды прибора погружают в испытуемый раствор и измеряют рН в тех же условиях, что и буферные растворы.

Все испытуемые растворы и стандартные буферные растворы должны быть приготовлены на воде очищенной, не содержащей углерода диоксид, для чего перед употреблением ее необходимо прокипятить. Вода, не содержащая углерода диоксид, должна иметь рН 5,8-7,0.

Стандартные буферные растворы. Калия тетраоксалата раствор 0,05 М (12,61 г) KC₄H₃O₈ ? 2 Н₂О растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Насыщенный при 25 °С раствор калия гидротартрата. Избыток КС₄ Н₅ О₆ энергично встряхивают с водой при температуре 25 °С в течение 30 мин. Фильтруют или декантируют. Раствор используют свежеприготовленным.

Калия дигидроцитрата раствор 0,05 М (11,41 г) КС₆Н₇О₇ растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл. Раствор используют свежеприготовленным.

Калия гидрофталата раствор 0,05 М (10,13 г) КС₈Н₅О₄, предварительно высушенный при температуре от 110 до 135 °С до постоянной массы, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Калия дигидрофосфата раствор 0,025 М и динатрия гидрофосфата безводного раствор 0,025 М (3,39 г) КН₂РО₄ (3,53 г) Na₂HPO₄, предварительно высушенные в течение 2 ч при температуре от 110 до 130 °С до постоянной массы, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Калия дигидрофосфата раствор 0,0087 М и динатрия гидрофосфата безводного раствор 0,0303 М (1,18 г) KH₂PO₄ (4,30 г) Na₂HPO₄, предварительно высушенные при температуре от 110 до 130 °С, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Натрия тетрабората раствор 0,01 М (3,80 г) Na₂B₄O₇ ? 10 H₂O растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл. Хранят, защищая от углерода диоксида.

Натрия карбоната раствор 0,025 М и натрия гидрокарбоната раствор 0,025 М (2,64 г) Na₂CO₃ (2,09 г) NaHCO₃ растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

При измерении рН в неводных и смешанных растворителях, а также в некоторых коллоидных системах следует иметь в виду, что полученные значения рН являются условными.

Примечание. Буферные растворы хранят в хорошо закрытых склянках нейтрального стекла в течение 3 мес. При образовании осадков и видимых изменений буферные растворы не подлежат использованию.

Колориметрический метод измерения рН основан на свойстве индикаторов менять свою окраску в зависимости от активности ионов водорода в определенном интервале рН. Колориметрическое определение рН производят при помощи индикаторов и стандартных буферных растворов.

Сначала определяют приблизительную величину рН испытуемого раствора с помощью универсального индикатора (см. «Индикаторы, применяемые при объемных определениях»), для чего 2 мл испытуемого раствора смешивают в маленькой фарфоровой чашке с 5 каплями универсального индикатора и полученную окраску сравнивают с цветной шкалой.

После приближенного определения рН испытуемого раствора выбирают 5-6 буферных растворов, пригодных для данной области рН и отличающихся друг от друга на 0,2. В одну из пробирок наливают 10 мл испытуемого раствора, в другие - выбранные буферные растворы. Во все пробирки прибавляют по 2-3 капли раствора индикатора и сравнивают окраску испытуемого раствора с окрасками буферных растворов. При этом рН испытуемого раствора равен рН того буферного раствора, окраска которого совпадает с окраской испытуемого раствора.

Индикатор следует выбирать таким образом, чтобы предполагаемая величина рН попала в центральную часть интервала перехода окраски индикатора. Концентрация индикатора в испытуемом и буферном растворах должна быть одинаковой.

Потенциометрический метод имеет преимущества по сравнению с колориметрическим, он более точен и имеет меньше ограничений, связанных с присутствием в растворе окислителей или восстановителей, с белковой либо солевой ошибкой. Потенциометрический метод, в отличие от колориметрического, можно применять для определения рН в окрашенных, мутных или гелеобразных растворах.

Приготовление исходных веществ и буферных растворов, представленных в табл. 14-19, проводят из реактивов квалификации «Для рН-метрии» по ГОСТу 8.135-74.

Для приготовления буферных растворов могут использоваться также реактивы квалификации «химически чистый» (х.ч.) и «чистый для анализа» (ч.д.а.).

В случае применения реактивов квалификации х.ч. и ч.д.а. поступают, как указано ниже.

Таблица 14. Область рН 1,2-2,2

Таблица 15. Область рН 2,2-3,8

Таблица 16. Область рН 4,0-6,2

Таблица 17. Область рН 5,8-8,0

Таблица 18. Область рН 7,8-10,0

Таблица 19. Область рН 10,0-11,4

Примечание. Приведенные в табл. 19 значения воспроизводимы с точностью рН до ±0,05 при 25 °С.

Концентрацию ионов водорода в водных растворах характеризует рН, который определяют экспериментально. рН испытуемого раствора связан с рН стандартного раствора следующим уравнением:

где Е - потенциал электрода в испытуемом растворе, В; E_s - потенциал того же электрода в растворе с известным рН (рН,,), В. Температурный коэффициент (к), выраженный в вольтах, при любой температуре может быть рассчитан по формуле (табл. 20):

Потенциометрическое определение рН проводят путем измерения разности потенциалов между двумя соответствующими электродами, погруженными в испытуемый раствор: один из электродов чувствителен к ионам водорода (обычно стеклянный электрод), второй - электрод сравнения (например, насыщенный каломельный электрод).

Таблица 20. Значения к при различных температурах

Прибор. Измерительным прибором служит вольтметр с входным сопротивлением по крайней мере в 100 раз большим, чем сопротивление используемых электродов. Прибор обычно градуируют в единицах рН, и он должен иметь чувствительность, достаточную для обнаружения различия по крайней мере 0,05 единицы рН или 0,003 В.

Методика. Все измерения проводят при одной и той же температуре в интервале от 20 до 25 °C при отсутствии других указаний в частной статье. В табл. 21 показана зависимость значений рН от температуры для различных стандартных буферных растворов, используемых для калибровки. При необходимости учитывают температурные поправки в соответствии с инструкцией предприятия-производителя. Прибор калибруют при помощи буферного раствора калия гидрофталата (первичный стандарт) и одного из буферных растворов с другим значением рН (предпочтительно одного из приведенных в табл. 21). Показания прибора для третьего буферного раствора с промежуточным значением рН не должны отличаться больше, чем на 0,05 единицы рН от табличного значения рН этого раствора. Электроды погружают в испытуемый раствор и измеряют рН в тех же условиях, что и для буферных растворов. Если прибор используют часто, его калибровку проводят регулярно. В противном случае калибровка прибора должна проводиться перед каждым измерением. Все испытуемые растворы и стандартные буферные растворы должны быть приготовлены на воде, свободной от углерода диоксида, Р.

Стандартные буферные растворы. 0,05 M раствор калия тетраоксалата. (12,61 г) КС₄Н₃О₆ ? 2Н₂O растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л. Насыщенный при 25 °C раствор калия гидротартрата. Избыток КС₄Н₃О6 энергично встряхивают с водой, свободной от углерода диоксида, P, при температуре 25 °C фильтруют или декантируют. Раствор используют свежеприготовленным.

0,05 M растворкалия дигидроцитрата. (11,41 г) KC₆H₇O₇ растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л. Раствор используют свежеприготовленным.

0,05 M раствор калия гидрофталата. (10,13 г) KC₈H₅O₄, предварительно высушенного при температуре от 110 до 135 °C до постоянной массы, растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л.

0,025 M раствор калия дигидрофосфата и 0,025 M раствор натрия гидрофосфата. (3,39 г) КН₂РО₄ (3,53 г) Na₂HPO₄, предварительно высушенных в течение 2 ч при температуре от 110 до 130 °C до постоянной массы, растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л.

0,0087 M раствор калия дигидрофосфата и 0,0303 M раствор динатрия гидрофосфата. (1,18 г) KH₂PO₄ (4,30 г) Na₂HPO₄, предварительно высушенных при температуре от 110 до 130 °С, растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л.

0,01 M раствор натрия тетрабората. (3,80 г) Na₂B₄O₇ ? 10H₂O растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л. Хранят, защищая от углерода диоксида.

Таблица 21. Значения pH стандартных буферных растворов при различных температурах

0,025 M раствор натрия карбоната и 0,025 M раствор натрия гидрокарбоната. (2,64 г) Na₂ CO₃ и (2,09 г) NaHCO₃ растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, P и доводят объем раствора тем же растворителем до 1,0 л. Хранят, защищая от углерода диоксида.

Насыщенный при 25 °C раствор кальция гидроксида P Ca(OH)₂ встряхивают в течение 1 ч с водой, свободной от углерода диоксида, P при 25 °C и после отстаивания декантируют или фильтруют. Хранят, защищая от углерода диоксида.

Водородным показателем (рН) называется отрицательный десятичный логарифм активности ионов водорода:

Прибор. Подготовку прибора, электродной системы, а также калибровку прибора проводят в соответствии с инструкцией предприятия-производителя. Допускается использование в качестве электрода сравнения хлорсеребряного электрода, а также применение электролитического мостика.

Для приготовления стандартных буферных растворов могут быть использованы реактивы квалификации «Для рН-метрии», х.ч., ч.д.а. или реактивы импортного производства соответствующей чистоты. Допускается измерение рН в смешанных водно-органических растворителях. В этих случаях, а также для некоторых коллоидных систем полученные значения рН являются условными.

К 10 мл испытуемого раствора прибавляют 0,1 мл раствора индикатора, кроме исключений, указанных в табл. 22.

Состав:

Таблица 22. Реакция раствора, значение pH и цвет индикатора

Раствор фильтруют, разливают в ампулы из нейтрального стекла по 5, 10 и 50 мл и стерилизуют текучим паром при 100 °C в течение 30 мин.

Описание. Бесцветный прозрачный раствор.

Подлинность. 3 мл препарата дают первую и вторую реакции подлинности, указанные в статье «Natrii thiosulfas».

Раствор препарата дает характерные реакции на натрий.

Щелочность. На нейтрализацию 10 мл препарата должно расходоваться 4,1-4,9 мл 0,5 н раствора кислоты хлористоводородной (индикатор - метиловый оранжевый).

рН 7,8-8,4 (при потенциометрическом определении применяют стеклянный электрод).

Формула. СН₂О. М.м. 30,03.

Описание. Прозрачная бесцветная жидкость со своеобразным острым запахом. Смешивается во всех соотношениях с водой и спиртом. Стабилизируют прибавлением метилового спирта, не более 1,0%.

Подлинность. К 2 мл раствора нитрата серебра прибавляют 10-12 капель раствора аммиака и 2-3 капли препарата, нагревают на водяной бане с температурой 50-60 °C. При этом выделяется металлическое серебро в виде зеркала или серого осадка.

К раствору 0,02-0,03 г кислоты салициловой в 5 мл концентрированной кислоты серной прибавляют 2 капли препарата и нагревают, появляется красное окрашивание.

Плотность. 1,078-1,093.

Муравьиная кислота. 10 мл препарата титруют 0,1 н раствором натрия гидроксида до розового окрашивания (индикатор - фенолфталеин). 1 мл 0,1 н раствора натрия гидроксида соответствует 0,0046 г СН₂О₂, которой в растворе формальдегида должно быть не более 0,2%.

Цель: сформировать теоретические знания и закрепить практические навыки контроля качества субстанций по разделу «Количественное определение», руководствуясь соответствующими статьями ГФ.

В соответствии с ГФ XIII ОФС.1.1.0006.15 «Фармацевтические субстанции», ГФ PK ОФС «Субстанции» для количественного определения активного вещества субстанции следует использовать прямые физико-химические и химические методы анализа. Наибольшее применение для этих целей находят титриметрические методы и ВЭЖХ.

Количественное определение субстанции глюкозы по МФ III проводят по следующей методике.

Растворяют около 0,10 г препарата (точная навеска) в 50 мл воды, прибавляют 25,0 мл раствора йода (0,1 моль/л) и 10 мл раствора карбоната натрия (50 г/л). Оставляют на 20 мин в темном месте и прибавляют 15 мл серной кислоты (~100 г/л). Титруют избыток йода тиосульфатом натрия (0,1 моль/л), используя раствор крахмала в качестве индикатора. Повторяют операцию без испытуемого вещества и вносят необходимые поправки. Глюкоза содержит не менее 99,0 и не более 101,5% С₆Н₁₂О₆ в пересчете на безводное вещество.

1. Приготовление титрованных растворов и индикаторов. По ГФ XIII ОФС.1.3.0002.15 «Титрованные растворы» такие растворы обозначаются как растворы точно известной концентрации, предназначенные для целей титриметрического анализа.

Титрованные растворы готовят по точной навеске и далее устанавливают точную концентрацию по методике ГФ, рассчитывая поправочный коэффициент, либо для их приготовления используют фиксаналы, и в этом случае установка точной концентрации не требуется.

По ГФ PK ОФС.4.2.2 «Титрованные растворы» такие растворы следует готовить в соответствии с обычными требованиями химического анализа. Проверку точности используемого оборудования проводят для того, чтобы удостовериться в ее пригодности для предполагаемого применения. Концентрацию титрованных растворов выражают их молярной концентрацией - количеством вещества в молях, растворенного в 1 л раствора. Раствор, содержащий Ч молей в 1 л, обозначают ЧМ раствором. Концентрация титрованных растворов не должна отличаться от указанной более чем на 10%. Молярную концентрацию титрованных растворов определяют с точностью 0,2%.

Задание 1.1. Приготовьте 0,1 н раствор йода, используя фиксанал. При работе с фиксаналами выполняйте следующие правила.

Для приготовления точного раствора вначале теплой водой смывают надпись на ампуле и хорошо обтирают ее. В мерную колбу емкостью 1 л вставляют специальную воронку с вложенным в нее стеклянным бойком (обычно прилагается к каждой коробке фиксанала), острый конец которого должен быть обращен вверх. Если специальной воронки нет, можно пользоваться обычной химической воронкой, вставив в нее стеклянный боек. Когда боек будет правильно уложен в воронке, ампуле с фиксаналом дают свободно падать так, чтобы тонкое дно ампулы разбилось при ударе об острый конец бойка. После этого пробивают боковое углубление ампулы и дают содержимому вытечь. Затем, не изменяя положения ампулы, ее тщательно промывают дистиллированной водой. Для промывки рекомендуется употребить не менее чем шестикратное (по емкости ампулы) количество воды.

Промыв ампулу, ее удаляют, а раствор доливают дистиллированной водой до метки, закрывают колбу пробкой и встряхивают.

Кроме жидких фиксаналов, имеются и сухие. При приготовлении из них растворов ампулу вскрывают так же, как описано выше. Нужно лишь заботиться о том, чтобы воронка была совершенно сухая. Когда ампула будет разбита, все содержимое, осторожно встряхивая, высыпают в колбу, ампулу промывают дистиллированной водой.

Задание 1.2. Приготовьте раствор индикатора крахмала по методике ГФ XIII ОФС.1.3.0001.15 «Реактивы. Индикаторы».

Раствор индикатора. 1 г крахмала растворимого смешивают с 5 мл воды до получения однородной кашицы, и смесь медленно вливают при постоянном размешивании в 100 мл кипящей воды. Кипятят в течение 2 мин до получения слегка опалесцирующей жидкости.

Срок годности раствора 3 сут.

Задание 1.2.1. Приготовьте раствор индикатора крахмала по методике ГФ PK ОФС.4.1 «Реактивы. Стандартные растворы. Буферные растворы».

Крахмала раствор. 1085103. 1,0 г крахмала растворимого P растирают в порошок с 5 мл воды Р, полученную смесь медленно при постоянном перемешивании вливают в 100 мл кипящей воды P1, содержащей 10 мг ртути (II) йодида Р. При каждом использовании реактива проводят испытание на чувствительность.

Испытание на чувствительность. Смесь, состоящая из 1 мл раствора крахмала, 20 мл воды P1, около 50 мг калия йодида P и 0,05 мл раствора йода Р1, должна иметь синее окрашивание.

Задание 1.3. Приготовьте 0,1 н раствор натрия тиосульфата и установите его титр. По ГФ XIII ОФС.1.3.0002.15 «Титрованные растворы» 0,1 н раствор натрия тиосульфата готовят следующим образом.

25 г натрия тиосульфата и 0,2 г натрия карбоната растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, и доводят объем раствора той же водой до 1000,0 мл.

Установка титра. К 20,0 мл 0,0167 М раствора калия бромата прибавляют 40 мл воды, 10 мл 16,6% раствора калия йодида, 5 мл 7 М раствора кислоты хлористоводородной и титруют приготовленным раствором натрия тиосульфата, используя в качестве индикатора 1 мл 0,1% раствора крахмала. Индикатор прибавляют в конце титрования.

1 мл 0,1 М раствора натрия тиосульфата соответствует 2,784 мг КВЮ₃.

В ходе установления титра в растворе протекают следующие реакции:

KBrO₃ + 6KI + 6HCl = KBr + 3I₂ + 6KCl + 3H₂О, 2I₂ + 2Na₂S₂O₃ = 2NaI + Na₂S₄O₆.

Задание 1.3.1. Рассчитайте молярную концентрацию эквивалента натрия тиосульфата - c(1/Z * Na₂S₂O₃).

Молярная концентрация эквивалента вещества c(1/Z * Х) - это количество вещества эквивалента, содержащееся в 1 л раствора. Молярная концентрация и молярная концентрация эквивалента связаны между собой следующим соотношением:

Фактор эквивалентности (f_ЭКВ - это величина, обратная эквиваленту. Эквивалентом (Z) в окислительно-восстановительных реакциях называют число электронов, необходимое для окисления или восстановления одной молекулы вещества. Определите фактор эквивалентности калия бромата и рассчитайте молярную концентрацию эквивалента в опыте.

Определите фактор эквивалентности натрия тиосульфата в реакции с йодом. Рассчитайте молярную концентрацию эквивалента натрия тиосульфата по результату установления титра, пользуясь следующей формулой:

Задание 1.3.2. Рассчитайте поправочный коэффициент К для раствора натрия тиосульфата по формуле:

где С_практ - фактическая молярная концентрация эквивалента натрия тиосульфата, полученная в ходе установки титра, моль/л; С_теор - молярная концентрация эквивалента натрия тиосульфата, требуемая по методике, моль/л.

2. Укрепление и разбавление титрованных растворов. По ГФ XIII ОФС.1.3.0002.15 «Титрованные растворы» и ГФ PK ОФС.4.2.2 «Титрованные растворы» концентрация титрованных растворов не должна отличаться от указанной более чем на 2%.

Если в ходе установки титра обнаруживается, что K >1,0200, то необходимо разбавление раствора с помощью растворителя (вода очищенная). Объем воды для разбавления рассчитывают по формуле:

где V₁ - исходный объем раствора, л; с₁ - исходная концентрация раствора (установленная при определении титра), моль/л; с₂ - требуемая концентрация раствора, моль/л.

Если в ходе установки титра обнаруживается, что K <0,9800, то необходимо укрепление раствора с помощью раствора того же вещества, но с большей концентрацией. Объем раствора большей концентрации для укрепления рассчитывают по формуле

где V₁ - исходный объем раствора, л; с₁ - исходная концентрация раствора (установленная при определении титра), моль/л; с₂ - требуемая концентрация раствора, моль/л; У_укр - объем раствора с большей концентрацией, используемый для укрепления, л; с₃ - концентрация раствора, используемого для укрепления, моль/л.

3. Количественное определение глюкозы. Растворяют около 0,10 г препарата (точная навеска) в 50 мл воды (получают готовый раствор у преподавателя), прибавляют 25,0 мл 0,1 н раствора йода и 10 мл раствора натрия карбоната (50 г/л). Оставляют на 20 мин в темном месте и прибавляют 15 мл серной кислоты (~100 г/л). Титруют избыток йода 0,1 н натрия тиосульфатом, используя раствор крахмала в качестве индикатора. Повторяют операцию без испытуемого вещества и вносят необходимые поправки. Глюкоза содержит не менее 99,0 и не более 101,5% С₆ Н₁₂ О₆ в пересчете на безводное вещество.

В процессе титрования в растворе протекают следующие реакции:

В растворе глюкозы существуют в равновесии 5 разных ее форм, и они с различной скоростью подвергаются окислению натрия гипойодитом. Для количественного протекания реакции требуется время, которое затрачивается на установление в растворе глюкозы равновесия между различными ее формами.

Задание 3.1. Рассчитайте фактор эквивалентности и молярную массу эквивалента глюкозы. Рассчитайте титр натрия тиосульфата по глюкозе. Молярная масса эквивалента:

Титр титранта Т по определяемому веществу X:

Задание 3.2. Проведите количественное определение глюкозы. Обязательно сделайте контрольный опыт. Рассчитайте количественное содержание глюкозы по приведенной ниже формуле, %:

Задание 4. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Дайте определение, что такое титрованный раствор.

В лаборатории готовят 0,1 М раствор натрия гидроксида. В ходе установления титра выяснилось, что фактическая молярная концентрация натрия гидроксида в растворе составляет 0,112 моль/л. Нужно ли проводить разбавление или укрепление раствора? Рассчитайте объем воды или 1 М раствора натрия гидроксида для разбавления либо укрепления раствора соответственно, если это требуется.

К какой группе титриметрических методов относится йодометрическое титрование?

Рассчитайте фактор эквивалентности натрия гипоиодита в реакции с глюкозой.

Дайте определение, что такое молярная концентрация эквивалента.

В лаборатории готовят 0,1 М раствор йода. В ходе установления титра выяснилось, что фактическая молярная концентрация йода в растворе составляет 0,0891 моль/л. Нужно ли проводить разбавление или укрепление раствора? Рассчитайте объем воды или 0,5 М раствора йода для разбавления или укрепления раствора соответственно, если это требуется.

Какой способ титрования применяется при йодометрическом определении глюкозы?

Рассчитайте фактор эквивалентности глюкозы в реакции с натрия гипоиодитом.

Дайте определение, что такое поправочный коэффициент. В лаборатории готовят 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной. В ходе установления титра выяснилось, что фактическая молярная концентрация кислоты хлористоводородной в растворе составляет 0,109 моль/л. Нужно ли проводить разбавление или укрепление раствора? Рассчитайте объем воды или 0,5 М раствора кислоты хлористоводородной для разбавления или укрепления раствора соответственно, если это требуется.

Что такое контрольный опыт, и с какой целью он проводится?

Рассчитайте фактор эквивалентности натрия тиосульфата в реакции с йодом.

Как и в каком случае проводят разбавление титрованного раствора?

В лаборатории готовят 0,05 М раствор свинца нитрата. В ходе установления титра выяснилось, что фактическая молярная концентрация свинца нитрата в растворе составляет 0,044 моль/л. Нужно ли проводить разбавление или укрепление раствора? Рассчитайте объем воды или 0,1 М раствора свинца нитрата для разбавления либо укрепления раствора соответственно, если это требуется.

Какое вещество является окислителем при йодометрическом определении глюкозы?

Рассчитайте титр 0,01 н раствора йода по глюкозе.

Как и в каком случае проводят укрепление титрованного раствора?

В лаборатории готовят 0,05 М раствор хлорной кислоты. В ходе установления титра выяснилось, что фактическая молярная концентрация хлорной кислоты в растворе составляет 0,057 моль/л. Нужно ли проводить разбавление или укрепление раствора? Рассчитайте объем воды или 0,1 М раствора хлорной кислоты для разбавления либо укрепления раствора соответственно, если это требуется.

Какое вещество является восстановителем при йодометрическом определении глюкозы?

Рассчитайте титр 0,01 н раствора йода.

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки по контролю качества ЛС методом рефрактометрии.

Задание 1. Изучите физические и физико-химические основы метода рефрактометрии по ГФ XIII ОФС.1.2.1.0017.15 «Рефрактометрия» и ГФ PK ОФС.2.2.6 «Показатель преломления (индекс рефракции»).

Задание 2. Изучите устройство и основные узлы рефрактометра (рис. 1).

На корпусе прибора закреплены нижняя камера с измерительной призмой и верхняя камера с осветительной призмой. Окна верхней и нижней камер закрываются пробкой и ширмой. Каждая камера оборудована штуцерами для подачи термостатирующей жидкости (воды) для поддержания температуры 20 °С.

Для контроля температуры служит термометр, укрепленный на штуцере нижней камеры.

На передней крышке прибора размещены шкала и рукоятка с окуляром, предназначенная для совмещения визирной линии сетки с границей светотени.

Рис. 1. Устройство и основные углы рефрактометра

На оси рукоятки расположен сектор со шкалой и винтом для поворота дисперсионного компенсатора внутри прибора с целью устранения спектральной окраски границы светотени. Винт фиксирует сектор со шкалой в установленном положении. На корпусе прибора расположена пробка, которая закрывает отверстия, предназначенные для ввода ключа и установки нулевого пункта прибора.

Перед началом работы на рефрактометре необходимо проверить нулевой пункт прибора при температуре 20 ± 5 °С. Для этого следует открыть верхнюю камеру, плоскости верхней и нижней камер промыть дистиллированной водой и досуха протереть чистой салфеткой. Оплавленным концом стеклянной палочки нанести на плоскость измерительной призмы 1-2 капли дистиллированной воды и закрыть верхнюю камеру.

Рукоятку с окуляров опускают в нижнее положение и перемещают до тех пор, пока в поле зрения не появится граница светотени. Смещая осветитель вверх и вниз, добиваются наиболее контрастной освещенности поля зрения, а перемещая сектор со шкалой, поворачивают дисперсионный компенсатор и этим устраняют дисперсию света (рис. 2, а), добиваясь четкой границы светотени (рис. 2, б).

Рис. 2. Установка светотени. Объяснения в тексте

Поворачивая рукоятку окуляра, совмещают визирную линию сетки с границей светотени и проводят отсчет по шкале показателя преломления.

При правильной установке прибора на нулевой пункт граница светотени при 20 °С должна быть совмещена с делением n_D = 1,33299 шкалы показателя преломления.

В случае отклонения от этих значений прибор необходимо установить на ноль ключом. Для этого на корпусе прибора следует вывинтить пробку, вставить ключ через отверстие в корпусе на квадрат винта и вращением ключа в одну или другую сторону совместить линию границы светотени с делениемn_D = 1,33299 и визирной линией сетки. В этом же порядке проверить правильность установки.

Задание 3. Проведите количественное определение раствора глюкозы и раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии по приведенным ниже вариантам.

Проведите количественное определение 2% раствора глюкозы и 10% раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии. Приведите расчетную формулу, рассчитайте содержание глюкозы и сульфацил-натрия в растворах.

Проведите количественное определение 4% раствора глюкозы и 10% раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии. Приведите расчетную формулу, рассчитайте содержание глюкозы и сульфацил-натрия в растворах.

Проведите количественное определение 6% раствора глюкозы и 10% раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии. Приведите расчетную формулу, рассчитайте содержание глюкозы и сульфацил-натрия в растворах.

Проведите количественное определение 8% раствора глюкозы и 10% раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии. Приведите расчетную формулу, рассчитайте содержание глюкозы и сульфацил-натрия в растворах.

Проведите количественное определение 10% раствора глюкозы и 10% раствора сульфацил-натрия методом рефрактометрии. Приведите расчетную формулу, рассчитайте содержание глюкозы и сульфацил-натрия в растворах.

Задание 4. Ответьте на вопросы по вариантам.

Дайте определение понятия рефрактометрии и объясните, на каких физических и физико-химических законах основывается метод. Объясните порядок работы с рефрактометром.

Приведите расчетную формулу количественного содержания лекарственного вещества в двухкомпонентной смеси. Объясните, как настроить рефрактометр для работы.

Приведите расчетную формулу количественного содержания лекарственного вещества в однокомпонентном растворе. Расскажите об устройстве и основных узлах рефрактометра.

Дайте определение показателя преломления света. Объясните его зависимость от концентрации. Объясните принцип работы рефрактометра.

Обоснуйте использование рефрактометрии в методах экспресс-анализа для различных ЛП. Объясните использование способа интерполяции для расчетов концентрации в рефрактометрии.

Рефрактометрия - метод анализа ЛС, основанный на определении показателя преломления испытуемого вещества.

Показателем преломления (индексом рефракции) называют отношение скорости света в вакууме к скорости света в испытуемом веществе (абсолютный показатель преломления). На практике определяют так называемый относительный показатель преломления (n), который является отношением скорости света в воздухе к скорости света в испытуемом веществе.

Показатель преломления зависит от температуры и длины волны света, при которой проводят определение. В растворах показатель преломления зависит также от концентрации вещества и природы растворителя.

Рефрактометрию применяют для установления подлинности и чистоты вещества. Метод применяют также для определения концентрации вещества в растворе, которую находят по графику зависимости показателя преломления раствора от его концентрации. На графике выбирают интервал концентраций, в котором наблюдается линейная зависимость между показателем преломления и концентрацией. В этом интервале концентрацию испытуемого раствора (x, %) вычисляют по формуле:

x=(n - n_o)/F,

где n - показатель преломления испытуемого раствора; n_о - показатель преломления растворителя при той же температуре; F - фактор, равный величине прироста показателя преломления при увеличении концентрации испытуемого раствора на 1% (устанавливают экспериментально).

Для определения показателя преломления применяют рефрактометры. Определение проводят при температуре 20 ± 0,5 °С и длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм. Показатель преломления, определенный при таких условиях, обозначают индексом n_D.

Современные приборы откалиброваны таким образом, что отсчеты, полученные по их шкалам, соответствуют показателям преломления для линии D спектра натрия. При проведении измерений следует соблюдать указания в отношении соответствующего источника света, приведенные в инструкции к прибору. Если используют белый свет, то рефрактометр снабжен компенсирующей системой.

Цена деления термометра не должна превышать 0,5 °С.

Обычно измерения показателя преломления проводят на рефрактометрах Аббе, в основу которых положено явление полного внутреннего отражения при прохождении светом границы раздела двух сред с разными показателями преломления. Диапазон измеряемых показателей преломления при измерении в проходящем свете 1,3-1,7. Точность измерения показателя преломления должна быть не ниже ±(2 * 10^-4).

Могут быть использованы рефрактометры других типов с такой же или большей точностью.

Показатель n преломления среды относительно воздуха равен отношению синуса угла падения луча света в воздухе к синусу угла преломления луча света в данной среде. При отсутствии других указаний в частной ФС определение показателя преломления проводят при температуре 20 ± 0,5 °C и длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм; показатель преломления, определенный при таких условиях, обозначают индексом .

Рефрактометры обычно определяют критический угол. В таких приборах основной частью является призма с известным показателем преломления, находящаяся в контакте с анализируемой жидкостью. Для калибровки приборов используют стандартные жидкости, указанные в табл. 23. Значение показателя преломления каждой стандартной жидкости указывается на этикетке.

Таблица 23. Стандартные жидкости для калибровки рефрактометрии

При использовании белого света рефрактометры должны быть снабжены компенсационной системой. Прибор должен давать показания с точностью как минимум до третьего десятичного знака и обеспечивать возможность проведения операций при заданной температуре. Цена деления термометра не может превышать 0,5 °С.

К факторам, влияющим на величину показателя преломления, относятся:

Метод рефрактометрии применяют для установления подлинности, химической чистоты, содержания вещества в растворе, основываясь на графике зависимости показателя преломления от концентрации раствора. Диапазон значений показателя преломления, измеряемого в проходящем свете, должен быть 1,3-1,7, точность измерения при этом должна быть не ниже ±2 ? 10^-4. На графике выбирают интервал концентраций, в котором соблюдается линейная зависимость.

Концентрацию вещества (Х) в растворе вычисляют также по формуле:

где n - показатель преломления раствора; n₀ - показатель преломления растворителя при той же температуре; F - фактор, равный величине прироста показателя преломления при увеличении концентрации на 1% (устанавливается экспериментально).

Для калибровки рефрактометров, кроме стандартных жидкостей, указанных в табл. 23, используют воду очищенную, для которой

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки по контролю качества ЛС методом поляриметрии.

Поляриметрия - измерение степени поляризации света и угла поворота плоскости поляризации света при прохождении его через оптически активные вещества. Угол поворота в растворах зависит от их концентрации, поэтому метод поляриметрии широко применяют для измерения концентрации оптически активных веществ.

Оптическое вращение - способность вещества вращать плоскость поляризации при прохождении через него поляризованного света.

Поляризованный свет - световые волны, электромагнитные колебания которых распространяются только в одном направлении.

Все вещества в зависимости от их способности поляризовать свет разделяются на две группы: оптически неактивные и оптически активные, то есть вращающие плоскость поляризации. К последним относятся: глюкоза, пенициллин, стрептомицин и др. В зависимости от природы оптически активного вещества вращение плоскости поляризации может иметь различные направление и величину. Если плоскость поляризации света, проходящего через оптически активное вещество, вращается по часовой стрелке от наблюдателя, то вещество называют правовращающим и перед его названием ставят знак (+). Если же плоскость поляризации вращается против часовой стрелки, то вещество называют левовращающим и перед его названием ставят знак (-).

Угол вращения (α) - величина отклонения плоскости поляризации от начального положения, выраженная в угловых градусах.

Величина угла вращения зависит от природы оптически активного вещества, длины пути поляризованного света в оптически активной среде (чистом веществе или растворе) и длины волны света. Для растворов величина угла вращения зависит от природы растворителя и концентрации оптически активного вещества. Величина угла вращения прямо пропорциональна длине пути света, то есть толщине слоя раствора оптически активного вещества. Влияние температуры в большинстве случаев незначительно.

Удельное оптическое вращение выражается в радианах (рад), представляет собой вращение, вызванное слоем жидкости или раствора оптически активного вещества толщиной в 1 М, содержащим 1 г/мл вещества при прохождении через него поляризованного света с длиной волны D при температуре t. Удельное оптическое вращение - это константа оптически активного вещества.

При отсутствии специальных указаний определение оптического вращения проводят при температуре 20 °С и длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм. При определении α в растворах оптически активного вещества необходимо иметь в виду, что найденная величина может зависеть от природы растворителя и концентрации оптически активного вещества.

Замена растворителя может привести к изменению α не только по величине, но и по знаку. Поэтому, указывая величину удельного вращения, необходимо обозначать растворитель и выбранную для измерения концентрацию раствора. Удельное вращение определяют либо в пересчете на сухое вещество, либо из высушенной навески, что должно быть указано в частной ФС.

2. Устройство поляриметра. Принципиальная схема устройства полутеневого поляриметра представлена на рис. 3.

Основу устройства полутеневого поляриметра составляют две основные части: поляризатор, поляризующий световой луч, и анализатор, определяющий величину угла вращения плоскости поляризации луча (рис. 4).

Задание 3.1. Изучите ГФ XIII ОФС.1.2.1.0018.15 «Поляриметрия», ГФ PK ОФС.2.2.7 «Оптическое вращение».

Рис. 3. Принципиальная схема полутеневого поляриметра: 1 - источник света; 2 - конденсор; 3, 4 - полутеневой поляризатор; 5 - трубка с исследуемым оптически активным веществом; 6 - анализатор с отсчетным устройством; 7 - зрительная труба; 8 - окуляр отсчетного устройства

Рис. 4. Принцип работы полутеневого поляриметра

Задание 4.1. Проведите количественное определение глюкозы в растворе для инъекций методом поляриметрии по вариантам.

Содержание глюкозы в 1 мл препарата рассчитывают по формуле:

где α - угол вращения испытуемого раствора, °; L - толщина слоя жидкости, дм; V - объем препарата, взятый для определения, мл; 52,8 - удельное вращение глюкозы.

Концентрация глюкозы должна варьировать в пределах 5% заявленного количества.

10 мл препарата глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают и оставляют на 30 мин. Измеряют угол вращения полученного раствора на поляриметре.

25 мл препарата глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают и оставляют на 30 мин. Измеряют угол вращения полученного раствора на поляриметре.

5 мл препарата глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают и оставляют на 30 мин. Измеряют угол вращения полученного раствора на поляриметре.

20 мл препарата глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают и оставляют на 30 мин. Измеряют угол вращения полученного раствора на поляриметре.

15 мл препарата глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,2 мл раствора аммиака, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают и оставляют на 30 мин. Измеряют угол вращения полученного раствора на поляриметре.

Задание 5. Ответьте на вопросы по вариантам.

Какое физическое явление лежит в основе поляриметрии? Опишите принципиальное устройство поляриметра и расскажите принцип его работы.

Что такое поляризованный свет? Как способность света к поляризации используется в фармацевтическом анализе?

Какую информацию для фармацевтического анализа несет величина, которая измеряется при помощи поляриметра?

Что такое оптически активные вещества? Как это свойство веществ используется в фармацевтическом анализе?

Опишите правила определения концентрации при помощи поляриметра.

Для сравнительной оценки способности различных веществ вращать плоскость поляризации света вычисляют величину удельного вращения [α]. Удельное оптическое вращение представляет собой угол вращения α плоскости поляризации монохроматического света при длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм, выраженный в градусах, измеренный при температуре 20 °С, рассчитанный для толщины слоя испытуемого вещества 1 дм и приведенный к концентрации вещества, равной 1 г/мл. Выражается в градус-миллилитрах на дециметр-грамм

Иногда для измерения используют зеленую линию спектра ртути с длиной волны 546,1 нм.

При определении [α] в растворах оптически активного вещества необходимо иметь в виду, что найденная величина может зависеть от природы растворителя и концентрации оптически активного вещества.

Замена растворителя может привести к изменению [α] не только по величине, но и по знаку. Поэтому, приводя величину удельного вращения, необходимо указывать растворитель и выбранную для измерения концентрацию раствора.

Удельное вращение определяют либо в пересчете на сухое вещество, либо из высушенной навески, что должно быть указано в частной ФС.

Измерение угла вращения проводят на поляриметре, позволяющем определить величину угла вращения с точностью ±0,02 °С, при температуре 20 ± 0,5 °С. Измерения оптического вращения могут проводиться и при других значениях температуры, но в таких случаях в частной ФС должен быть указан способ учета температуры. Шкалу обычно проверяют при помощи сертифицированных кварцевых пластинок. Линейность шкалы может быть проверена при помощи растворов сахарозы.

Оптическое вращение растворов должно быть измерено в течение 30 мин с момента их приготовления; растворы или жидкие вещества должны быть прозрачными. При измерении прежде всего следует установить нулевую точку прибора или определить величину поправки с трубкой, заполненной чистым растворителем (при работе с растворами), или с пустой трубкой (при работе с жидкими веществами). После установки прибора на нулевую точку или определения величины поправки проводят основное измерение, которое повторяют не менее 3 раз.

Для получения величины угла вращения [α] показания прибора, полученные при измерениях, алгебраически суммируют с ранее найденной величиной поправки.

Величину удельного вращения [α] рассчитывают по одной из следующих формул.

Для веществ, находящихся в растворе:

где α - измеренный угол вращения,; L - толщина слоя, дм; C - концентрация раствора, г/100 мл раствора.

Для жидких веществ:

где α - измеренный угол вращения,; L - толщина слоя, дм; ρ - плотность жидкого вещества, г/мл.

Измерение величины угла вращения проводят либо для оценки чистоты оптически активного вещества, либо для определения его концентрации в растворе. Для оценки чистоты вещества по уравнению (1) или (2) рассчитывают величину его удельного вращения [α]. Концентрацию оптически активного вещества в растворе находят по формуле:

Поскольку величина [α] постоянна только в определенном интервале концентраций, возможность использования формулы (3) ограничивается этим интервалом.

Оптическое вращение - это свойство вещества вращать плоскость поляризации поляризованного света. Оптическое вращение считают положительным (+) для правовращающих веществ (то есть веществ, вращающих плоскость поляризации по часовой стрелке) и отрицательным (-) для левовращающих веществ. Удельное оптическое вращение выраженное в радианах (рад), представляет собой вращение, вызванное слоем жидкости или раствора толщиной 1 М, содержащим 1 кг оптически активного вещества в 1 м³ при прохождении через него поляризованного света с длиной волны λ при температуре t. Для практических целей удельное оптическое вращение обычно выражают в миллирадиан-метрах квадратных на килограмм (мрад м² кг^-1). В Фармакопее используют следующие определения. Угол оптического вращения жидких веществ представляет собой угол вращения плоскости поляризации α, выраженный в градусах (°), при длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм, измеренный при температуре 20 °C в толщине слоя 1 дм. Для растворов способ приготовления указывают в частной ФС.

Удельное оптическое вращение жидкости представляет собой угол вращения плоскости поляризации α, выраженный в градусах (°), при длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм, измеренный при температуре 20 °C, рассчитанный для толщины слоя 1 дм испытуемого вещества и деленный на плотность, выраженную в граммах на кубический сантиметр.

Удельное оптическое вращение вещества в растворе представляет собой угол вращения плоскости поляризации α, выраженный в градусах (°), при длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм, измеренный при температуре 20 °C в растворе испытуемого вещества и рассчитанный для слоя 1 дм в пересчете на содержание 1 г вещества в 1 мл раствора. Для удельного вращения вещества в растворе всегда указывают используемый растворитель и концентрацию раствора.

В Фармакопее удельное оптическое вращение выражают в градус-миллилитрах на дециметр-грамм:

Пересчет удельного вращения из единиц по Международной системе в единицы, используемые Фармакопеей, проводят по формуле:

В отдельных случаях, указанных в частной статье, угол вращения может быть измерен при температурах, отличных от 20 °С, и при других длинах волн.

Используемый поляриметр должен обеспечивать измерения с точностью до 0,01°. Шкалу обычно проверяют при помощи сертифицированных кварцевых пластинок. Линейность шкалы может быть проверена при помощи растворов сахарозы.

Методика. Определяют ноль поляриметра и угол вращения плоскости поляризации при длине волны линии D спектра натрия 589,3 нм при температуре 20 ± 0,5 °C Измерения оптического вращения могут проводиться при других температурах только в тех случаях, если в частной статье указан способ учета температуры. Определяют ноль прибора с закрытой трубкой; для жидкостей - с пустой трубкой; для растворов твердых веществ - с трубкой, заполненной соответствующим растворителем. Проводят не менее 5 измерений и рассчитывают среднее значение.

Удельное оптическое вращение вычисляют по формулам, обозначая правое и левое вращение соответственно (+) и (-).

Для жидкостей:

Для веществ в растворе:

где с - концентрация раствора, г/л.

Содержание с или с' растворенного вещества рассчитывают в граммах на литр или в процентах соответственно по формулам:

где α - угол вращения, измеренный при температуре 20 ± 0,5 °C, °; l - длина поляриметрической трубки, дм; ρ²⁰ - плотность при температуре 20 °C, г/см³.

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки по контролю качества ЛС методом спектрофотометрии в видимой области спектра.

1. Спектрофотометрический метод анализа. Спектрофотометрия - оптический метод анализа, основанный на измерении поглощения веществом света в ультрафиолетовой (УФ) (190-380 нм) или видимой (380-780 нм) областях спектра.

Анализ вещества методом спектрофотометрии проводят на спектрофотометрах. Основное отличие спектрофотометра от фотоэлектроколориметра в том, что в спектрофотометре между источником света и кюветой с определяемым веществом находится монохроматор, позволяющий проводить измерение при конкретной длине волны (рис. 5).

Задание 1. Изучите статьи ГФ XIII ОФС.1.2.1.1.0003.15 «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях» и ГФ PK ОФС.2.2.25 «Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях».

Рис. 5. Блок-схема спектрофотометра

Изучите методику количественного определения ЛС на основе закона Бугера-Ламберта-Бера.

2. Спектрофотометрическое определение сульфацетамида натрия по реакции образования имина (основания Шиффа). Метод основан на измерении оптической плотности растворов окрашенных иминов (оснований Шиффа), получаемых при взаимодействии сульфацетамида натрия с ванилином в присутствии кислоты хлористоводородной:

Реактивы:

Приготовление калибровочных растворов. В мерные колбы вместимостью 50 мл вносят 1,0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 мл стандартного раствора сульфацетамида натрия соответственно. В колбы прибавляют по 5 мл 10% раствора кислоты хлористоводородной, по 3 мл 2,5% раствора ванилина в спирте и доводят объем колбы водой очищенной до метки. Содержимое колбы тщательно перемешивают и оставляют на 5 мин в темном месте.

Приготовление раствора сравнения. 3,0 мл 2,5% раствора ванилина в спирте помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляют 5,0 мл 10% раствора кислоты хлористоводородной и доводят объем колбы водой очищенной до метки. Тщательно перемешивают содержимое колбы.

Построение калибровочного графика. Измеряют оптическую плотность калибровочных растворов на спектрофотометре при длине волны λ_max =400,0 нм, используя приготовленный раствор сравнения. Измерение оптической плотности калибровочных растворов проводят в порядке увеличения их концентрации. Перед каждым измерением кювету ополаскивают испытуемым раствором.

Анализ ЛП. 1,0 мл испытуемого препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 5 мл 10% раствора кислоты хлористоводородной, 3 мл 2,5% раствора ванилина, доводят объем колбы водой очищенной до метки и тщательно перемешивают. Через 5 мин измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны λ_max =400,0 нм, используя приготовленный раствор сравнения.

Задание 2. Построение калибровочного графика.

1. Приготовьте калибровочные растворы. Для этого в тетради нарисуйте и заполните таблицу (образец таблицы см. ниже), рассчитав необходимые значения концентрации сульфацетамида натрия для каждого раствора.

Концентрацию сульфацетамида натрия в растворе вычислите по формуле:

где С - концентрация вещества в приготовленном растворе, г/100 мл; С_ст % - содержание вещества в исходном растворе стандартного образца, %; У_ал - объем аликвоты исходного раствора стандартного образца, мл; V_колбы - объем колбы, использовавшейся для приготовления калибровочного раствора, мл.

2. Приготовьте калибровочные растворы согласно указанной выше методике и данным из заполненной таблицы.

3. Приготовьте раствор сравнения согласно указанной выше методике.

4. Измерьте оптическую плотность калибровочных растворов на спектрофотометре, используя приготовленный раствор сравнения. Внесите полученные данные в таблицу.

5. Постройте калибровочный график, используя таблицу. По оси абсцисс откладываются рассчитанные значения концентрации сульфа-цетамида натрия По оси ординат откладывают полученные значения оптической плотности.

Задание 3. Проведите анализ препарата.

1. Приготовьте испытуемый раствор исследуемого препарата (10% глазные капли сульфацил-натрия). Измерьте оптическую плотность на спектрофотометре. Определите концентрацию сульфацил-натрия в испытуемом растворе с использованием калибровочного графика.

2. Рассчитайте процентное содержание сульфацил-натрия в препарате по формуле:

где С_х % - содержание сульфацетамида натрия в препарате, %; С_хгр - концентрация препарата в испытуемом растворе, определенная по калибровочному графику, г/100 мл; V_колбы - объем колбы, использовавшейся для приготовления испытуемого раствора, мл; V_ал - объем аликвоты препарата, отобранной для приготовления испытуемого раствора.

3. Сделайте вывод о качестве приготовленного препарата в соответствии с приказом № 305 Министерства здравоохранения РФ от 16.10.1997 «О нормах отклонений, допустимых при приготовлении лекарственных средств и фасовке промышленной продукции в аптеках» и приказом Министерства здравоохранения РК от 19.11.2009 № 747 «Об утверждении Правил изготовления лекарственных препаратов и изделий медицинского назначения».

Задание 4. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Что такое оптическая плотность? От чего зависит ее величина?

Что является источником света в спектрофотометре?

Что представляет собой раствор сравнения при измерении оптической плотности?

Запишите закон Бугера-Ламберта-Бера. Что он описывает? Что обозначает каждая величина?

Приведите блок-схему УФ-спектрофотометра и обозначьте каждую составную часть.

Как выбирается длина волны, при которой проводят измерения спектрофотометрическим методом?

Что такое удельный показатель поглощения? Как он связан с молекулярной массой вещества?

Как проводят качественный анализ препарата методом спектрофотометрии в УФ-области спектра?

Из какого материала и почему изготавливают кюветы для проб в спектрофотометрии?

Какие вещества поглощают свет в видимой области спектра? Приведите блок-схему спектрофотометра, составные части прибора. Что такое раствор сравнения? Как его готовить и зачем он используется в спектрофотометрии?

Какие вещества поглощают свет в УФ-области спектра?

Как проводят количественный анализ при помощи метода спектрофотометрии в видимой области спектра?

Какую роль выполняет монохроматор? Что может служить монохроматором?

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки количественного определения препаратов, содержащих первичную ароматическую аминогруппу, методом нитритометрии, руководствуясь ГФ XIII

ОФС.1.2.3.0013.15 «Нитритометрия» и ГФ PK ОФС.2.5.8 «Определение аминного азота в соединениях, содержащих первичную ароматическую аминогруппу».

Нитритометрия - метод окислительно-восстановительного титрования, основанный на титровании веществ, содержащих первичную ароматическую аминогруппу, натрия нитритом в кислой среде.

Характерной особенностью нитритометрии является образование в качестве конечного продукта титрования соли диазония, относительно нестойкого продукта. Поэтому при проведении анализа методом нитритометрического титрования требуется соблюдать специальные условия, повышающие выход конечного продукта:

Задание 1. Изучите общие статьи ГФ XIII ОФС.1.2.3.0013.15 «Нитритометрия» и ГФ PK ОФС.2.5.8 «Определение аминного азота в соединениях, содержащих первичную ароматическую аминогруппу».

Методика. Количественное определение 10% раствора сульфацетамида натрия методом нитритометрического титрования проводят следующим образом.

Реактивы:

В основе нитритометрического титрования сульфацетамида натрия лежит реакция образования соли диазония:

Задание 2. Проведите количественное определение сульфацетамида натрия методом нитритометрического титрования. Рассчитайте титр раствора натрия нитрита по сульфацетамиду натрия. Молярная масса сульфацетамида натрия - 254,24 г/моль.

Проведите анализ 10% раствора сульфацетамида натрия согласно приведенной выше методике.

Рассчитайте количественное содержание сульфацетамида натрия в препарате и сделайте вывод о качестве приготовленного препарата в соответствии с приказами № 305 Министерства здравоохранения РФ от 16.10.1997 «О нормах отклонений, допустимых при приготовлении лекарственных средств и фасовке промышленной продукции в аптеках», Министерства здравоохранения РК от 19.11.2009 № 747 «Об утверждении Правил изготовления лекарственных препаратов и изделий медицинского назначения».

Задание 3. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Какие лекарственные вещества можно определять количественно методом нитритометрического титрования? Приведите примеры.

Какие электроды используются в нитритометрии при потенциометрическом определении конечной точки титрования?

Как устанавливают точку эквивалентности при нитритометрическом титровании?

Как нитритометрически провести количественное определение ЛС, содержащего ароматическую нитрогруппу? Приведите пример.

Какие условия необходимо соблюдать при проведении нитритометрического титрования? Чем они обусловлены?

К какой группе титриметрических методов относится нитритометрия?

Какие индикаторы используются в нитритометрическом титровании?

Для чего в титруемый раствор прибавляют при нитритометрии кислоту хлористоводородную?

В каких условиях протекает реакция диазотирования?

Рассчитайте фактор эквивалентности натрия нитрита в реакции с сульфацетамидом натрия.

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки по статистической обработке результатов, полученных при количественном определении ЛС.

Статистическую обработку результатов проводят с целью установления влияния на результат количественного определения случайных ошибок и для расчета погрешности.

Средний результат рассчитывается по формуле:

где n - число измерений.

Выборочная дисперсия S² характеризует разброс интервалов относительно среднего значения и рассчитывается по формуле:

Стандартное отклонение S характеризует воспроизводимость метода. С уменьшением стандартного отклонения возрастает воспроизводимость метода:

Стандартное отклонение среднего S рассчитывают по формуле:

Доверительный интервал Ах среднего рассчитывают по формуле:

где t (P; f - критерий Стьюдента при доверительной вероятности Р = 95% и числе степеней свободы f = n - 1 (табл. 24).

Доверительный интервал среднего показывает, насколько точным является метод. Чем меньше доверительный интервал среднего, тем точнее метод.

Относительную ошибку Е_отн вычисляют по формуле:

Таблица 24. Критерий Стьюдента t (P; f)

Задание 1. Статистическая обработка количественного определения сульфацетамида натрия. Постройте и заполните таблицу (образец таблицы см. ниже).

Рассчитайте интервальное значение определяемой величины:

На основании статистической обработки результатов количественного определения сульфацетамида натрия спектрофотометрическим, нитритометрическим и рефрактометрическим методами сделайте вывод о том, какой из трех методов обладает большей точностью и воспроизводимостью.

Задание 2. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Какая статистическая величина служит показателем точности?

Как рассчитать относительную ошибку для опыта?

Для чего рассчитывают стандартное отклонение?

Как рассчитать доверительный интервал среднего?

Какая статистическая величина служит показателем воспроизводимости?

Как рассчитать стандартное отклонение среднего?

Для чего проводят статистическую обработку результатов?

Как рассчитывают стандартное отклонение?

Для чего рассчитывают доверительный интервал среднего значения?

Как рассчитать выборочную дисперсию? Для чего рассчитывают эту величину?

Спектроскопические методы анализа основаны на избирательном поглощении электромагнитного излучения анализируемым веществом и служат для исследования строения, идентификации и количественного определения светопоглощающих соединений.

В зависимости от используемой аппаратуры в фармацевтическом анализе различают следующие методы анализа, основанные на поглощении электромагнитного излучения и испускании света:

Ряд длин волн, для которых проводят измерения методами абсорбционной спектрофотометрии, охватывает спектральную область от коротких длин волн в УФ-области до длинных в ИК-области. Для удобства этот спектральный ряд делят на следующие диапазоны длин волн: УФ (от 190 до 380 нм), видимый (от 380 до 780 нм), ИК (от 0,78 до 400 мкм).

Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях. Уменьшение интенсивности монохроматического излучения, проходящего через гомогенную поглощающую среду, количественно описывается законом Бугера-Ламберта-Бера:

где Т - пропускание, отношение интенсивности светового потока, прошедшего через вещество, к интенсивности падающего на вещество светового потока: Т = I/I₀ ; I - интенсивность прошедшего монохроматического излучения; I₀ - интенсивность падающего монохроматического излучения; ε - молярный показатель поглощения; с - молярная концентрация вещества в растворе; b - длина оптического пути или толщина слоя, см.

Величина log10(1/7), обозначаемая также буквой А₁ - измеряемая величина, которая называется оптической плотностью. При отсутствии других физико-химических факторов измеренная оптическая плотность пропорциональна концентрации вещества в растворе и толщине слоя.

Величина представляет собой удельный показатель поглощения, то есть оптическую плотность раствора вещества с концентрацией 10 г/л (1 г/100 мл) в кювете с толщиной слоя 1 см. Величины и ε связаны соотношением:

где М.м. - молекулярная масса исследуемого вещества.

Измерение оптической плотности. Если нет других указаний в ФС, оптическую плотность вещества измеряют при указанной длине волны с использованием кювет с толщиной слоя 1 см и при температуре 20 ± 1 °С, сравнивая ее с плотностью того же растворителя или той же смеси растворителей, в которой растворено вещество. При измерении оптической плотности раствора при данной длине волны оптическая плотность кюветы с растворителем, измеренная в сравнении воздуха при той же длине волны, не должна превышать 0,9 и желательно, чтобы она была не менее 0,2.

Спектр поглощения представляют таким образом, чтобы оптическая плотность или ее функция была отмечена по оси ординат, а длина волны или ее функция - по оси абсцисс.

Если в ФС для максимума поглощения указывают только одну длину волны, это означает, что полученное значение максимума не должно отличаться от указанного более чем на ±2 нм.

Приборы. Спектрофотометры, предназначенные для измерений в УФ и видимой областях спектра, состоят из оптической системы, выделяющей монохроматическое излучение в области от 190 до 800 нм и обеспечивающей его прохождение через образец, и устройства для измерения оптической плотности.

Основные части этих приборов включают: источник излучения, диспергирующий прибор (призма или решетка), щель для выделения полосы длин волн, кюветы для образцов, детектор излучаемой энергии, встроенные усилители и измерительные приборы.

Проверка шкалы оптической плотности. Для проверки шкалы оптической плотности используют стандартные неорганические стеклянные фильтры или раствор калия дихромата при длинах волн, указанных в табл. 25, где для каждой длины волны приведено точное значение удельного показателя поглощения и допустимые пределы.

Раствор калия дихромата для проверки шкалы оптической плотности при 235, 257, 313 и 350 нм готовят следующим образом: от 57,0 до 63,0 мг (точная навеска) калия дихромата, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 130 °С, растворяют в 0,005 М растворе кислоты серной и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл. Для проверки оптической плотности при 430 нм растворяют 57,0-63,0 мг (точная навеска) калия дихромата в 0,005 М растворе кислоты серной и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Предельный уровень рассеянного света. Рассеянный свет может быть обнаружен при данной длине волны с использованием соответствующих фильтров или растворов. Например, оптическая плотность раствора 12 г/л калия хлорида в кювете с толщиной слоя 1 см резко увеличивается между 220 и 200 нм и должна быть больше 2 при 198 нм при использовании воды в качестве раствора сравнения.

Таблица 25. Удельный показатель поглощения стандартов при различных длинах волн

Разрешающая способность (для качественного анализа). Если есть указание в ФС, определяют разрешающую способность спектрофотометра следующим образом. Записывают спектр 0,02% (о/о) раствора толуола в гексане. Минимально допустимое значение отношения оптической плотности в максимуме поглощения при 269 нм к оптической плотности в минимуме поглощения при 266 нм указывают в ФС.

Кюветы. Допустимые отклонения в толщине слоя используемых кювет должны быть не более ±0,005 см. Кюветы, предназначенные для испытуемого раствора и раствора сравнения, должны иметь одинаковое пропускание (или оптическую плотность) при заполнении одним и тем же растворителем. В противном случае это различие следует учитывать.

Требования к растворителям. Для определений, проводимых в УФ и видимой областях, образец анализируемого вещества растворяют в соответствующем растворителе, который должен быть оптически прозрачным в используемой области длин волн. Для этих областей длин волн пригодны многие растворители, в том числе вода, спирты, хлороформ, низшие углеводороды, эфиры и разбавленные растворы сильных кислот и щелочей.

Идентификация. Абсорбционную спектрофотометрию в УФ и видимой областях спектра применяют для определения подлинности ЛС путем:

Возможны и другие варианты применения, оговоренные в фармакопейных статьях.

Количественное определение. Определение концентрации веществ спектрофотометрическим методом основано на использовании закона Бугера-Ламберта-Бера:

где С - концентрация вещества, г/100 мл; А - оптическая плотность испытуемого раствора; - удельный показатель поглощения вещества; b - длина оптического пути или толщина слоя, см.

В ряде случаев даже при использовании монохроматического излучения могут наблюдаться отклонения от закона Бугера-Ламберта-Бера, обусловленные процессами диссоциации, ассоциации и комплексообразования. Поэтому предварительно следует проверить линейность зависимости оптической плотности раствора от концентрации в аналитической области. При наличии отклонений от линейной зависимости следует пользоваться не формулой (3), а экспериментально найденной зависимостью.

Обычно определение концентрации спектрофотометрическим методом проводят с использованием стандартного образца. Расчет концентрации основан на использовании уравнения:

где С и С₀ - концентрации испытуемого раствора и раствора стандартного образца соответственно; А и А₀ - оптические плотности испытуемого раствора и раствора стандартного образца соответственно.

Концентрации испытуемого раствора и раствора стандартного образца должны быть близки.

Вначале измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца, приготовленного, как указано в ФС, затем проводят измерение оптической плотности испытуемого раствора. Второе измерение проводят сразу после первого с использованием той же кюветы, в тех же экспериментальных условиях.

Метод с использованием раствора стандартного образца более точен и надежен. Возможность применения значения удельного показателя поглощения в каждом конкретном случае следует обосновывать. Обычно метод с использованием удельного показателя поглощения применим при допусках содержания анализируемого вещества не менее ±10% номинального содержания.

Многокомпонентный спектрофотометрический анализ (анализ смесей) применяют для одновременного количественного определения нескольких компонентов ЛС, каждое из которых подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера.

Количественное определение в многокомпонентном спектрофотометрическом анализе основывается обычно на использовании уравнения:

где A_i - оптическая плотность испытуемого раствора при i-й длине волны; Е_ij - показатели поглощения (зависящие от способа выражения концентрации) j-го компонента образца при i -й аналитической длине волны; C_j - концентрация j -го компонента образца.

Соответствующие методики проведения анализа и расчетные формулы указываются в фармакопейных статьях.

Определение оптической плотности. Оптическая плотность D раствора представляет собой десятичный логарифм обратной величины пропускания T для монохроматического излучения и выражается соотношением:

где I ₀ - интенсивность испускаемого монохроматического излучения;

I - интенсивность прошедшего монохроматического излучения.

При отсутствии других физико-химических факторов измеренная оптическая плотность D пропорциональна длине пути b, через который проходит излучение, и концентрации с вещества в растворе в соответствии с уравнением:

где ε - молярный показатель поглощения; b - длина оптического пути, см; с - концентрация вещества в растворе, моль/л.

Величина представляет собой удельный показатель поглощения, то есть оптическую плотность раствора вещества с концентрацией 10 г/л в кювете с толщиной слоя 1 см:

При отсутствии других указаний в частной статье измерение оптической плотности проводят при указанной длине волны с использованием кюветы с толщиной слоя 1 см и при температуре 20 ± 1 °C. При отсутствии других указаний в частной статье измерение проводят по сравнению с тем же растворителем или той же смесью растворителей, в которой растворено вещество. Оптическая плотность растворителя, измеренная против воздуха при указанной длине волны, не должна превышать 0,4 и желательно, чтобы она была меньше 0,2. Спектр поглощения представляют таким образом, чтобы оптическая плотность или ее некоторая функция была приведена по оси ординат, а длина волны или некоторая функция от длины волны - по оси абсцисс. Если в частной статье приводят только одно значение для положения максимума поглощения, это означает, что полученное значение максимума не должно отличаться от указанного более чем на ±2 нм.

Прибор. Спектрофотометр, предназначенный для измерений в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, состоит из оптической системы, выделяющей монохроматическое излучение в области от 200 до 800 нм, и устройства для измерения оптической плотности.

Проверка шкалы длин волн. Для проверки шкалы длин волн используют линии водородной или дейтериевой разрядной лампы либо линии паров ртути, а также максимумы поглощения раствора гольмия перхлората Р, которые представлены в табл. 26. Допустимое отклонение составляет ±1 нм для ультрафиолетового и ±3 нм для видимого диапазонов.

Проверка шкалы оптической плотности. Проверяют значения оптических плотностей, используя подходящий фильтр или раствор калия дихромата Р при длинах волн, указанных в табл. 27. Кроме того, в табл. 27 приведены точные значения удельного показателя поглощения и его допустимые пределы для каждой длины волны. Допустимые пределы значений оптической плотности ±0,01.

Таблица 26. Значения максимума поглощения (или испускания) для проверки шкалы длин волн

Для проверки шкалы оптических плотностей используют раствор калия дихромата, приготовленный следующим образом. От 57,0 до 63,0 мг (точную навеску) калия дихромата P1, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 130 °C, растворяют в 0,005 M растворе кислоты серной и доводят до 1,0 л этим же растворителем.

Таблица 27. Значения удельного показателя поглощения и допустимые пределы

Предельный уровень рассеянного света. Рассеянный свет может быть определен при данной длине волны с использованием соответствующих фильтров или растворов: например, оптическая плотность раствора 12 г/л калия хлорида Р в кювете с толщиной слоя 1 см при 200 нм при использовании воды Р в качестве компенсационного раствора должна быть больше 2.

Разрешающая способность (для качественного анализа). Если указано в частных статьях, то определяют разрешающую способность спектрофотометра следующим образом. Записывают спектр 0,02% (об/об) раствора толуола P в гексане Р.

Минимально допустимое значение отношения оптической плотности в максимуме поглощения при 269 нм к оптической плотности в минимуме поглощения при 266 нм указывают в частной статье.

Ширина спектральной щели (для количественного анализа). В случае использования спектрофотометра с изменяемой шириной спектральной щели при выбранной длине волны возможны погрешности, связанные с шириной этой щели. Для их исключения ширина спектральной щели должна быть малой по сравнению с полушириной полосы поглощения и в то же время максимально большой для получения высокого уровня l₀. Таким образом, ширина щели должна быть такой, чтобы дальнейшее ее уменьшение не изменяло величину измеряемой оптической плотности.

Кюветы. Допустимые вариации в толщине слоя используемых кювет должны быть не более ±0,005 см. Кюветы, предназначенные для испытуемого и компенсационного растворов, должны иметь одинаковое пропускание (или оптическую плотность) при заполнении одним и тем же растворителем. В противном случае это различие следует учитывать. Кюветы должны быть чистыми и требуют осторожного обращения.

Нитритометрия - метод титриметрического анализа, при котором в качестве титрованного раствора используется раствор натрия нитрита.

Применяется для количественного определения соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую аминогруппу, для определения гидразидов, а также ароматических нитросоединений после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы.

Методика. Если не указано иначе, точную навеску образца ЛС, указанную в ФС, растворяют в смеси 10 мл воды и 10 мл 8,3% раствора кислоты хлористоводородной. Прибавляют воду до общего объема 80 мл, 1 г калия бромида и при постоянном перемешивании титруют 0,1 М раствором натрия нитрита. В начале титрования прибавляют раствор натрия нитрита со скоростью 2 мл/мин, а в конце (за 0,5 мл до эквивалентного количества) - 0,05 мл/мин.

Титрование проводят при температуре раствора 15-20 °С, но в некоторых случаях требуется охлаждение до 0-5 °С.

При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного применяют платиновый электрод, в качестве электродов сравнения - хлорсеребряный или насыщенный каломельный электрод.

При амперометрическом титровании на электроды накладывают разность потенциалов 0,3-0,4 В, если не указано иначе в ФС.

Точку эквивалентности определяют электрометрическими методами (потенциометрическое титрование, титрование «до полного прекращения тока») или с помощью внутренних индикаторов и внешнего индикатора (йодкрахмальная бумага).

В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин 00 (4 капли раствора), тропеолин 00 в смеси с метиленовым синим (4 капли раствора тропеолина 00 и 2 капли раствора метиленового синего), нейтральный красный (2 капли в начале и 2 капли в конце титрования).

Титрование с тропеолином 00 проводят до перехода окраски от красной к желтой, со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим - от красно-фиолетовой к голубой, с нейтральным красным - от красно-фиолетовой к синей. Выдержку в конце титрования с нейтральным красным увеличивают до 2 мин.

Титрование с йодкрахмальной бумагой ведут до тех пор, пока капля титруемого раствора, взятая через 1 мин после прибавления натрия нитрита раствора 0,1 М, не будет немедленно вызывать синее окрашивание на бумаге. В некоторых случаях выдержка может быть увеличена, о чем должно быть указано в ФС.

Параллельно проводят контрольный опыт.

Навеску испытуемого вещества, указанную в частной ФС, растворяют в 50 мл кислоты хлористоводородной разбавленной Р или в другом указанном растворителе и прибавляют 3 г калия бромида Р. Охлаждают в ледяной воде и титруют, медленно прибавляя при постоянном перемешивании 0,1 М раствор натрия нитрита. Конечную точку титрования устанавливают электрометрически или с помощью индикатора, указанного в частной ФС.

Нитритометрическое титрование применяют для количественного определения соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую аминогруппу, для определения гидразидов, а также ароматических нитросоединений после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы.

Титруемый раствор предварительно охлаждают в ледяной воде и проводят титрование, поддерживая температуру раствора около 15 °С, при отсутствии других указаний в частной статье. В начале титрования прибавляют 0,1 М раствор натрия нитрита со скоростью 2 мл/мин. Перед окончанием титрования (приблизительно 0,5 мл до эквивалентного количества) скорость титрования уменьшают до 0,05 мл/мин.

Точку эквивалентности определяют электрометрическими методами (2.2.19 или 2.2.20) или с помощью внутренних либо внешних индикаторов.

В качестве внешнего индикатора используют йодкрахмальную бумагу. Титрование проводят до тех пор, пока после прибавления 0,1 М раствора натрия нитрита капля титруемого раствора, взятая при помощи стеклянной палочки, через 1 мин (при отсутствии других указаний в частной статье) не будет вызывать незначительное синее окрашивание бумаги. Параллельно проводят контрольное титрование.

В качестве внутреннего индикатора применяют тропеолин 00 (0,2 мл раствора тропеолина 00), тропеолин 00 в смеси с метиленовым синим (0,2 мл раствора тропеолина 00 и 0,1 мл раствора метиленового синего) или раствор нейтрального красного (0,1 мл раствора в начале титрования и 0,1 мл перед окончанием титрования). Титрование с тропеолином 00 проводят до перехода окрашивания от красного до желтого, со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим - от красно-фиолетового до голубого, с нейтральным красным - от красно-фиолетового до синего. Перед окончанием титрования с нейтральным красным выдержку увеличивают до 2 мин.

Цель: закрепить теоретические знания и практические навыки по контролю качества ЛС методом тонкослойной хроматографии, руководствуясь соответствующими фармакопейными статьями.

1. Теоретические основы ТСХ. ТСХ занимает одно из ведущих мест в качественном и полуколичественном анализе ЛС.

Задание 1. Изучите теоретические основы ТСХ и особенности ее применения в фармакопейном анализе по ГФ XIII ОФС.1.2.1.2.0001.15 «Хроматография», ГФ XIII ОФС.1.2.1.2.0003.15 «Тонкослойная хроматография» и ГФ PK ОФС.2.2.27 «Тонкослойная хроматография».

2. Анализ подлинности ЛС методом ТСХ. Примером использования метода ТСХ в фармакопейном анализе может служить испытание на подлинность препарата «Хинина дигидрохлорид, внутривенная инфузия» по Британской Фармакопее (Br.Ph.). Препарат представляет собой концентрат, из которого готовят инфузионный раствор непосредственно перед применением в лечебном учреждении.

Методика (Br.Ph.). Необходимо использовать следующие компоненты.

Испытуемый раствор: экстрагируют аликвоту концентрата, содержащую 0,1 г хинина дигидрохлорида, с помощью 10 мл смеси 2 объемов хлороформа и 1 объема этанола, фильтруют.

Раствор сравнения 1: готовят 1,0% раствор стандартного образца хинина сульфата в смеси 2 объемов хлороформа и 1 объема этанола.

Раствор сравнения 2: готовят 1,0% раствор стандартных образцов хинидина сульфата и хинина сульфата в смеси 2 объемов хлороформа и 1 объема этанола.

На линию старта хроматографической пластины наносят 2 мкл (20 мкг) испытуемого раствора, 2 мкл раствора сравнения 1 (20 мкг), 2 мкл раствора сравнения 2 (по 20 мкг). Высушивают пластину на воздухе. Помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой, предварительно насыщенную ее парами в течение часа. Проводят элюирование восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы достигнет линии финиша (10 см от линии старта), пластину вынимают и сушат на воздухе.

Детектирование: опрыскивают пластину 0,05 М спиртовым раствором кислоты серной и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 и 360 нм, а затем опрыскивают разведенным раствором калия йодовисмутата (реактив Драгендорфа).

Основное пятно на хроматограмме, полученное с испытуемым раствором, соответствует основному пятну, полученному с раствором сравнения 1.

Пригодность системы: система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения 2 видно 2 четко разделенных пятна.

Задание 2.1. Приготовьте подвижную фазу по описанной выше методике, поместите ее в хроматографическую камеру. Закройте камеру и оставьте на 1 ч насыщаться парами подвижной фазы.

Задание 2.2. Подготовьте хроматографические пластины: вырежьте куски пластинки прямоугольной формы оптимального размера, начертите линию старта (учтите требования ГФ XIII ОФС.1.2.1.2.0003.15 «Тонкослойная хроматография» и ГФ PK ОФС.2.2.27 «Тонкослойная хроматография» к нанесению проб).

Задание 2.3. Приготовьте испытуемый раствор и растворы сравнения 1 и 2 по методике Br.Ph. и нанесите их на линию старта хроматографической пластины.

Задание 2.4. Поместите пластины в хроматографическую камеру. Проведите элюирование до тех пор, пока фронт подвижной фазы не достигнет линии финиша. Достаньте пластину из камеры и высушите на воздухе. После обработки хроматограммы 0,05 М спиртовым раствором кислоты серной рассмотрите пластину в УФ-свете при длине волны 254 и 360 нм. Опишите и зарисуйте в тетрадях форму, размер и цвет пятен. Затем обработайте пластину раствором калия йодовисмутата (реактив Драгендорфа). Опишите и зарисуйте в тетрадях форму, размер и цвет пятен.

3. Интерпретация результатов анализа. Для правильной интерпретации результатов анализа и вывода о соответствии качества испытуемого образца хинина дигидрохлорида требованиям Br.Ph. внимательно изучите хроматограммы и рассчитайте значения R_f и R _s .

Задание 3. Письменно рассчитайте значения величин R_f и R_s для основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора, соответствующего хинину.

Сделайте письменное заключение о соответствии испытуемого образца концентрата хинина дигидрохлорида для внутривенной инфузии требованиям ФС Br.Ph.

Задание 4. Ответьте на вопросы и выполните задания по вариантам.

Что такое ТСХ?

Как проводят анализ подлинности методом ТСХ?

Что служит неподвижной фазой в ТСХ?

Как рассчитывают значение величины R _f , и что она означает?

Что служит подвижной фазой в ТСХ?

Какие существуют способы элюирования в ТСХ?

Что такое высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ)?

Как рассчитывают значение величины R_s, и что она показывает?

Что такое хроматография?

Как проводят анализ чистоты методом ТСХ?

Хроматографией называется метод разделения смесей веществ, основанный на их многократном перераспределении между двумя контактирующими фазами, одна из которых неподвижна, а другая имеет постоянное направление движения. По механизму, лежащему в основе разделения, различают адсорбционную, распределительную, ионообменную и другие виды хроматографии.

В настоящее время используются хроматографические методы анализа, представленные на рис. 6.

Результат хроматографического разделения представляется в виде хроматограммы.

Хроматограмма и хроматографические параметры. Хроматограмма представляет собой графическое или иное представление сигнала детектора на концентрацию веществ в элюате либо другую количественную величину, используемую для измерения концентрации веществ в элюате, от времени или объема подвижной фазы.

Рис. 6. Типы хроматографии

В планарной (плоскостной) хроматографии хроматограммой называют также зафиксированную на бумаге (бумажная хроматография) или ТСХ-пластинке (ТСХ) последовательность зон адсорбции веществ исходной (анализируемой) смеси.

В планарной хроматографии аналогом времени удерживания служит фактор удерживания

где a - расстояние от точки нанесения пробы до центра пятна, характеризующего зону адсорбции; b - расстояние от линии старта до линии фронта элюента.

На экспериментально определяемые значения R_f заметно влияют условия хроматографирования. Оценкой хроматографической подвижности, менее чувствительной к влиянию отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина R_st, представляющая собой отношение величины одного R_f(a) вещества к величине R_f(st) другого, принятого за стандарт:

Величины R_f и R_st используют для идентификации веществ. Обычно стандарт выбирают так, чтобы значение R_st анализируемого вещества было в пределах от 0,5 до 2,0. Схема определения этих величин приведена на рис. 7.

Рис. 7. Схема определения значений R_f и R_s: ^*х - место нанесения образца на линию старта; 1 - анализируемое вещество (а); 2 - вещество-стандарт (ст); b - расстояние от линии старта до линии фронта элюента

Данные планарной хроматографии могут быть представлены в виде денситограмм.

Хроматографический процесс, протекающий при движении подвижной фазы в тонком слое сорбента, нанесенном на инертную твердую подложку (пластинку) из соответствующего материала - стекла, металла или полимера, называется ТСХ, или хроматографией в тонком слое сорбента.

ТСХ может использоваться для анализа как однокомпонентных, так и многокомпонентных ЛС. В последнем случае подбирают условия хроматографирования, обеспечивающие разделение компонентов смеси.

Разделение может осуществляться по различным механизмам: адсорбционному, распределительному, ионообменному или какой-либо их комбинации.

Хроматографическое разделение осуществляется в результате движения анализируемых веществ в тонком слое (неподвижной фазе), растворенных в растворителе или соответствующей смеси растворителей (подвижная фаза, элюент). При разделении вещества образуются на поверхности сорбента зоны адсорбции в виде пятен (круглых или эллипсовидных) либо полос.

Подвижность вещества при его хроматографировании характеризуется величинами R_f и R_st (см. ОФС «Хроматография»).

Параметры R_f и R_st используются для идентификации веществ и для оценки разделительной способности системы.

Область применения. ТСХ используется при испытаниях ЛС на подлинность (идентификация анализируемых веществ), посторонние примеси (испытание на чистоту) полуколичественным и количественным методами.

Основные приборы и материалы:

Используемая лампа должна удовлетворять следующим требованиям теста.

Проверка работы лампы. На пластинку силикагель G наносят 5 мкл 0,04% раствора натрия салицилата в 96% спирте для ламп с максимумом излучения при 254 нм или 5 мкл 0,2% раствора натрия салицилата в 96% спирте для ламп с максимумом излучения при 365 нм в виде пятна диаметром около 5 мм; пятно должно светиться. Проверка работы ламп проводится не реже одного раза в 3 мес, а также при возникновении сомнений в правильности работы лампы с учетом срока ее эксплуатации.

При проведении анализов расстояние между лампой и хроматографической пластинкой не должно превышать расстояния, используемого при проверке работы лампы.

Примечание. Используемый спирт должен быть свободен от флуоресцирующих веществ.

Хроматографическая пластинка для ТСХ представляет собой твердую основу (стеклянную, металлическую или полимерную) с нанесенным слоем сорбента. Толщина слоя сорбента от 0,10 до 0,25 мм для аналитического варианта и от 0,5 до 2,0 мм для препаративного.

В качестве сорбента в пластинках для ТСХ чаще всего используются: алюминия оксид, модифицированный и немодифицированный силикагель, модифицированная и немодифицированная целлюлоза.

Готовые хроматографические пластинки могут содержать флуоресцентный индикатор для детектирования веществ, поглощающих в УФ-области спектра при 254 и 365 нм.

Размер частиц сорбента для классического аналитического варианта ТСХ составляет 10-20 мкм. Наряду с такими пластинками можно использовать пластинки для ВЭТСХ, содержащие сорбент с частицами размером 5-7 мкм. Такие пластинки позволяют увеличить эффективность разделения и уменьшить предел обнаружения.

Выпускаются также пластинки с монолитными сорбентами и пластинки с концентрирующей зоной (двухфазовые пластинки). Последние используются в фармацевтическом анализе для разделения сложных и гетерогенных смесей (экстракты из лекарственного растительного сырья, растворы таблеток со вспомогательными компонентами, мягкие лекарственные формы, смеси, содержащие пигменты, суспензии и др.).

Предварительная подготовка пластинок. В некоторых случаях перед хроматографированием предусмотрена предварительная обработка пластинок. Это может быть предварительное хроматографирование чистых пластинок в соответствующем растворителе, импрегнирование пластинок при помощи опрыскивания, погружения или элюирования. При необходимости перед использованием пластинки активируют нагреванием в сушильном шкафу в течение 1 ч при температуре 100-105 °С. Описание предварительной обработки пластинок должно быть приведено в ФС.

Хроматографические камеры используют для вертикального или горизонтального элюирования с герметичными крышками. Камеры для горизонтального элюирования снабжены также устройствами для подачи подвижной фазы на пластинку. Использование камеры для горизонтального элюирования позволяет осуществлять одновременное элюирование с противоположных сторон пластинки, что увеличивает производительность анализа в два раза по сравнению с использованием камеры для вертикального элюирования. При этом также уменьшается расход подвижной фазы приблизительно в 10 раз. В горизонтальной камере движение подвижной фазы по пластинке происходит только за счет капиллярных сил, вклад гравитации при этом отсутствует, что повышает эффективность разделения по сравнению с камерами для вертикального элюирования.

Подвижные фазы (элюенты) должны быть предпочтительно малотоксичными, содержать минимум компонентов, не вступать в химические реакции ни с сорбентом (неподвижной фазой), ни с компонентами разделяемой смеси. Подвижные фазы должны также достаточно быстро испаряться с поверхности хроматограмм после элюирования.

Для подавления диссоциации полярных молекул компонентов разделяемой смеси к подвижной фазе добавляют вещества кислого или основного характера (модификаторы).

Нанесение проб осуществляют:

Нанесение осуществляют двумя способами: в виде пятен 2-5 мм диаметром (1-2 мм на высокоэффективных пластинках) с промежутками между пятнами не менее 10 мм и в виде полос длиной 10-20 мм (5-10 мм на высокоэффективных пластинках) с промежутком между ними не менее 10 мм. Расстояние до линии старта от нижнего края пластинки должно составлять не менее 10 мм. Если в методике ФС предусмотрено использование как обычных, так и высокоэффективных пластинок, условия для высокоэффективных пластинок должны быть указаны в квадратных скобках. Расстояния на стартовой линии от боковых краев пластинки до мест нанесения первой и последней проб должны составлять не менее 10 мм. В процессе нанесения проб недопустимо повреждение сорбента на линии старта. Подсушивание нанесенных проб осуществляют в токе холодного или теплого воздуха либо на специальном столе с электроподогревом.

Способы элюирования. Используют следующие способы элюирования: восходящее элюирование (одно- и многоступенчатое, одно- и двумерное - с поворотом пластинки на 90 или 180°) и горизонтальное.

Восходящая хроматография. Если не указано иначе в ФС, пластинку с нанесенными пробами помещают вертикально в камеру. При необходимости камеру предварительно насыщают парами подвижной фазы (в этом случае в ФС должно быть указано время насыщения). Для этого перед проведением анализа обычно внутренние стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, смоченной подвижной фазой. Уровень подвижной фазы должен быть расположен ниже линии старта. Камеру закрывают и проводят процесс при 20-25 °С в защищенном от света месте. После прохождения фронтом подвижной фазы расстояния, указанного в нормативном документе, пластинку вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, проявляют и детектируют зоны адсорбции указанным способом.

При проведении двумерной хроматографии пластинку сушат после хроматографирования в первом направлении и хроматографируют в направлении, перпендикулярном первому.

Горизонтальная хроматография. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру и направляют поток подвижной фазы из лотка в камеру согласно инструкции к прибору для горизонтального элюирования. Процесс проводят при 20-25 °С (если это указано в ФС, одновременно с противоположных сторон пластинки). Когда подвижная фаза пройдет расстояние, указанное в нормативном документе, пластинку вынимают, сушат до удаления следов растворителей, проявляют и детектируют зоны адсорбции указанным способом.

Двухмерную хроматографию выполняют, как указано в разделе «Восходящая хроматография».

Визуальная оценка. Обнаружение (детектирование) зон адсорбции после проведения качественной и полуколичественной ТСХ осуществляют следующими способами:

Идентификация. Испытание на подлинность (идентификацию) анализируемых веществ проводят при одновременном хроматографировании одинакового количества анализируемого вещества и стандартного образца на одной и той же хроматографической пластинке. Основную зону адсорбции (пятно или полосу) на хроматограмме испытуемого раствора сравнивают с основной зоной адсорбции (пятном или полосой) на хроматограмме стандартного раствора (раствора сравнения), сравнивая окраску (цвет флуоресценции), размер и величину фактора Rj- соответствующих зон адсорбции (см. ОФС «Хроматография»).

Испытание на посторонние примеси. При испытаниях на чистоту основное вещество и примеси в условиях хроматографирования должны иметь разные значения Rj.

При этом о степени чистоты анализируемого вещества можно судить по величине и интенсивности зон адсорбции обнаруживаемых на хроматограмме примесей. Их содержание может быть определено полуколичественно. Для этого на пластинку наносят определенное количество анализируемого вещества и свидетелей. Для определения идентифицированных примесей в качестве свидетелей используют стандартные образцы идентифицированных примесей в количествах, соответствующих их предельно допустимому содержанию. Для определения неидентифицированных примесей чаще всего используют растворы сравнения, приготовленные путем разведения испытуемого раствора. Содержание примеси в анализируемом ЛС оценивают, сравнивая зону адсорбции примеси по совокупности величины и интенсивности поглощения или окраски с соответствующими зонами адсорбции на хроматограмме свидетелей. Дополнительное пятно (пятна) на хроматограмме испытуемого раствора сравнивают визуально с дополнительным пятном (пятнами) на хроматограмме стандартного раствора, содержащего примесь (примеси), или с пятном на хроматограмме раствора сравнения, приготовленного из разбавленного испытуемого раствора.

Эффективность разделения увеличивается как вследствие увеличения площади раздела подвижной и неподвижной фаз за счет уменьшения диаметра частиц сорбента, так и благодаря большей однородности размеров этих частиц. Применяют пластинки для ВЭТСХ, выполненные как в нормально-фазовом (полярная неподвижная фаза), так и в обращенно-фазовом (неполярная неподвижная фаза) вариантах.

По сравнению с классической ТСХ использование высокоэффективных пластинок позволяет:

Применение ВЭТСХ обеспечивает получение более компактных зон адсорбции разделяемых соединений, что улучшает метрологические характеристики количественного определения с помощью сканирующей хроматоденситометрии.

ТСХ представляет собой метод разделения, в котором используются две фазы. Неподвижная фаза состоит из подходящего материала, нанесенного в виде стандартизованного тонкого слоя и зафиксированного на основе (пластинке или пластине) из стекла, металла или пластмассы. Перед хроматографированием растворы анализируемых веществ наносят на пластинку. Разделение основано на процессах адсорбции, распределения, ионного обмена или на их комбинации и осуществляется посредством перемещения в тонком слое (неподвижной фазе) исследуемых веществ, растворенных в растворителе, или соответствующей смеси растворителей (подвижной фазе).

Пластинки. Хроматографирование проводят с использованием пластинок, полученных в соответствии с описанием в разделе 4.1.1 «Реактивы».

Предварительная подготовка пластинок. При необходимости перед использованием пластинки либо промывают путем хроматографирования в подходящем растворителе, либо импрегнируют посредством элюирования, погружения или опрыскивания, либо активируют в термостате при температуре от 100-105 °C в течение 1 ч.

Хроматографическая камера представляет собой емкость с плотно подогнанной крышкой и плоским дном или дном с двумя желобами из инертного прозрачного материала, соответствующими по размеру используемым пластинкам. Для горизонтального элюирования хроматографическая камера имеет желоб для подвижной фазы и дополнительно содержит устройство для подачи подвижной фазы к неподвижной.

Микропипетки, микрошприцы, калиброванные капилляры или другие устройства, пригодные для нанесения растворов.

Проявляющие реактивы применяют для обнаружения разделенных веществ посредством опрыскивания, обработки парами или погружения.

Вертикальное элюирование. Стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой. Подвижную фазу наливают в камеру в количестве, достаточном и для импрегнирования фильтровальной бумаги, и для хроматографирования. Для насыщения хроматографическую камеру с подвижной фазой закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 ч при температуре 20-25 °C. Объемы растворов анализируемых веществ, указанные в частной статье, наносят небольшими порциями в виде полос или круглых пятен на линию, параллельную нижнему краю пластинки, отступая на необходимое расстояние от ее боковых краев. Расстояние между точками нанесения проб должно быть не менее 10 мм. После испарения растворителей из нанесенных проб пластинку помещают в хроматографическую камеру, по возможности вертикально. При этом линия старта с нанесенными пятнами или полосами должна быть выше уровня подвижной фазы. Камеру закрывают, оставляют ее при температуре 20-25 °C в защищенном от прямых солнечных лучей месте. После прохождения подвижной фазой расстояния, указанного в частной статье, пластинку вынимают, сушат и проявляют пятна способом, указанным в частной статье. В случае двумерной хроматографии пластинку сначала хроматографируют в одном направлении, а затем после высушивания - во втором направлении, перпендикулярном первому.

Горизонтальное элюирование. Объемы растворов анализируемых веществ, указанные в частной статье, наносят небольшими порциями на линию, параллельную нижнему краю пластинки, в виде круглых пятен (диаметр от 1 до 2 мм) или полос (длина от 5 до 10 мм и ширина от 1 до 2 мм), отступая на необходимое расстояние от боковых краев пластинки. Расстояние между точками нанесения проб должно быть не менее 5 мм. После испарения растворителей из нанесенных проб в желоб хроматографической камеры вводят с помощью шприца или пипетки достаточное количество подвижной фазы, помещают пластинку горизонтально в хроматографическую камеру и подсоединяют устройство для подачи подвижной фазы в соответствии с инструкцией производителя. Если указано в частной статье, пластинку элюируют, начиная одновременно с двух концов. Камеру закрывают и проводят хроматографирование при температуре от 20-25 °C. После прохождения подвижной фазой расстояния, указанного в частной статье, пластинку вынимают, сушат и проявляют пятна указанным способом. В случае двумерной хроматографии пластинку сначала хроматографируют в одном направлении, а затем после высушивания - во втором направлении, перпендикулярном первому.

Идентификация. Основное пятно на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном на хроматограмме, полученном для раствора стандартного образца (раствора сравнения), оценивая окраску (цвет флуоресценции), размер и относительную величину удерживания ® обоих пятен.

Относительную величину удерживания (R_f) определяют как отношение расстояния от точки нанесения пятна до центра пятна после хроматографироваиия к расстоянию, пройденному фронтом растворителя от точки нанесения.

Проверка разделяющей способности неподвижной фазы для идентификации. Обычно для оценки пригодности достаточно испытания на пригодность неподвижной фазы, описанного в разделе ГФ 4.1.1 «Реактивы». В особых случаях дополнительные требования указывают в частных статьях.

Испытание на родственные примеси. Дополнительное пятно (пятна) на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном (пятнами) на хроматограмме, полученной для раствора сравнения. В качестве стандартного образца для приготовления раствора сравнения используют как саму примесь (примеси), так и различные разбавления испытуемого раствора.

Проверка разделяющей способности. Требования для проверки разделяющей способности приводят в соответствующих частных статьях.

Проверка чувствительности. Чувствительность считается удовлетворительной, если пятно или полоса четко видны на хроматограмме наиболее разбавленного раствора сравнения.

Пластинки. Допускается использование пластинок, приготовленных в промышленных условиях, если они отвечают требованиям раздела 4.1.1 «Реактивы», а также выдерживают испытание «Проверка пригодности хроматографической системы», описанное в частной статье.

Хроматографическая камера. В необходимых случаях допускается использование хроматографических камер других типов с описанием их в частных статьях. Допускаются другие условия активации пластинок, описанные в частных статьях.

При отсутствии других указаний в частной статье хроматографическое разделение выполняют восходящим способом в насыщенной атмосфере. Предпочтительнее использовать такие подвижные фазы, которые обеспечивают величины R испытуемых соединений в пределах от 0,3 до 0,7. При отсутствии других указаний в частной статье пятна или полосы наносят на расстоянии не менее 15 мм от нижнего края и не менее 10 мм от боковых краев пластинки. Слой жидкости в хроматографической камере должен быть таким, чтобы после помещения в него пластинки пятна или полосы находились над уровнем жидкости. Если условия насыщения хроматографической камеры, нанесения пятен или хроматографирования отличаются от указанных выше, они должны быть описаны в частной статье.

Результаты анализа методом TCX считаются достоверными, если выполняются требования испытания «Проверка пригодности хроматографической системы». Хроматографическая система считается пригодной, если:

При контроле примесей нецелесообразно включение в частную статью требования отсутствия пятна контролируемой примеси на хроматограмме испытуемого раствора. Методом TCX определяют: содержание идентифицируемых примесей; общее содержание примесей.

Контроль идентифицируемых примесей. Такой контроль применяют в тех случаях, когда содержание каких-то конкретных примесей, возникающих в процессе производства препарата или его хранения, должно быть ограничено ввиду их токсичности или по другим соображениям. При контроле идентифицируемых примесей обычно сравнивают пятна регламентируемых примесей на хроматограммах испытуемого раствора и растворов сравнения.

Типичная регламентация содержания примеси выглядит в этом случае следующим образом: «На хроматограмме испытуемого раствора, кроме основного пятна, допускается наличие дополнительного пятна, расположенного на уровне пятна на хроматограмме раствора сравнения и не превышающего его по величине и интенсивности поглощения или окраски (…​%)».

Контроль общего содержания примесей. В тех случаях когда примеси не являются особо токсичными, часто не так важно знать их истинное содержание. Необходимо лишь установить, что это содержание не превосходит определенного уровня. В таких случаях используют метод внутренней нормализации - в качестве растворов сравнения обычно используют растворы самой испытуемой субстанции различной концентрации, а содержание примесей находят в пересчете на эту субстанцию.

В зависимости от количества различных растворов субстанции, наносимых на хроматограмму в виде растворов сравнения, контроль общего содержания примесей может быть одноуровневым, двухуровневым и трехуровневым.

Типичная регламентация содержания примеси в одноуровневом варианте указывается следующим образом: «На хроматограмме испытуемого раствора любое пятно, кроме основного пятна, не должно превышать по величине и интенсивности поглощения или окраски пятно на хроматограмме раствора сравнения (…​%)».

Типичная регламентация содержания примеси в двухуровневом варианте выглядит следующим образом: «На хроматограмме испытуемого раствора любое пятно, кроме основного пятна, не должно превышать по величине и интенсивности поглощения или окраски основное пятно на хроматограмме раствора сравнения 1 (…​%), и только одно пятно может быть интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения 2 (…​%)».

Типичная регламентация содержания примеси в трехуровневом варианте выглядит следующим образом: «На хроматограмме испытуемого раствора любое пятно, кроме основного пятна, не должно превышать по величине и интенсивности поглощения или окраски основное пятно на хроматограмме раствора сравнения 1 (…​%), и только одно пятно может быть интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения 2 (…​%), и не более чем (указанное число) пятен могут быть интенсивнее основного пятна на хроматограмме раствора сравнения 3 (…​%)».

В двух- и трехуровневом вариантах возможна регламентация и общей суммы примесей.

ГФ - сборник обязательных общегосударственных стандартов и положений, нормирующих качество ЛС. Она основана на принципах отечественного здравоохранения и отражает современные достижения в области фармации, медицины, химии и других смежных наук. Ее требования, предъявляемые к ЛС, являются обязательными для всех предприятий и учреждений, которые изготавливают, хранят, контролируют качество и применяют ЛС (независимо от форм собственности и ведомственной подчиненности).

История создания первых русских фармакопей начинается со второй половины XVIII в. В 1765 г. впервые в России издана Военная фармакопея, а в 1778 г. - первая официальная русская ГФ. Последняя содержала описание 770 ЛС минерального, растительного и животного происхождения, а также многокомпонентных ЛС. В 1798 г. вышла в свет вторая Государственная русская фармакопея, изданная, как и первая, на латинском языке (переведена на русский язык в 1802 г.).

После 1798 г. в России переиздавались Военные фармакопеи (1808, 1812, 1818, 1840 гг.), Морская фармакопея (1864 г.), Фармакопеи для бедных (1807, 1829, 1845, 1860 гг.) и Придворные фармакопеи (1825, 1872, 1874 гг.).

Каждая из фармакопей отражала уровень развития фармацевтического анализа. В первой и второй русских фармакопеях рекомендовались главным образом органолептические методы исследования (определение цвета, запаха, вкуса) и приводилось описание важнейших свойств ЛС.

Выход в свет в 1866 г. нового издания Российской фармакопеи стал исторической вехой в развитии отечественной фармации. Эта фармакопея включала 906 статей, в которых описаны минеральные вещества, алкалоиды, гликозиды, растительное сырье, готовые ЛС. В новой фармакопее наряду с органолептическими методами контроля лекарств были представлены и химические. В фармакопее 1866 г. приведен список сильнодействующих средств, указаны правила их хранения.

Фармакопея 1866 г. стала первым изданием Российской фармакопеи. Затем вышли в свет II, III, IV, V, VI издания, соответственно в 1871, 1880, 1891, 1902 и 1910 гг.

Первое издание советской фармакопеи, названное VII изданием ГФ СССР (ГФ VII), было выпущено в июле 1926 г. Эта фармакопея отличалась от предыдущих изданий повышенным научным уровнем, предлагала замену лекарственных веществ, изготавливаемых из импортируемого сырья, на ЛС отечественного производства. В ГФ VII было включено 116 статей на новые ЛС и исключено 112 статей. Существенные изменения были внесены в требования к контролю качества ЛС. Был предусмотрен ряд новых методов химической и биологической стандартизации ЛС взамен органолептического контроля, включено 30 общих статей в виде приложений, даны описания некоторых общих реакций, применяемых для определения качества ЛС, и т.д. Таким образом, в ГФ VII первостепенное внимание было уделено совершенствованию контроля качества ЛС. Этот принцип нашел свое дальнейшее развитие в последующих изданиях фармакопеи.

В 1949 г. вышло в свет VIII издание, а в октябре 1961 г. - IX издание ГФ СССР.

X издание ГФ (ГФ X), введенное в действие с 1 июля 1969 г., отразило новые успехи отечественной фармацевтической и медицинской науки и промышленности. Принципиальное отличие ГФ X от предыдущих изданий заключалось в переходе на новую международную терминологию лекарственных веществ, а также существенное обновление (на 30%) ее номенклатуры. В ГФ X значительно повышены требования к качеству ЛС, расширена область применения физико-химических методов.

После выхода в свет ГФ X существенно изменилась номенклатура ЛС, повысились требования к их качеству, были разработаны новые высокоэффективные способы фармакопейного анализа. Число исключенных из номенклатуры устаревших, малоэффективных, недостаточно безвредных ЛС составило около 1000 наименований. Все это потребовало от Фармакопейного комитета внесения соответствующих дополнений и изменений в НД, создания новых ФС.

Начиная с 1971 г. Министерство здравоохранения СССР на каждое новое лекарственное вещество и лекарственную форму, разрешенную к применению, утверждает ФС или Временную ФС (ВФС), а на общие методы анализа - ОФС. Все они имеют одинаковую юридическую силу и законодательный характер наряду с ГФ X. Проведенная работа представляла собой подготовительный этап к выпуску нового, XI издания ГФ.

В 1987 г. изданы 1-й и 2-й выпуски ГФ XI. В соответствии с приказом Министерства здравоохранения СССР 1-й выпуск введен в действие с 1 января 1988 г. С этого времени потеряла силу вся ранее действовавшая НД, в том числе соответствующие статьи ГФ X, замененные на статьи 1-го выпуска ГФ XI. Остальные материалы, содержащиеся в ГФ X (с учетом вносимых в них в установленном порядке изменений), сохраняли силу до выхода в свет соответствующих выпусков и статей ГФ XI.

В ГФ XI впервые дополнительно введено 10 статей и разделов на такие методы анализа, как ГХ, ВЭЖХ, метод определения степени белизны порошкообразных ЛС, метод фазовой растворимости, ЯМР-спектроскопия, радиоактивность, электрофорез, эмиссионная и атомно-абсорбционная плазменная спектрометрия, люминесцентная микроскопия и определение примесей химических элементов в радиофармацевтических препаратах. Большинство остальных статей по общим методам анализа дополнены или подвергнуты переработке в соответствии с достижениями в области фармацевтического анализа на тот период.

В 1990 г. вышел в свет 2-й выпуск ГФ XI, содержащий два раздела: «Общие методы анализа» и «Лекарственное растительное сырье». Приведены общие статьи на лекарственные формы. Всего в раздел «Общие методы анализа» включено 40 статей, из них шесть - впервые, а остальные переработаны и дополнены с учетом современного развития фармацевтического анализа.

Расширена по сравнению с ГФ X номенклатура лекарственных растений, разрешенных к применению в медицине. Во многие статьи впервые включены методики идентификации и количественного определения содержащихся в лекарственном растительном сырье действующих веществ, что позволило дать объективную оценку их качества.

После введения в действие 1-го и 2-го выпусков ГФ XI Фармакопейный комитет проводил систематическую работу по пересмотру ФС на ЛС, выпускаемые в России. Были внесены изменения, направленные на повышение качественности лекарственных веществ, использование более объективных методов анализа. В частности, расширилось применение УФ- и ИК-спектрофотометрии при установлении подлинности, ТСХ, ГХ и ВЭЖХ для испытаний на чистоту. Введены более узкие интервалы температуры плавления, уточнена растворимость многих лекарственных веществ, введены новые растворители в раздел «Растворимость». Определение кислотности и щелочности растворов заменено более объективным параметром - установлением рН. Более жесткие критерии применены для установления потери в массе при высушивании, определения сульфатной золы к тяжелым металлам, контроля прозрачности и цветности растворов и др.

Разработанные и утвержденные новые ОФС и ФС стали основой создания ГФ XII издания (2007).

В ноябре 2015 г. в Федеральной электронной медицинской библиотеке была опубликована ГФ XIII (http://femb.ru/feml).

В ГФ XIII издания вошло 229 ОФС и 179 ФС.

Впервые в ГФ XIII введено 99 ОФС, среди которых 30 - на методы анализа, 5 - на лекарственные формы и 12 - на методы определения фармацевтико-технологических показателей лекарственных форм. Кроме того, введены 2 ОФС на лекарственное растительное сырье, 3 - на методы его анализа, 7 - на группы иммунобиологических ЛП и 31 - на методы их испытаний, 3 - на группы ЛП из крови и плазмы крови человека и животных, 9 - на методы анализа ЛП, полученных из крови и плазмы крови человека и животных.

Приказом Министерства здравоохранения РФ от 29 октября 2015 г. № 771 предусмотрено введение в действие ОФС и ФС, включенных в ГФ XIII издания, с 1 января 2016 г.

Установлено, что ОФС и ФС, утвержденные этим приказом, ОФС и ФС, утвержденные приказом Министерства здравоохранения РФ от 21 ноября 2014 г. № 768 «Об утверждении общих фармакопейных статей и фармакопейных статей», составляют ГФ XIII издания.

Идея создания Международной фармакопеи вызвана необходимостью унификации номенклатуры и требований к качеству ЛС во всех странах мира. Первые попытки реализации этой идеи относятся к концу XIX - началу XX в. Они завершились ратификацией в 1906 г. в Брюсселе 19 государствами соглашения «О единообразном приготовлении сильнодействующих лекарственных средств». Второе международное соглашение было ратифицировано там же в 1929 г. Оно включало 41 статью и содержало описание 77 лекарственных веществ и их комбинаций. Это соглашение касалось, главным образом, общих принципов получения галеновых препаратов, номенклатуры ЛС и их высших доз.

Международные соглашения стали основой создания Международной фармакопеи, национальных и региональных фармакопей. ВОЗ при ООН образовала в 1947 г. Комитет экспертов и Секцию унификации фармакопеи. Итогом ее работы было создание в 1951 г. первого тома Международной фармакопеи, который включал 218 статей и 43 приложения. Основная цель Международной фармакопеи - поддержание качества ЛС в развивающихся странах. Отличие Международной фармакопеи от национальных фармакопей заключается в том, что ее требования имеют не законодательный, а рекомендательный характер. Таким образом, Международная фармакопея - это своеобразная основа для разработки национальных фармакопей. Требованиями к ЛС, изложенными в Международной фармакопее, руководствуются страны, не имеющие своих фармакопей или импортирующие ЛС из других стран. Учитывая, что из 150 стран мира - членов ООН только 33 имеют свои национальные или региональные фармакопеи, значение Международной фармакопеи в деле улучшения контроля качества лекарств велико. Однако влияние Международной фармакопеи в РФ в настоящее время минимально. Российские специалисты мало обращают внимания на ее стандарты и редко ссылаются в научных публикациях (www.who.int/medicines/publications/pharmacopoeia).

Систематически через каждые 5-8 лет осуществляют выпуск национальных фармакопей такие крупные государства, как США, Великобритания, Франция, Германия, Япония, Италия, Швейцария и некоторые другие. Первыми в создании региональной фармакопеи стали Скандинавские страны (Норвегия, Финляндия, Дания и Швеция). Скандинавская фармакопея, изданная в 1965 г., приобрела законодательный характер для этих стран.

Восемь западноевропейских государств (Великобритания, Германия, Франция, Италия, Бельгия, Люксембург, Нидерланды и Швейцария), входящих в Европейское экономическое сообщество (ЕЭС), создали в 1964 г. Фармакопейную комиссию. Она подготовила и в 1969 г. выпустила в свет первый, а в 1971 г. - второй том Фармакопеи ЕЭС (в 1973 г. выпущено дополнение к этим изданиям). В 1976 г. Фармакопея ЕЭС была признана Скандинавскими странами, Исландией и Ирландией.

Фармакопея ЕЭС имеет законодательный характер, но не заменяет национальные фармакопеи этих стран. Европейская фармакопея (Eur.Ph.) имеет классическую структуру: содержит ОФС и ФС. Но ее особенностью является то, что она не содержит ФС на препараты. В ней имеются ФС только на субстанции. До настоящего времени отечественные регуляторы принимали стандарты Eur.Ph. в качестве основного ориентира, что нашло свое отражение в ГФ XII, а также в НД на отечественные препараты (www.edqm.eu).

Британская фармакопея (Br.Ph.) издается с 1864 г. и содержит ФС на стандарты для всех лекарственных препаратов, выпускаемых фармацевтической промышленностью Великобритании. Переиздается и обновляется ежегодно. Действует Br.Ph. на территории Соединенного Королевства вместе с Eur.Ph. ФС на субстанции в Br.Ph. практически полностью повторяют соответствующие ФС из Eur.Ph. ОФС по большей части также дублируют Eur.Ph., хотя есть и свои собственные испытания. ФС на готовую продукцию (препараты) в Br.Ph. свои собственные, поскольку в Eur.Ph. соответствующие статьи отсутствуют. Если в Br.Ph. какой-либо текст целиком или частично дублирует Eur.Ph., это соответствующим образом помечено. В нашей стране интерес к Br.Ph. связан с тем, что она описывает требования к дозированным лекарственным формам. Эти требования часто принимают в качестве основного ориентира при рассмотрении НД (www.pharmacopoeia.gov.uk).

Фармакопея США - Национальный формуляр (USP-NF). Структура ФС сходна с Международной фармакопеей: название ЛС (на английском языке), графическая и структурная формулы, молекулярная масса, рациональное химическое название. Затем указаны содержание лекарственных веществ (%), упаковка и правила хранения, рекомендуемый стандартный образец, способы идентификации ЛС, его температура плавления, потеря в массе при высушивании, остаток после прокаливания, испытания на присутствие примесей, количественное определение.

Данный документ, как следует из его названия, на самом деле представляет собой сборник, включающий два разных стандарта: фармакопею и национальный формуляр. Последний определяет требования к ряду вспомогательных и других веществ, не являющихся лекарственными. Таким образом, Национальный формуляр США не является формулярным (ограничительным) списком ЛС, как можно было бы предположить из названия.

USP-NF выпускает единственная в мире негосударственная фармакопейная организация - Фармакопейная конвенция США. Однако требования этого стандарта признаются на государственном уровне и определяют минимальный уровень качества, обязательный для организаций, производящих или поставляющих ЛС в США. Не будет преувеличением сказать, что Фармакопейная конвенция США - одна из самых влиятельных фармакопейных организаций в мире. Ее стандарты качества действуют не только в США и Канаде, но и принимаются в ряде других стран, активно производящих ЛС (Индия, Китай). Фармакопейная конвенция США - это некоммерческая организация (not for profit organization), но ее финансовые возможности и влияние во всем мире (в том числе и в Европе) очень велики. Конвенция публикует ряд периодических изданий, посвященных стандартам качества ЛС, разрабатывает и продает по всему миру богатейшую коллекцию фармакопейных химических стандартных образцов, качество которых признается практически во всех странах, проводит фармакопейные образовательные курсы в США и за рубежом, предоставляет услуги по проверке пищевых добавок, ингредиентов биологически активных добавок, вспомогательных веществ. Это позволяет ей содержать штат, насчитывающий около 600 сотрудников, а также привлекать к своей деятельности специалистов-волонтеров не только из США, но и других стран. Это позволяет развивать USP-NF в полном соответствии с самыми современными направлениями в области фармации (www.usp.org).

Переводное издание USP-NF не имеет законодательного значения в РФ, но значительное число воспроизведенных ЛС анализируют по методикам, описанным, в частности, в USP-NF. Точно так же производители дженериков часто ориентируются на этот документ при разработке НД.

Создание ГФ PK осуществилось впервые за всю многовековую историю становления и развития казахской государственности. ГФ PK является таким же символом суверенного Казахстана, как и флаг, герб и гимн Республики.

В период существования Казахстана в составе России, а затем СССР, государственный контроль за качеством ЛС проводили благодаря стандартам и положениям Государственной русской фармакопеи, а начиная с 1920 г. - ГФ СССР. Последние издания ГФ СССР - X (1969 г.) и XI (1988 и 1990 гг.) - сохранили свой законодательный характер в Республике и до сего времени. Однако в новых экономических условиях развитие фармацевтического рынка Казахстана имеет свои особенности, которые не могут быть в полной мере регламентированы прежними правовыми актами, в том числе советскими изданиями фармакопеи. Кроме того, расширение номенклатуры ЛС, повышение требований к их качеству, значительный прогресс в технике аналитического эксперимента, произошедшие в последнее десятилетие, неизбежно привели к устареванию многих положений ГФ СССР XI.

При создании и развитии национальных фармакопейных стандартов соблюдались основные принципы:

Впервые необходимость создания собственного национального стандарта была отмечена Указом Президента РК, имеющим силу закона, «О лекарственных средствах» № 2655 от 23 ноября 1995 г. Дальнейшее развитие вопрос создания ГФ PK нашел в Законе «О лекарственных средствах» № 522-11 от 13 января 2004 г.

ГФ PK создана при государственной поддержке и финансировании Министерством здравоохранения РК (2005-2008 гг.). ГФ PK и ее законодательный статус регламентированы Кодексом РК «О здоровье народа и системе здравоохранения».

В соответствии с законом ГФ РК - это свод государственных стандартов и положений, нормирующих качество и безопасность ЛС, зарегистрированных и разрешенных к применению в установленном порядке. ГФ PK наделена законодательным статусом. Она устанавливает тот уровень требований к безопасности и качеству ЛС, который государство гарантирует своим гражданам.

Требования ГФ PK являются обязательными для всех предприятий и организаций РК, занимающихся производством, изготовлением, реализацией, хранением, контролем и применением ЛС.

В 1996 г. РК взят курс на вступление во Всемирную торговую организацию (ВТО). В соответствии с этим национальные стандарты качества ЛС должны быть гармонизированы с международными стандартами в данной области, прежде всего с требованиями Eur.Ph.

Вступление РК в июне 2006 г. в статус страны-наблюдателя в Комиссии Eur.Ph. позволяет республике решать вопросы:

В настоящее время регуляторными органами Республики и производителями ЛС достигнуто ясное понимание неизбежности перехода к современным требованиям качества, так как только строгое следование им позволит обеспечить конкурентоспособность и экспортоориентированность отечественного производства. Реальным воплощением тенденций в данной области стали разработка и утверждение в декабре 2006 г. национальных стандартов в сфере обращения ЛС, гармонизированных с международными стандартами: GLP, GCP, GMP, GDP и GPP.

Ph.Eur регламентирует качество ЛС, произведенных в соответствии с требованиями GMP. В переходный период введение требований Eur.Ph. при отсутствии реально выполняемых правил GMP не представляется разумным решением проблемы качества отечественных ЛС. Кроме того, значительное присутствие на рынке Казахстана фармацевтической продукции из СНГ и развивающихся стран, доступной для большинства населения по ценовому предложению, ограничивает в полной мере применение европейских стандартов качества.

В связи с таким положением создание национальной фармакопеи, основанной на принципах и подходах Ph.Eur, но учитывающей особенности развития фармацевтического рынка Республики и отечественного производства ЛС, является насущным требованием времени. Эта концепция может быть реализована путем гармонизации национальных требований к качеству ЛС с Ph.Eur., с одной стороны, и ГФ СССР XI, с другой. Кроме того, подобный подход согласуется с решениями Межгосударственной комиссии по стандартизации, регистрации и контролю качества ЛС, изделий медицинского назначения и медицинской техники государств - участников СНГ.

В свете изложенной выше концепции структура ГФ PK предусматривает двухчастность ФС, как общих, так и частных. Первая часть статей идентична соответствующей статье Eur.Ph., а следующая за ней часть, обозначенная гербом РК и называемая национальной, отражает особенности подходов к качеству ЛС в Республике, производство которых не осуществлялось в соответствии с правилами GMP. Кроме требований ГФ СССР XI, она включает альтернативные методики, важные информационные и методические материалы, необходимые для пользователей фармакопеи.

Необходимость дифференцирования европейской и национальной частей в ГФ PK представляется важным условием соблюдения прав Eur.Ph. на интеллектуальную собственность. Подобная концепция создания ГФ PK согласована с Комиссией Eur.Ph. Аналогичные принципы положены в основу конструкции фармакопеи ряда стран ЕЭС, когда национальная часть дополняет общеевропейские требования, не противореча им. В ряде стран национальные требования к качеству ЛС изданы в виде специального дополнения.

Важным в понимании является категория соответствия требованиям ГФ PK. ЛС, произведенные согласно Правилам GMP, должны соответствовать требованиям общей (европейской) части статей ГФ PK. Требования национальной части относятся к ЛС, не произведенным согласно Правилам GMP. В случаях отсутствия национальной части требования статей ГФ PK распространяются на все ЛС независимо от производства.

В основу ГФ PK положены принципы и подходы Eur.Ph. ГФ PK предполагает изложение материала в редакции, по возможности близкой Eur.Ph. Нумерация разделов и названия монографий, химические названия веществ, реактивов, единицы измерения физических величин, формулы расчета практически идентичны приведенным в Eur. Ph. Изменение претерпели лишь некоторые буквенные обозначения физических величин, подставляемые в формулы расчета, ввиду их традиционности использования в НД. Из тех же соображений расширен круг аббревиатур и сокращений, применяемых в ГФ PK. С выходом в свет ГФ PK теряет свою силу ГФ СССР, что вполне логично в силу гармонизированности с ней национальной фармакопеи. В частности, выпуск первого тома ГФ PK приводит к потере законодательного статуса общих статей ГФ СССР. Это, в свою очередь, требует указания ссылок в нормативных документах РК лишь на ГФ PK. Исключение может быть сделано в особых случаях, когда необходимый материал не освещен в национальной фармакопее, например при использовании определенных реактивов, стандартных растворов и др. В этих случаях текст НД должен предусматривать полное их описание или приготовление.

Гармонизация ГФ PK с ведущими фармакопеями мира осуществлялась посредством:

Гармонизация с базовой фармакопеей (EP) осуществлялась по следующим принципам: признание терминологии Eur.Ph.; использование полного механизма гармонизации фармакопейных монографий; двухчастность монографий ГФ PK (европейская и национальная части); своевременное обновление в соответствии с текущим изданием.

Условиями гармонизации с Br.Ph. и USP служит:

В РК соблюдается приоритетность фармакопей:

Текст ГФ PK изложен на двух языках: на государственном - казахском; на языке, официально употребляемом наравне с казахским, - русском.

ГФ PK состоит из трех томов. Первый том содержит ОФС, второй включает частные ФС (монографии).

ОФС в первом томе содержат наиболее общие требования, распространяющиеся на:

Частные ФС (монографии) во втором томе регламентируют необходимые требования к показателям качества и определяют методики испытаний для контроля качества:

Второй том ГФ включает монографии на:

Третий том ГФ PK содержит новые разделы: гомеопатические, радиофармацевтические препараты и исходные материалы для радиофармацевтических препаратов; лекарственное растительное сырье и лекарственные растительные препараты; медицинские изделия (катетеры внутрисосудистые и шовные материалы); биоэквивалентность.

Таким образом, третий том ГФ PK включает 304 новых раздела, текста и монографии:

В числе частных монографий:

Третий том ГФ PK гармонизирован с текущими изданиями Eur.Ph. и USP. Общее число гармонизированных монографий составляет 251. С Базовой фармакопеей гармонизированы по полному механизму 197 монографий (общие и частные), с Eur.Ph. (2014) - 4 по селективному механизму (частные монографии на ЛП), с USP - 32 по полному механизму (общие и частные монографии на субстанции для фармацевтического применения) и 28 - по селективному механизму (частные монографии на ЛП).

Отличительные признаки ГФ PK от Eur.Ph.:

Важно отметить, что именно существенные отличия позволили легитимировать ГФ PK как национальную фармакопею. В противном случае разрешение EDQM было бы дано на издание Eur.Ph. на казахском языке, аналогично тому, как это было сделано в 27 странах мира.

В позиционировании ГФ PK на глобальном уровне стоят следующие задачи:

В РФ имеется определенная база нормативных правовых документов, регламентирующих контроль качества в сфере обращения ЛП, но считать ее исчерпывающей неверно.

Создан ряд организаций в рамках ВОЗ, ЕС, Евразийского экономического союза и других международных организаций по контролю разработки, производства и реализации ЛС. Установлены нормативные правовые акты и межгосударственные соглашения, направленные на обеспечение контроля качества в сфере обращения ЛС. Среди них важнейшими являются стандарты GLP, GCP, GMP и GPP.

Контрольно-разрешительная система охватывает практически все этапы обращения и контроля качества ЛС, от создания до реализации, включая: